组培资料整理

绪论名词解释1.外植体(explant)：由活植物体(invivo)上切取下来以进行培养的那部分组织或器官。离体培养的材料，包括：器官、组织、细胞、原生质体。2.愈伤组织：在组织培养中指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。3.细胞全能性：植物体的每一个细胞都含有一个完整个体的全套基因，这些基因在适宜的外界条件下按照某种特定的程序先后表达，最终分化形成一个完整的植株。4.脱分化：一个成熟细胞转变为分生状态并形成未分化的愈伤组织的现象叫做脱分化。5.再分化：一个成熟的植物细胞经历了脱分化之后，经过培养还能形成完整的植株。再分化的过程有两种方式：器官发生方式，胚胎发生方式。6.再生：指组织、器官、悬浮细胞和原生质体经培养后获得植株的过程。7.继代：植物组织培养过程中，外植体在培养基上培养一段时间以后需要转移到新的培养基上进行培养，称为继代。8、初代培养；接种某些外植体后，最初的几代培养，旨在获得无菌材料和无性繁殖系。即9、消毒:是指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。10、灭菌:是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，把所有生命的物质全部杀死。简答1.什么是植物组织培养？有哪些类型？（1）植物组织培养(planttissueculture)是指在无菌和人工控制的条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官（如根、茎、叶、花、果实、种子、胚、花药、子房等）、组织（如形成层、皮层、胚乳等）、细胞（如体细胞、生殖细胞花粉等）、原生质、幼小的植株进行培养，使其再生细胞或完整的植株的技术。（2）组织培养分为五种类型：胚胎培养，器官培养（根、茎、叶、花、果实等），组织培养（茎尖分生组织、形成层、表皮组织等），细胞培养，原生质体培养。又可以根据培养方式的不同，分为固体培养和液体培养（纸桥，静置，旋转，震荡培养四种方式）。2.什么是细胞全能性学说？如何理解?（1）细胞全能性学说，即植物体的每一个细胞都含有一个完整个体的全套基因，这些基因在适宜的外界条件下按照某种特定的程序先后表达，最终分化形成一个完整的植株，称为细胞全能性（totipotency)（2）必须满足两个条件：一是要把这些细胞从植物体其余部分的抑制性影响下解脱出来，也就是说必须使部分细胞处于离体的条件下。二是要给予它们适当的刺激，即给予它们一定的营养物质，并使它们受到一定的激素的作用。（3）全能性体现的两个过程一个已分化的细胞要表现它的全能性，必须经历两个过程，即首先要经历脱分化过程，然后再经历再分化过程。3.培养基的营养组成：（1）无机营养大量元素：氮、磷、钾、硫、钙、镁；浓度大于0.5mmol（2）无机营养微量元素：铁、硼、锰、铜、锌、钼、氯；浓度小于0.5mmol（3）有机营养：维生素、肌醇、氨基酸等（4）植物生长调节剂：生长素类（2，4-D、NAA、IAA、IBA)，细胞分裂素类(KTBAZT)，其他类（GAABA)（5）附加物:琼脂、活性碳、一些天然复合物。4、组织培养在农业中的应用可以有以下10个方面：（1）组织培养是转基因技术不可或缺的组成部分，无论是转基因受体的提供，还是转化细胞的筛选和再生，都需要有组织培养技术作为支撑。（2）在自花授粉作物杂交育种中，或在异花授粉作物自交系选育过程中，采用花药培养技术不但可缩短杂合体纯合化所需的时间，而且还可以节省土地面积。（3）在某些雌雄异株植物(如石刁柏)中，若把花药培养技术包括到制种程序中去，在后代就有可能得到均匀一致的单性群体，提高经济效益。（4）在远缘杂交中，通过离体授粉或原生质体融合有可能克服受精前障碍，在通过幼龄合子胚培养可以克服受精后障碍，通过体细胞融合还有可能制造出细胞质杂种。（5）对于无药可治的病毒病，可通过茎尖培养消除病毒，这对解决马铃薯种薯退化问题能发挥重要的作用，在其他很多植物中也可用以建立无毒原种。（6）通过离体诱导不定芽或促进腋芽生枝，可对很多重要的园艺植物和名贵花卉、树种进行快速繁殖。（7）应用在细胞水平上进行突变体选择的技术，可以在一定程度上使高等植物的育种程序微生物化，从而大大提高选择效率，节省时间和土地面积，并且不受季节的限制。（8）体细胞无性系变异是除有性杂交和理化诱变之外的第三个变异来源。（9）通过用人工种皮包被体细胞胚制造人工种子，为某些稀有和珍贵物种的繁殖提供了一种高效的手段。（10）在无性繁殖植物中，通过对茎尖分生组织等离体材料进行超低温保存，不但可以大大节省空间，而且还可以避免病虫害的侵袭。第一章1、组织培养室的组成：准备室，温室，驯化室，培养室，无菌操作室，缓冲室。2、接种器具：镊子、剪刀、解剖刀等，培养设备：培养箱、培养架等。3、培养基的成分：无机营养物，有机营养物（碳水化合物，维生素，肌醇，氨基酸），植物生长调节剂，碳水化合物以及其他添加物。4、植物生长调节物质主要有哪几类，及其主要类型与作用。（1）主要有生长素类，细胞分裂素类，赤霉素。（2）生长素类。作用：主要被用于诱导愈伤组织形成；促进细胞脱分化；促进细胞伸长；促进生根。在配置生长素溶液时，溶于95%乙醇或1mol/LNaOH。常用的生长素有吲哚乙酸（IAA），2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）等。IBA是促进发根能力较强的生长调节物质。NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。2,4—D起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成。诱导愈伤组织的能力：2,4-DNAAIBAIAA。(3)细胞分裂素作用：①促进细胞分裂与扩大。②诱导芽分化，促进侧芽萌发，使茎增粗，抑制茎伸长。③抑制根的分化。种类：6—BA(6—苄基腺嘌呤)，Kt(kinetin激动素)，Zt(zeatin玉米素)。其中最常用的是6—BA。其中ZT活性最强，但昂贵，常用的是6—BA。配置溶液时溶于1mol/L的HCl。作用强弱顺序：Zt6-BAKt(4)GA3（赤霉酸）：作用：促进幼芽伸长生长，促进不定胚发育成小植株。易溶于水，但是不稳定，常溶于95%酒精，配成母液。赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有影响：当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化。(5)脱落酸适当加入ABA可明显提高体细胞胚的数量和质量，抑制异常体细胞胚的发生。(6)乙烯组织培养中，乙烯对培养物的生长、胚胎发生或芽的形成有抑制作用。抑制乙烯：可降低培养基中蔗糖的浓度，或用麦芽糖或葡萄糖代替蔗糖，也可添加一定浓度的硝酸银（5-15mg/L）抑制乙烯形成。乙烯的合成途径：蛋氨酸→SAM→ACC→乙烯→成熟基因（PG,PE)。控制乙烯合成：ACC合酶（ACCsynthase)，ACC氧化酶（ACCoxidase）5、培养基中的有机成分及其作用（1）、碳水化合物里，最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源。使用浓度在1%—5%，常用3%作用：碳源；维持培养基渗透压。（2）、维生素，作用：在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，主要有VBl(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、Vpp(烟酸)、Vc（抗坏血酸）、有时还使用生物素、叶酸、VB12等。一般用量为0．1—1．0mg／L。（3）、肌醇，使用浓度：一般为lOOmg／L，作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。（4）氨基酸，作用：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。使用浓度：为10—200mg／L。种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。6．如何利用植物激素调控愈伤组织形态的发生？形态发生有哪些途径？生长素/细胞分裂素的比值与组织培养的关系:比值大时有利于愈伤组织、根的形成，这时生长素起主导作用；比值小时，则促进芽的形成，这时细胞分裂素起主导作用。愈伤组织的形态发生途径:①胚胎发生途径②器官发生途径7、固体培养基最好的固化剂---琼脂Agar。用量：6-10g/L。90℃时融化，40℃凝固。配制完的培养基灭好菌后要早点拿出来，防止琼脂不凝固。灭菌时间过长则颜色会变深，pH高易于凝固。8、抗生物质种类：青霉素、链霉素、庆大霉素等。浓度：5—20mg/L。作用：可防止菌类污染。9、活性炭目的：是利用其吸附能力，减少一些有毒物质的影响；利于生根；减少玻璃化。缺点：无选择性，营养物质和植物调节剂。使用浓度：1—5g／L。10、配制培养基时，水要用蒸馏水。11、pH值多数植物要求pH5.6-5.8，用0.1-1N的NaOH和0.1-1N的HCI调节.。注意：经高压灭菌后，培养基pH会下降0.2-0.8,固调整pH值时,应高于0.5；pH的大小会影响琼脂的凝固能力，当pH6.0时，培养基将会变硬，pH5.0时，琼脂凝固不好。23、常用培养基的种类：MS培养基。无机离子浓度较高。White培养基无机盐浓度较低，适于生根培养或者胚培养，也可用于悬浮细胞和原生质体培养。N6培养基在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养。B5培养基为培养大豆根细胞设计。KM—8P培养基:为原生质体培养而设计的。24、培养基的配制流程（1）将母液按顺序摆放（2）取适量的蒸馏水(所需培养基量的2/3)入容器（3）按需要量依次取母液及生长调节物质（4）加入蔗糖(30g/L)溶解（5）加琼脂(6-10g/L)，煮沸，2-3min（6）定容（7）调PH值(pH=5.8)（8）分装培养瓶，封口（9）高压灭菌25、常用的灭菌方法：物理方法，干热灭菌，湿热灭菌（培养基在配置完成24h之内完成灭菌工序），射线处理，过滤除菌（不耐热的物质，滤膜网孔直径为0.45μm），大量无菌水冲洗。26、继代中常会出现的问题（1）驯化现象：在植物组织培养中，发现一些植物组织经长期继代培养，发生了一些变化。开始继代培养要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长、这种现象称为“驯化”。（2）玻璃化现象：当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明状，呈水迹状，这种现象通常称为玻璃化。（3）衰退现象：培养材料经过多次继代培养，而发生形态能力丧失、生长发育不良、再生能力降低和增值率下降的现象。27、试管苗移栽时的注意事项：（1）防止断根；（2）选用生根粉（3）育苗基质；（4）适当遮阴；（5）移栽后管理。第二章名词解释1.植物快繁：利用植物组织培养技术对外植体进行离体培养，使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法，也称植物快繁或微繁。2.丛生芽：定芽的萌动，形成微型的多枝多芽的小灌木丛状结构。如顶芽切取尖端，可产生无病毒植株。3、.原球茎：短缩的、珠粒状的、胚性细胞、类似幼茎的器官，可增殖、形成原球茎丛。4、.驯化：试管苗从异养到自养的转变，是一个逐渐适应的过程。5、.玻璃化现象：表现：试管苗叶片、嫩梢呈水浸透明或半透明状。6.褐化现象：表现：培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基和培养材料逐渐变褐，导致植物体死亡的现象。7.黄化现象：试管苗幼苗整株失绿，全部或部分黄化、斑驳的现象。8.无性系：以茶树单株营养体为材料，采用无性繁殖法繁殖的品种（品系）称无性系品种9.无性系变异：培养物在培养阶段发生变异，进而导致再生植株也发生遗传改变的现象。简答1、简述植物快繁器官形成的5种方式及其特点？植物快繁的器官再生方式分为：一、短枝发生型：外植体携带的带叶茎段，在适宜的培养环境下萌发，形成完整植株，再将其剪成带叶茎段，继代成苗的繁殖方法。与田间的扦插方法相似，也称微繁扦插。优点：一次成苗，遗传性状稳定，培养过程简单，移栽成活率高。应用：花卉和葡萄试管苗的繁殖。二、丛生芽发生型：外植体携带的顶芽或腋芽，在适宜的培养环境中不断发生腋芽而呈丛生芽状态，将单个芽转入生根培养基中，诱导生根成苗的繁殖方法。优点：不经过愈伤组织，保持性状好。应用：大多数植物试管苗的繁殖。三、不定芽发生型：外植体在适宜的培养环境中，经历两种途径