蛙的系列实验

蛙的系列实验实验目的1.学习坐骨神经——腓肠肌标本的制备技术。2.了解蛙微循环区各类血管血流特点及某些药物对血管舒缩活动的影响。3.了解脊髓反射和反射弧的组成及反射弧各部位的作用。4.了解迷路在维持动物姿势平衡和正常运动中的作用。5.初步培养学生合理利用实验材料进行综合实验的能力。1．蛙类心跳起源的分析。2．蛙类微循环的观察。3．脊髓反射和反射弧的分析。4．蛙一侧迷路破坏的效应。5．蛙类坐骨神经－腓肠肌标本的制备。实验内容（供选择）材料与用品（一）材料活蛙（限1人1只蛙）。（二）用品显微镜、解剖器具、毁髓针、玻璃针、蜡盘、有孔橡皮蛙板、铁支架、细铁丝钩或蛙嘴夹、电炉、温度计、秒表、注射器、小烧杯、大烧杯、滴管、培养皿、大头针、纱布、棉球、细线、小滤纸片。0.65%生理盐水、0.01%去甲肾上腺素、0.01%组织胺、20%氨基甲酸乙酯、1％可卡因、任氏液、0.5％、1％和2%硫酸溶液、瑞氏染液、蒸馏水、冰水、水。操作与观察（具体实验项目及其顺序由学生自行选择和安排）1．左手握蛙，背部向上，用食指下压其头部前端，使头前俯，中指抵住其胸部，拇指按其背部，使头与脊柱相连处凸起。右手持毁髓针自两眼之间沿中线向后端触划，当触到一凹陷处即枕骨后凹。2．将毁髓针由凹陷处垂直刺入，再将针尖从枕骨大孔向前刺入颅腔，并在颅腔内搅动，捣毁脑组织。如针确在颅腔内，则可感到针触及颅骨（图16－1）。3．将针退回至枕骨大孔，然后针尖转向后方与脊柱平行插入椎管，一边伸入，一边旋转毁髓针以毁髓。当蛙四肢僵直而后又松软下垂时，即表明脑和脊髓完全破坏。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，则必须重新毁髓。4．拔出毁髓针，用一小干棉球将针孔堵住，以止其出血。（一）双毁髓（二）心搏起源的分析1．暴露心脏(1)将双毁髓蛙背位置蜡盘中，展开四肢，用大头针于腕部和跄部钉人，以将蛙固定在蜡盘中。**为什么用双毁髓蛙进行心搏起源的分析？(2)左手持镊提起胸骨后方腹部皮肤，右手持剪剪开一小口，然后将剪刀由切口处伸入皮下，向左右两侧锁骨的外侧方向剪开皮肤，并向头端掀开皮肤。(3)再用镊子提起胸骨后方的腹肌，用金冠剪在腹肌上剪一小口后，沿皮肤切口方向剪开胸壁，**剪时剪刀尖紧贴胸壁，以免损伤内脏和血管，剪断左右乌喙骨和锁骨，剪去胸壁，使创口成1个倒三角形，此时可见到心脏在围心腔内搏动。(4)左手持眼科镊提起半透明围心膜，右手用眼科剪剪开围心膜，暴露心脏。**以下实验中应不时用任氏液保持心脏湿润。为什么？2．观察心脏的构造（图16－2）参见本实验“蛙的外形及内部构造”中“心脏及其周围血管”部分。3．观察心搏过程观察静脉窦、心房和心室收缩的顺序，并用秒表记录心搏频率。注意心室收缩时容积和颜色的变化。4．不同温度刺激蛙心各部位用盛有约40。C温水的小试管底部分别接触心房、心室和静脉窦1min，重复3次并记录每次温度刺激时心脏各部位的搏动频率。换用盛冰水的小试管，重复上述试验并记录。**小试管底部接触所刺激部位时，不能接触到心脏其他部位，以免影响实验结果。根据实验结果，分析心脏何部位的搏动为心搏的起源。5．斯氏结扎(1)用眼科镊在左右动脉干下穿一线备用，将心尖翻向头端，暴露心脏背面，然后将放置在动脉干下的那条线在窦房沟处作一结扎（图16－3），即为斯氏第1结扎（图16－2A）：观察心脏各部分搏动节律的变化，可见心房、心室立即停止搏动，而静脉窦仍继续搏动，用秒表记录静脉窦搏动频率。待心房和心室恢复搏动后，分别记录它们的搏动频率。(2)然后在冠状沟处穿线做第2结扎，即斯氏第2结扎（图16－2B）。这时心房和静脉窦仍继续搏动，心室则停止搏动。待心室恢复搏动后，记录心脏各部位的搏动频率。**根据试验结果，分析蛙心脏不同部位节律性的高低，正常情况下心脏节律活动的顺序。（三）蛙类徽循环的观察蛙的肠系膜、舌及后肢足蹼等部位的组织较薄，适于用来制备微循环观察标本。1．蛙肠系膜标本的制备(1)取蛙I只，称重后于其皮下淋巴窦注人20%氨基甲酸乙酯(2－3mg/g体重)，约10－15min，动物即进入麻醉状态。(2)将已麻醉的蛙背位固定于蛙板上，使其身体左侧紧靠蛙板上的小孔。用镊子轻轻提起左侧腹壁，**不要将内脏也夹起。再用剪刀在腹壁上剪一长约1cm的纵向切口。轻轻拉出小肠拌，将肠系膜展开过蛙板上的小孔，并用大头针固定在蛙板上（图16－4）。**小肠拌不能绷得太紧，以免拉破肠系膜或阻断血流，另需要适量任氏液润湿肠系膜，以免干燥，影响血液循环。2．若用蛙舌或足蹼作观察标本，则用大头针将麻醉的蛙固定在蛙板上，使其鼻端离板孔0.5cm，拖出舌头，拉紧过孔，并用大头针将舌缘固定在蛙板孔的周缘；或将蛙两足趾展开，使趾蹼过孔，用大头针固定。3．观察将标本置低倍镜下观察。可见有许多纵横交错粗细不等的血管。根据血管的粗细和分支情况、血流方向和血流特征，可区别小动脉、小静脉和毛细血管。(1)动脉血流的观察在镜下移动标本直到发现一段较粗血管内的血液流向2分支血管，这段血管就是小动脉。注意观察管中血流速度快，不均匀，有搏动，有轴流现象（血细胞在血管中央流动）。(2)静脉血流的观察移动标本真到发现血流由2支血管汇人1支血管，这2个分支血管就是小静脉，观察管内血流有无搏动和轴流现象，比较动脉和静脉内血流的速度。(3)毛细血管血流的观察寻找管径最小、透明、近乎无色的血管即毛细血管。在高倍镜下可见一串串红细胞以单个排列形式在管内移动，或红细胞断断续续地单个移动。血流速度如何？有无搏动？**3类血管的形态和血流特点与其生理功能有何联系？4．血管对药物的反应(1)滴加几滴0.01%去甲肾上腺素于肠系膜上，持续观察各血管管径及血流的变化。出现变化后立即用任氏液冲洗。(2)待血流恢复正常后，再滴加几滴0.01％组织胺于肠系膜上，观察血管及血流的变化。若用蛙蹼作为观察标本，则难以观蔡血管对药物的反应。（四）蛙类一侧迷路破坏的效应1．将蛙放在桌面上和水盆中，观察其正常的姿势和运动。2．破坏蛙的一侧迷路并观察其效应。(1)用纱布包住蛙躯干部，使其腹面向上握于左手中，翻开下颌用左手拇指压住。右手持手术刀在颅底口腔粘膜作一横切口，分开粘膜，即可看到“十”字形的副蝶骨。迷路即位于副蝶骨横突的左右两旁（图16－5）。(2)用手术刀削去一侧横突的骨质，可看到粟粒大小的小白点，此处即是内耳囊。将毁髓针刺人内耳囊2－3mm，勿刺得太深，以免损伤中枢神经，转动针尖，搅毁其中的迷路。(3)静待数分钟后，观察蛙在桌面上的姿势和运动；将蛙放在水盆内，观察其游泳动作。比较手术动物与正常动物的姿势和运动。**内耳迷路有何功能？（五）脊髓反射及反射弧的分析1．制备脊蛙（无头蛙）(1)断头法:左手持蛙，右手持粗剪刀从蛙右侧口角处插入（如图中“x”所示）上、下颌之间，沿两眼后连线剪去头颅，即成脊蛙。用蘸有0.65％生理盐水的脱脂棉覆盖在伤口上，避免伤口干燥，但不要将脱脂棉从伤口塞人，以免造成脊髓的兴奋状态。(2)毁蛙脑:按本实验“双毁髓”法操作，但只捣毁脑组织。**不能损伤脊髓，以免破坏反射中枢。2．脊蛙处理用铁丝钩穿过脊蛙下颌（或用蛙嘴夹夹住脊蛙下颌），悬挂在支架上，用烧杯内清水浸洗蛙体，使皮肤湿润，防止于燥，**为什么？刚施过手术的脊蛙，立即进入无反应的休克状态，不能马上进行实验，待蛙体安静5－10min后，其脊髓反射逐渐出现。**如冬季做此实验，应事先将蛙放在30－40。C温水里浸浴2－3min，以增强其代谢，保证实验效果。3．脊髓反射的观察(1)屈反射:将蛙右后肢最长趾浸人培养皿内0.5%硫酸溶液中，右后肢收缩。立即用烧杯内清水洗净脚趾上的残余硫酸，并用纱布轻轻擦干，重复该试验，用秒表记录从趾尖浸入起到屈反射出现所需时间，重复3次，求其平均值，此值即为反射时。**以下每项实验后均要及时用清水将蛙体上残余硫酸洗净。为什么？用同样方法刺激蛙左后肢脚趾，也出现屈反射。(2)搔扒反射:用浸有1％硫酸溶液的滤纸片贴在蛙左侧背部皮肤上，蛙立即用左后肢除去纸片，记录反射时。把滤纸片贴在蛙右侧背部，右后肢也同样除去纸片。4．反射弧的分析(1)在蛙右后肢踝关节上方，用眼科剪将皮肤作一环形切口，再用镊子剥去切口以下皮肤，**趾尖皮肤应除净。稍停，再用0.5%硫酸刺激去皮脚趾，观察右后肢动不动，**为什么？(2)将浸有2％硫酸溶液的滤纸片贴在该切口以上的皮肤上，观察右后肢有无反射发生，**说明什么？(3)取下脊蛙，将它腹位固定在蜡盘上，使其趾端向外侧翻转，足底朝上。沿肢体方向剪开左侧股部皮肤，用玻璃针分离肌肉和结缔组织，在股二头肌和半膜肌的肌间沟内有1条白色较粗的神经（图16－8A），即坐骨神经。在坐骨神经下穿1条细线。用线将神经提起，**活标本的神经不能用金属镊子夹持。在神经下放1团浸有1％可卡因（局麻药）的棉花，记录时间。重新将脊蛙挂在支架上(4)每隔1min将蛙左后肢最长趾浸人0.5%硫酸液中，观察其有无屈反射，直至屈反射不再出现，并记录时间。**为什么屈反射不再出现？立即将浸有2％硫酸的滤纸片贴在蛙左侧背部皮肤上，观察左后肢有无搔扒反射。**若有搔扒反射，说明什么？每隔1min重复上次该刺激，直到左后肢搔扒反射不再出现，记录时间。比较从给药到屈反射消失和给药到搔扒反射消失的反射时，**说明什么？(5)毁脊髓:用镊子夹右后肢，当确实看到右后肤屈反射时，**为何要做此检测？从支架上取下脊蛙，将毁髓针由原进针处插入，然后针头向后插入椎管，捣毁脊髓（参见本实验“双毁髓”法）。垂复酸刺激，观察有无反射发生。**分析原因。（六）蛙类坐骨神经一腓肠肌标本的制备1．剥制后肢标本左手持蛙两前肢，右手用剪刀在蛙体前部横向剪开皮肤一周，剥离身体下部及后肢的皮肤。然后左手持蛙两后肢足部，倒置蛙体；右手持剪剪开腹壁，将内脏向头端剥离，并于泄殖腔处剪去内脏，**勿伤及神经。暴露脊柱两旁的坐骨神经丛，在该丛的前方剪断脊柱，将身体前部、内脏连同皮肤一并弃去，仅保留一段腰骶部脊柱连同后肢。将标本放入盛有任氏液的烧杯中，清洗手及解剖器械上的污物，**为什么要这样处理？2．分离两后肢用蘸有任氏液的左手托起标本，右手持金冠剪沿脊柱正中线纵向剪开脊柱（尾杆骨留在一侧），并剪开耻骨联合，使两后肢完全分离。将分开的后肢，一只继续剥制，另一只置任氏液中备用。3．分离坐骨神经取一侧后肢标本，脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，足底朝上固定在蜡盘上。用玻璃针沿坐骨神经走向分离神经，并用眼科剪剪去小分支。再循股部坐骨神经沟（股二头肌及半膜肌之肌间沟）细心分离坐骨神经至腘（图16－8A）**不能用金属器皿触碰神经干。剪去肌肉及大部分脊柱骨，只保留坐骨神经发出部位的一小段脊柱骨。4．分离股骨头左手捏住股骨，沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，用金冠剪自膝关节向前刮干净股骨上的肌肉。在股骨近膝关节1cm处剪断股骨。5．游离腓肠肌用手术镊在腓肠肌跟腱下穿线，并结扎。提起结扎线，剪断肌腱与腓肠肌的联系，游离腓肠肌至膝关节处。剪去膝关节下部的后肢，保留腓肠肌与股骨的联系，即制成完整的坐骨神经－腓肠肌标本。标本应包括坐骨神经、腓肠肌、股骨头和一段脊柱骨4部分（图16－8B）。6．检查标本的兴奋性左手持镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开蜡板，右手用蘸有任氏液的锌铜弓的两极接触标本的坐骨神经，如腓肠肌立即收缩，则表明标本的兴奋性良好。然后将标本放人任氏液中。**制备标本过程中，要经常用任氏液湿润去皮肤标本，为什么？作业与思考1．.根据蛙类心搏起源分析的实验结果说明两栖类心脏的起搏点是静脉窦。2．制备蛙坐骨神经一腓肠肌标本时，如何保持标本的机能正常。3．根据实验现察，说明不同类型血管的形态和血流特点所适应的生理机能。4．分析实验结果，说明反射弧的组成及各组成部分的机能。5．通过实验说明迷路的机能。返回返回返回返回返回