维生素B12的定性定量检测

院系：医学检验系班级：11检验本科1班姓名：*****维生素B12的定性定量检测实验目的和要求1、掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作；2、掌握吸收曲线的绘制；3、掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。实验原理维生素B12为含有钴有机药物，其注射液为粉红色至红色透明液体，主要用于治疗贫血等疾病。维生素B12的水溶液在278土1nm、361土1nm、550土1nm三个波长处有较强吸收峰，根据其吸收光谱的形状和吸收峰处的吸光度比值，可对维生素B12进行定性鉴别；采用吸收系数法，测量其在最大吸收波长处的吸光度值，可计算样品中维生素B12的含量。实验仪器与试剂1、V-1100D型分光光度计2、维生素B12注射液3、10ml容量瓶1个4、500μl加样器1个5、1cm玻璃比色皿2个6、500μl加样器吸头实验步骤1、溶液配制用加样器移取维生素B12注射液500μl，转移至10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。2、吸光度与吸收曲线的绘制用1cm比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定所配制的维生素B12溶液在下列各个波长处的吸光度值；以测定的吸光度值为纵坐标，波长为横坐标制图，绘制吸收曲线，并根据吸收曲线确定定性、定量分析波长。波长356nm357nm358nm359nm360nm361nm362nm363nm吸光度0.4620.4810.4910.4860.4790.4720.4620.413波长545nm546nm547nm548nm549nm550nm551nm552nm吸光度0.1490.1500.1510.1540.1510.1500.1490.148实验数据处理1、定性鉴别根据中国药典规定，维生素B12的水溶液在361土1nm、550土1nm波长的吸光度比值在3.15-3.45之间，表明样品为维生素B12，即为合格品。19.3154.0491.0AAEE)nm548()nm358(1%1nm(548nm)%11cm(358nm)故可知该维生素B12为合格样品。2、定量检测根据浓度为25μg/ml的维生素B12注射液在361土1nm波长处所测得的吸光度值，按照下式计算的维生素B12注射液含量，结果在90.0%-110.0%之间，表明维生素B12注射液含量合格；其中207为维生素B12在361土1nm波长处吸收系数，20为稀释因子（即稀释倍数）。标示量维生素B12注射液含量=%9.9410010520207491.0100/g20207A4nm361）标示量（ml故可知该维生素B12注射液含量合格。实验讨论1、实验注意事项：比色皿未放入分光光度计测定光路时，必须将样品室舱盖打开，以免影响分光光度计的使用期限和灵敏度；比色皿放入分光光度计前，必须用吸水纸将外表面擦干净。2、实验中所测得到的两吸收峰最大吸光度值所对应的波长偏离理论波长361nm和550nm分别为3nm、2nm，偏离较大，可能是该分光光度计的波长有点偏离，需要调试；也可能是由于维生素B12本身原因。