草鱼鱼蛋白水解工艺的研究

草鱼鱼蛋白水解工艺的研究•虽然已有文献报道迟缓爱德华氏菌具有抵抗血清杀菌作用，但其分子机制尚不清楚。为此，将同等菌量的迟缓爱德华氏菌与不同体积的鱼血浆孵育，获取全菌蛋白，进行基于等电聚焦双向电泳的蛋白质组学分析，发现YihK和GpmA为显著上调的差异蛋白。这些发现有助于阐明病原菌对鱼血浆反应的分子机制。根据中国金枪鱼渔业观察员项目于2006年2－11月在东太平洋水域作业的中国金枪鱼延绳钓渔船上收集的数据，本研究对大眼金枪鱼摄食强度的时空变动进行了分析。结果表明，小个体大眼金枪鱼的摄食强度较大个体大眼金枪鱼高，叉长小于140cm的大眼金枪鱼摄食强度相对较大。3－4月的摄食强度较小，5－11月的摄食强度相对较大。3月空胃率相对较高，5－11月，大眼金枪鱼空胃率均低于15%。200－350m水层中的大眼金枪鱼摄食活动非常活跃。各月份和不同叉长组大眼金枪鱼摄食强度均存在显著性差异，且不同水层大眼金枪鱼摄食强度也存在显著性差异。本试验比较研究了黄颡鱼和青梢红鲌在形态学参数、营养组成和A/E比值等方面的差异。结果表明，黄颡鱼的脏体比、肝体比、肠脂比和性腺成熟系数显著高于青梢红鲌（P0.05）。黄颡鱼全鱼、肌肉、卵巢中脂肪含量显著高于青梢红鲌（P0.05），而全鱼和卵巢中蛋白质含量显著高于青梢红鲌（P0.05）。这两种鱼肌肉和卵巢中脂肪酸组成也存在显著差异（P0.05）。黄颡鱼与青梢红鲌全鱼和肌肉中的氨基酸组成相似。然而，这两种鱼卵巢中氨基酸组成存在显著差异（P0.05）。全鱼和肌肉中A/E比值在这两种鱼相似，而在卵巢中A/E值有较大的差异。本实验为这两种鱼的营养组成提供了重要信息，同时以本研究的A/E比值数据为基础，可以初步预测这两种鱼对饲料中必需氨基酸的需要量。打听•为了解超低温冻存对大黄鱼精子DNA损伤的影响，采用单细胞凝胶电泳（SCGE）法，检测了以5%–30%DMSO为抗冻剂的超低温冻存的大黄鱼精子核DNA的损伤情况。实验中，对传统的碱性单细胞凝胶电泳法在铺胶、电泳条件等方面进行改进——使用普通玻片单层铺胶法，在130mA、15V条件下电泳60min，获得了清晰的电泳图（彗星图谱）。彗星图经CometScore1.5分析软件处理，获得彗星全长、尾长、彗星拖尾中DNA的量占细胞总DNA量的比例等参数，并计算彗星率与损伤系数；参照Goerin（1995）的分级方法，将大黄鱼精子DNA损伤程度分为5级。结果表明，以5%、10%、15%、20%DMSO为抗冻剂的冻精与鲜精的活力（激活力、运动时间与寿命）、彗星率及损伤系数差异不显著，而以25%、30%DMSO为抗冻剂的冻精与鲜精的活力、彗星率及损伤系数差异显著。冻精SCGE彗星率与抗冻剂DMSO浓度成正相关，冻精核DNA损伤程度随DMSO浓度升高而增大。鲜精与冻精核DNA损伤主要为Ⅰ级和Ⅱ级损伤，Ⅲ级损伤比例低，Ⅳ级损伤只存在于25%与30%DMSO为抗冻剂的冻精中，且比例低。分析认为，大黄鱼冻精DNA损伤的主要因素为抗冻剂的毒副作用。根据2006年3—5月在热带太平洋中东部水域作业的中国金枪鱼延绳钓渔船上收集的数据，基于反映鱼类繁殖能力的重要指标—性腺指数及其影响因素（表温、当地表温距平及温跃层深度），本研究对大眼金枪鱼繁殖栖息地适应性进行了分析。结果表明，表温、当地表温距平及温跃层深度与热带太平洋中东部大眼金枪鱼性腺指数的最佳上界分位数回归方程分别为•pGSISST0.45=382.545-25.469SST0.45+0.425SST0.45，pGSISSTA0.45=3.680-1.812SSTA0.45-1.599SSTA0.45和pGSIULT0.45=8.840-0.208ULT0.45+0.002ULT0.45。调查区域大眼金枪鱼繁殖栖息地指数分布在0.25～0.64之间。2°S以北水域，繁殖栖息地指数基本上维持在0.5以上。2°S以南水域，143°W~146°W之间的繁殖栖息地指数在0.5以上外，其它水域均在0.4以下。本研究为进一步阐明东太平洋大眼金枪鱼的繁殖空间分布提供了一条新的思路。以体重25.5±0.7g的雌性幼鳝（Monopterusalbus）为对象，进行了不同光照周期对其生长和性腺发育影响的试验。结果显示：（1）黑暗组（0L:24D）在第42d和试验结束（第63d）时，黄鳝的增重率和体重特定增长率均显著大于其它处理组（P＜0.05）；（2）试验结束时，长光照组（18L:6D）黄鳝的体重增长受到明显抑制，但其性腺指数却显著高于其它各处理组（P＜0.05）；（3）24h的持续光照同时抑制黄鳝的生长和性腺发育，且与短光照（6L:18D）或自然光照相比，黄鳝在黑暗状态下其生长和性腺发育均得到改善，这可能其喜暗怕光的自然栖息特点有关。副溶血性弧菌(V.parahaemolyticus)具有嗜盐性，是引起海水养殖动物病害和海产品食物中毒的常见重要病原菌。本文采用月桂酰基氨酸钠二步法，提取了副溶血性弧菌的外膜蛋白,首次建立了外膜亚蛋白质组表达图谱,鉴定了29个外膜蛋白,占所鉴定蛋白的78.3%。这些研究结果对副溶血性弧菌外膜蛋白功能的研究具有积极作用。此外，对外膜蛋白组学研究的有关技术问题进行了相关探讨。cpa广告联盟•采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对大黄鱼四个子代各30个样本进行群体遗传差异的检测。10种同工酶共检测到30个基因座位，其中Est-1、Est-2和Cat-3为多态座位。四个家系多态基因座位比例均为10%，平均每个座位的有效等位基因数为1.0799～1.1168，平均每个座位的实际杂合度在0.0590～0.0846之间，预期值为0.0450～0.0595。遗传变异水平，反交子代岱衢洋自交子代正交子代官井洋自交子代。Gad-1座位对应的1条酶带，正交子代相对迁移率Rf0.082低于其他3个家系的0.096，7528肉眼已能从凝胶上清晰分辨，可将此酶带作为区别正交子代和其他3个子代间的标记。采用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对大黄鱼四个子代各20个样本进行群体遗传差异的检测。14条引物共检测到89个位点，各子代的多态位点比例在24.01%～29.41%之间，平均遗传杂合度为0.2135～0.2644，Shannon多样性指数在0.0871～0.1673之间。遗传多样性水平，反交子代岱衢洋自交子代正交子代官井洋自交子代，提示通过杂交试图提高乃至恢复大黄鱼的遗传多样性水平的方法是可行的。结合生产实际情况，推测反交子代可能同时具有双亲的优良性状，显示出较强的杂种优势，岱衢族雄鱼与闽-粤东族雌鱼的反交组合可能成为大黄鱼杂交育种的最优组合。研究探讨了紫菜共附生真菌Cladosporiumsp.的次生代谢产物的粗提物N5及两种纯化物DLF3、DLF4对坛紫菜（Porphyrahaitanensis）叶状体和丝状体生长的影响。研究结果表明：粗提物N5在低浓度10-8~10-6mg/mL范围时，对丝状体和叶状体的生长有促进作用，但随N5浓度的升高，促进作用降低，甚至表现抑制作用。•N5在10-6mg/mL时，丝状体日相对生长速率可增长18.8%（p＜0.01），同时藻胆蛋白的生物合成量相对增加了2.90mg/g；N5在10-8mg/mL时，叶状体日相对生长速率变化较大，增加了2.76%（p＜0.05），同时藻胆蛋白相对增加量可达14.16mg/g（p＜0.01）。在10-8~10-4mg/mL范围内，纯化物DLF3和DLF4对丝状体生长均表现了完全的抑制作用，并且随浓度升高，抑制作用加强。在10-8mg/mL时，DLF3和DLF4分别可降低丝状体日相对生长速率4.5%和76.5%。DLF3和DLF4对叶状体生长影响均极显著（p＜0.01），低浓度时促进其生长，随浓度升高而表现抑制作用，但最适浓度范围有所不同，分别在10-8mg/mL和10-6mg/mL时表现较强的促进作用，叶状体日相对生长速率分别增加了7.94%和2.00%。香鱼(Plecoglossusaltivelis)是一种名贵的经济鱼类。本研究建立香鱼巨噬细胞培养，检测鳗弧菌对巨噬细胞呼吸爆发和噬菌能力影响。巨噬细胞由头肾组织经梯度离心，贴壁分离来获得，并通过姬姆萨染色证实。进一步的研究发现鳗弧菌（Listonellaanguillarum）可以刺激香鱼巨噬细胞产生呼吸爆发，其还原NBT的能力比静息状态显著性增高。鳗弧菌加入到培养的巨噬细胞，在4h香鱼巨噬细胞大量吞噬细菌，在12h香鱼巨噬细胞内含的细菌减少。这是我国香鱼巨噬细胞体外培养的首次报道，香鱼巨噬细胞对鳗弧菌有很强杀伤能力，是抵抗病原体侵染的重要防线。根据2007年秋季在黄海北部海域进行的定点底拖网调查，对黄鮟鱇（Lophiuslitulon）的摄食生态进行了初步研究。结果表明，北黄海的黄鮟鱇在秋季主要以底层鱼类和虾类为食，优势饵料生物是矛尾虾虎鱼（Chaeturichthysstigmatias）和脊腹褐虾（Crangonaffinis），其中矛尾虾虎鱼在食物组成中所占的比例最高，免费发布广告•是黄鮟鱇最重要的饵料生物。典范对应分析表明，水深、经度和纬度对黄鮟鱇的食物组成有显著影响（P0.05），而体长、性别和性腺成熟度则没有显著影响（P0.05）。黄鮟鱇摄食矛尾虾虎鱼和脊腹褐虾的体长范围分别是32～152mm和34～79mm，平均体长分别为80.8±1.88mm（S.E.）和53.2±3.11mm（S.E.），它与两种饵料生物的体长之间没有显著的相关关系。黄鮟鱇与矛尾虾虎鱼和脊腹褐虾体长的比率分别为1.19～5.14和2.38～6.02，平均值分别为2.67±0.09（S.E.）和4.23±0.29（S.E.），黄鮟鱇与两种饵料生物体长的比率与黄鮟鱇的体长之间存在极显著的正相关关系。本文采用常规解剖、石蜡切片、苏木精-曙红染色（H-E）和显微摄像等组织学研究技术，研究了杂食性的鲤鱼和肉食性的鲈鱼肝脏的解剖与组织结构，并对其进行了较为详细的比较。结果表明：两种鱼肝脏的形态、大小、色泽、致密度及胆囊状况等均有区别；组织结构上两种鱼肝脏均外被薄层浆膜，切片上由于伸入肝脏实质内结缔组织较少，很难区分为肝小叶的结构。中央静脉形状多变，且分布很不规则。小叶周缘门管区有小叶间动脉血管、小叶间静脉血管和小叶间胆管分布。胰脏外分泌组织组织包于肝脏组织之内，沿门静脉分枝周围分布，构成肝胰脏，与肝脏组织有薄层结缔组织界膜分开。肝胰脏主要由腺泡构成，腺泡内有泡心细胞。鲤鱼肝胰脏较发达，所含腺泡较多，腺细胞主要含有大量嗜酸性的酶原颗粒，少量腺细胞核致密，胞质被H-E染为桔黄色；花鲈肝胰脏较少且其中所含腺泡较少，腺细胞亦含大量嗜酸性的酶原颗粒。花鲈肝脏内沿门静脉分枝周围分布有大量黑色素巨噬细胞集合体，鲤鱼肝脏中未观察到类似组织结构。•根据2007年秋季在黄海北部海域进行的定点底拖网调查，对细纹狮子鱼（Liparistanakae）的摄食生态进行了初步研究。结果表明，北黄海的细纹狮子鱼在秋季主要以虾类和底层鱼类为食，属于底栖动物食性鱼类，其优势饵料生物是脊腹褐虾（Crangonaffinis）。在调查海域最北部的一个站位，细纹狮子鱼还摄食了较多的大泷六线鱼（Hexagrammosotakii）鱼卵。典范对应分析表明，水深、经度、纬度和体长对细纹狮子鱼的食物组成有显著影响（P0.05），而性别和性腺成熟度则没有显著影响（P0.05）。脊腹褐虾与细纹狮子鱼体长之间呈显著的正相关（r=0.326，P0.05），而中华安乐虾（Eualussinensis）与细纹狮子鱼体长之间没有显著的相关关系（r=0.219，P0.05）；脊腹褐虾（r=-0.372，P0.01）和中华安乐虾（r=-0.799，P0.01）与细纹狮子鱼体长的比率与细纹狮子鱼体长之间均呈极显著的负相关关系。回归分析表明，细纹狮子鱼的胃总重和空胃重均随着体长的增加呈指数增长。从患