第八章免疫学应用

第八章免疫学应用免疫学检测技术抗原或抗体检测免疫细胞及其功能检测免疫学预防人工主动免疫人工被动免疫免疫治疗免疫增强剂免疫抑制剂第一节免疫学检测技术一、抗原或抗体检测抗原抗体反应的特点：特异性可逆性可见性抗原抗体反应的影响因素抗体过剩比例适当抗原过剩抗原抗体的比例与其形成免疫复合物大小的关系抗原抗体反应凝集反应直接凝集间接凝集沉淀反应免疫比浊单向免疫扩散双向免疫扩散免疫电泳蛋白芯片技术免疫标记荧光酶同位素化学发光胶体金免疫印迹１、凝集反应：颗粒性抗原＋相应抗体→凝集块细菌、细胞等颗粒性Ag或表面包被抗原的颗粒状物质与相应Ab在电解质存在的情况下结合，出现肉眼可见的凝集团现象。包括：直接凝集反应、间接凝集反应、反向间接凝集反应、协同凝集反应等。如血型鉴定、肥达试验等。直接凝集反应1:2稀释待测血清1:41:81:16玻片法试管法常用于菌种鉴定或ABO血型鉴定常用于检测抗体的滴度或效价，见于临床诊断伤寒或副伤寒所用的肥达氏反应和诊断布氏菌病所用的瑞特试验。间接凝集和间接凝集抑制试验2、沉淀反应：单向琼脂扩散试验毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，也可在半固体琼脂凝胶中进行。3、免疫比浊法抗体（Ab）与可溶性抗原（Ag）反应，形成一定结构的免疫复合物，成为悬浮于反应溶液中的微粒。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质，可用仪器检测，提高了检测的速度、灵敏度和易操作性。4、免疫标记技术免疫标记技术是将已知抗体或抗原标记上易显示的物质，通过检测标记物来反应抗原抗体反应的情况，从而间接地测出被检抗原或抗体的存在与否或量的多少。常用的标记物有荧光素、酶、放射性核素及胶体金等。免疫标记技术具有快速、定性或定量甚至定位的特点，是目前应用最广泛的免疫学检测技术。免疫标记技术：——免疫酶技术1、包被抗体洗2、加抗原洗3、加酶标抗体洗4、加底物显色1、包被抗原洗2、加抗体洗3、加酶标抗球蛋白洗4、加底物显色ELISA双抗体夹心法ELISA间接法免疫标记技术：——免疫荧光技术免疫荧光直接法免疫荧光间接法免疫标记技术：——放射免疫测定法（RIA）放射免疫测定法（RIA）是将放射性核素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫标记技术。二、免疫细胞及其功能检测1、T细胞及其亚群检测：目前多采用荧光免疫法，通过检测T细胞表面的CD抗原来了解外周血T细胞及其亚群的百分率。2、淋巴细胞转化试验：T细胞受到特异性抗原或有丝分裂原刺激后发生增殖，可通过以下方法检测：形态计数法：活化细胞体积增大、形态不规则、胞质增多、细胞核松散及出现较多核仁；3H-TdR或125I-UdR掺入法：3H-TdR能掺入到合成的DNA中，用液体闪烁仪检测样品的放射活性，特点是灵敏可靠，但须特殊仪器，易有放射性污染。3、B细胞检测采用免疫荧光技术直接法，通过检测Smlg来了解B细胞的数量。4．细胞因子检测（1）免疫学检测法（2）生物活性检测法（3）分子生物学检测法第二节免疫学预防根据特异性免疫应答的原理，采用人工方法将Ag/Ab制成各种制剂，接种于人体，使其产生/获得特异性免疫力，达到预防某些疾病的目的。分为：人工主动免疫人工被动免疫一、人工主动免疫：是给机体输入疫苗或类毒素等抗原物质，剌激机体产生特异性免疫力。1、死疫苗：用物理或化学的方法将病原微生物杀死制备而成的制剂。又称灭活疫苗。如乙脑疫苗、百日咳疫苗。2、活疫苗：用人工变异或从自然界筛选获得的减毒或无毒的活的病原微生物制成的制剂。又称减毒活疫苗。如卡介苗、麻疹疫苗、风疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗等死疫苗和活疫苗的比较区别点死疫苗活疫苗制剂特点死、强毒株活、弱毒或无毒接种剂量及次数较多，2-3次较少，1次副作用较大较小保存及有效期易保存，1年不易保存4℃数周免疫效果较差，维持数月至2年较好，维持3-5年或更长3、亚单位疫苗：如乙肝疫苗、流感疫苗。4、基因工程疫苗:重组疫苗(乙肝疫苗);重组载体疫苗;DNA疫苗;转基因植物疫苗5、合成疫苗：6、类毒素：如白喉类毒素、破伤风类毒素。人工主动免疫注意事项接种对象：凡免疫力差、与病原体接触机会多、疾病危害大、流行地区易感者。接种剂量、次数和间隔时间（计划免疫程序表）接种途径：皮内、皮下、吸入、口服接种后反应：24h内局部红肿、疼痛、淋巴结大；全身发热、头痛、恶心，数天恢复。禁忌症：高热、急性传染病、严重心血管病、自身免疫病、免疫缺陷病。二、人工被动免疫注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。1、抗毒素(antitoxin)：外/类毒素→马→Ab2、丙种球蛋白：正常人血清或健康产妇胎盘中提取3、其他抗体制剂：人工被动免疫注意事项：注意防止超敏反应早期和足量不滥用丙种球蛋白应用范围：易感人群、患者人工主动免疫与人工被动免疫的区别人工主动免疫人工被动免疫输入物质抗原抗体或细胞因子免疫生效时间慢，2-4周快，立即免疫维持时间长，数月-数年短，2-3周主要用途预防治疗或紧急预防区别点第三节免疫治疗概念：根据免疫学原理，应用物理、化学和生物学的方法增强或抑制机体的免疫机能，人为地纠正免疫异常状态，达到治疗的目的的措施。一、免疫增强剂（IPA）是增强、促进和调节机体免疫功能的生物或非生物制剂。主要用于恶性肿瘤、免疫缺陷病和传染病的辅助治疗。免疫增强剂分类分类举例细胞因子制剂IL-2、TNF、IFN微生物制剂卡介苗、短小棒状杆菌、脂磷壁酸化学药物左旋咪唑、西咪替丁多糖类制剂茯苓多糖、人参多糖二、免疫抑制剂是一类抑制机体免疫功能的生物或非生物制剂。常见免疫抑制剂种类分类举例抗生素环孢霉素A、FK-506单克隆抗体制剂抗TC及亚群、抗MHC、抗IL和IL受体激素肾上腺皮质类固醇烷化剂环磷酰胺抗代谢药硫唑嘌呤、5-氟尿嘧啶主要用于抗移植排斥反应、超敏反应性疾病、自身免疫性疾病及感染性炎症。复习题：1、ELISA间接法的检测原理2、比较人工主动免疫与人工被动免疫的区别