蛇伤药酒抗毒抗菌作用的实验研究

蛇伤药酒体外抗五种蛇毒的实验研究*张健民，蒋三员，李景新，唐荣德（广东省江门市新会中医院，广东江门，529100）ExperimentalStudyofAntitoxinandAntisepsisActionforSnakebiteTinctureZHANGJian-min,JIANGSan-yuan,LIJing-xin,TANGRong-de(XinhuiHospitalofTraditionalChineseMedicine,Jianmen,Guangdong,529100,China)[Abstract]ObjectiveToexplorethetreatmenteffectsofanti-cobratoxin,anti-endotoxinandantisepsisforthesnakebitetincture.MethodsThelimulusreagentmethodwasusedinanti-cobratoxinandanti-endotoxintests.Thepaperstripmethodwasusedinantisepsistests.ResultsTheconcentrationforcobratoxintoproduceagglutinationreactionisabove5.0µg/mlinactionwith0.5EU/ml-1limulusreagent.Thesnakebitetinctureconcentrationin2ml/mlhas5timesagglutinationreactionofanti-cobratoxinandhas2.5timesagglutinationreactionofanti-endotoxinandhasinhibitionforsomepathogenicbacteria.ConclusionThesnakebitetincturehasactionofanti-cobratoxin,anti-endotoxinandantisepses.[Keywords]Snakebitetincture;Cobraoxin;Endotoxin;Pathogenicbacteria[摘要]目的探讨蛇伤药酒抗五步蛇、竹叶青蛇、眼镜蛇毒、蝰蛇、蝮蛇蛇毒效果。方法采用鲎试剂法。结果眼镜蛇毒与0.5EU/ml-1鲎试剂产生凝集反应的浓度在5.0µg/ml以上；蛇伤药酒浓度为2ml/ml时有抗5倍量眼镜蛇毒的凝集反应；有抗2.5倍量内毒素的凝集反应；对多种细菌有抑制作用。结论蛇伤药酒有抗眼镜蛇毒、细菌内毒素和多种病原菌的作用。[关键词]蛇伤药酒；蛇毒蛇伤药酒是我院老蛇医的经验方，由黄连、黄柏、白芷、细辛、雄黄、寮刁竹等18味中草药组成，具有清热解毒、行气止痛之功效。在蛇伤的临床治疗中，用于各种毒蛇咬伤中毒[1]。几十年来发挥了良好的作用。为了证实蛇伤药酒的疗效，作者进行了抗眼镜蛇毒的实验研究，现报道如下：1材料与仪器蛇伤药酒本院制剂批号；鲎试剂批号020628，030816，0.5EU/支;溶解水批号020201；厦门鲎试剂实验厂有限公司。眼镜蛇毒由广州蛇伤研究所提供。电热恒温水浴箱，湖北黄石医疗器械厂；超净化工作台，苏州市净化设备厂。小试管，注射器等经除热原处理。2方法与结果2.1供试液的制备：取蛇伤药酒100ml，置水浴中加热蒸发至无酒味，浓缩至50ml，(浓度为2ml/ml)备用。2.2蛇毒液的制备：2.3鲎试剂的灵敏度复核:[2]按照《中国药典》2005年版附录BET法的规定，复核的鲎试剂灵敏度结果见表1，二批鲎试剂均在0.5~2.0范围，符合标示的灵敏度要求。表1鲎试剂灵敏度复核结果*TAL批号细菌内毒素浓度（Eu·ml-1）λ(EUּml-1)c(EUּml-1)结果1.00.50.250.125NC020628++++++++----------0.500.50合格030816++++++++----------0.500.50合格*：c为灵敏度的测定值分别加入上述不同浓度的眼镜蛇毒液0.1ml，每个浓度做2管，轻轻摇匀，胶布封口，置371℃恒温水浴箱中保温601min，观察结果见表2。表1蛇伤药酒不同药液浓度抗五种蛇毒作用试验结果编号五步蛇毒竹叶青蛇眼镜蛇蝰蛇蝮蛇NcPc蛇毒浓度(g／ml)0.320.500.500.2537.50药液浓度(ml/ml)1.01.01.01.01.0观察结果------------++药液浓度(ml/ml)0.50.50.50.50.5观察结果------++++药液浓度(ml/ml)0.30.30.30.30.3观察结果--++++++++药液浓度(ml/ml)0.10.10.10.10.1观察结果++++++++++3．讨论实验结果表1显示，蛇伤药酒浓度为1.0ml/ml时，均有抗五种蛇毒的作用；浓度为0.5ml/ml时，除蝰蛇、蝮蛇外，具有抗其余三种蛇毒的作用；浓度为0.3ml/ml时，具有抗五步蛇毒的作用；而浓度为0.1ml/ml时，均不具有抗五种蛇毒的作用。本实验证明蛇伤药酒均抗五种蛇毒的作用；蛇伤药酒浓度不同时存在差异，其中抗五步蛇毒的作用最强，抗蝰蛇、蝮蛇作用较弱。蛇伤药酒是由黄连、黄柏、细辛、了刀竹等多种中草药组成，具有较好的解毒攻效，临床不仅用于蛇伤，也用于其它毒虫咬伤等。本实验结果证实了蛇伤药酒的临床疗效，为临床应用该药酒提供了客观依据。3.1在眼镜蛇毒与鲎试剂的凝结反应试验中，三个不同浓度均与鲎试剂产生凝结反应（呈阳性反应）。试验结果显示眼镜蛇毒能与鲎试剂产生凝集反应，可用于中草药的抗蛇毒筛选试验。3.2从表2看出，眼镜蛇毒对鲎试剂产生凝结反应的浓度为5ug/ml,低于5ug/ml则为阴性反应。表明鲎试剂对眼镜蛇毒产生凝集反应的灵敏度为5ug/ml。3.3抗眼镜蛇毒的试验：眼镜蛇毒浓度25ug/ml加入不同浓度蛇伤药酒液，浓度在ml/ml时，有抗凝结反应的作用。证明蛇伤药酒有抗蛇毒的作用。若提高鲎试剂灵敏度，降低蛇伤药酒浓度，更有可能证实其抗蛇毒作用。[参考文献][1]蒋三员，李景新，林天辅等.毒蛇咬伤的中西医结合用药分析,蛇志.1998，10（4）：7.[2]国家药典委员会《中国药典》2000年版，二部，附录:86.[3]刘海云、陈永顺、谢委，等。柴胡总苷皂抗内毒素活性研究[J]。中药材，2003，26（6）：421.[4]郑钧镛,王光宝主编.《药品微生物学及检验技术》.人民卫生出版社,1989北京351.2.2蛇毒液的制备：2.4抗五步蛇毒试验：取125g/mL浓度的五步蛇毒液0.2ml，加鲎试剂溶解水至40ml，摇匀，分别取0.5ml置试管中，备用；取供试药液10ml，加鲎试剂溶解水10ml，摇匀，取4.0、2.4、0.8ml置三个管中，分别加鲎试剂溶解水4.0、5.6、7.2ml，摇匀，配制成1.0、0.6、0.2g/ml三个浓度；分别取不同浓度的药液0.5ml置装有五步蛇毒液的试管中，摇匀，(混合液中五步蛇毒液浓度为0.32g/ml，药液浓度0.5、0.3、0.1g/ml)；再取鲎试剂加鲎试剂溶解水0.1ml溶解，加上述药液与五步蛇毒液的混合液0.1ml，摇匀，每个浓度做二管，胶布封口，并作阴、阳性对照，置371℃恒温水浴箱中保温601min，观察结果见表1。蛇伤药酒抗毒抗菌作用的实验研究*蒋三员，李景新，唐荣德，张健民（广东省江门市新会中医院，广东江门，529100）ExperimentalStudyofAntitoxinandAntisepsisActionforSnakebiteTinctureJIANGSan-yuan,LIJing-xin,TANGRong-de,ZHANGJian-min,YUNan-fa(XinhuiHospitalofTraditionalChineseMedicine,Jianmen,Guangdong,529100,China)[Abstract]ObjectiveToexplorethetreatmenteffectsofanti-cobratoxin,anti-endotoxinandantisepsisforthesnakebitetincture.MethodsThelimulusreagentmethodwasusedinanti-cobratoxinandanti-endotoxintests.Thepaperstripmethodwasusedinantisepsistests.ResultsTheconcentrationforcobratoxintoproduceagglutinationreactionisabove5.0µg/mlinactionwith0.5EU/ml-1limulusreagent.Thesnakebitetinctureconcentrationin2ml/mlhas5timesagglutinationreactionofanti-cobratoxinandhas2.5timesagglutinationreactionofanti-endotoxinandhasinhibitionforsomepathogenicbacteria.ConclusionThesnakebitetincturehasactionofanti-cobratoxin,anti-endotoxinandantisepses.[Keywords]Snakebitetincture;Cobraoxin;Endotoxin;Pathogenicbacteria[摘要]目的探讨蛇伤药酒抗眼镜蛇毒、内毒素及细菌的效果。方法抗眼镜蛇毒和内毒素试验采用鲎试剂法，抗菌试验采用纸片法。结果眼镜蛇毒与0.5EU/ml-1鲎试剂产生凝集反应的浓度在5.0µg/ml以上；蛇伤药酒浓度为2ml/ml时有抗5倍量眼镜蛇毒的凝集反应；有抗2.5倍量内毒素的凝集反应；对多种细菌有抑制作用。结论蛇伤药酒有抗眼镜蛇毒、细菌内毒素和多种病原菌的作用。[关键词]蛇伤药酒；眼镜蛇毒；内毒素；病原菌蛇伤药酒是我院老蛇医的经验方，由黄连、黄柏、白芷、细辛、雄黄、寮刁竹等18味中草药组成，具有清热解毒、行气止痛之功效。在蛇伤的临床治疗中，用于各种毒蛇咬伤中毒[1]。几十年来发挥了良好的作用。为了证实蛇伤药酒的疗效，作者进行了抗眼镜蛇毒、抗内毒素、抗菌的实验研究，现报道如下：1材料与仪器蛇伤药酒本院制剂批号；鲎试剂批号020628，030816，0.5EU/支;细菌内毒素批号020070610EU/支,溶解水批号020201；厦门鲎试剂实验厂有限公司。眼镜蛇毒由广州蛇伤研究所提供。菌种：大肠埃希氏菌（32161）、腐生葡萄球菌（32074）、腾黄微球菌（21144）、宋内志贺菌(21196)、铜绿假单胞菌(11236)，营养琼脂培养基均是中国药品生物制品检定所提供。电热恒温水浴箱，湖北黄石医疗器械厂；超净化工作台，苏州市净化设备厂。小试管，注射器等经除热原处理。2方法与结果2.1供试液的制备：取蛇伤药酒100ml，置水浴中加热蒸发至无酒味，浓缩至50ml，(浓度为2ml/ml)备用。2.2鲎试剂的灵敏度复核:[2]按照《中国药典》2000年版附录BET法的规定，复核的鲎试剂灵敏度结果见表1，二批鲎试剂均在0.5~2.0范围，符合标示的灵敏度要求。表1鲎试剂灵敏度复核结果*TAL批号细菌内毒素浓度（Eu·ml-1）λ(EUּml-1)c(EUּml-1)结果1.00.50.250.125NC020628++++++++----------0.500.50合格030816++++++++----------0.500.50合格*：c为灵敏度的测定值2.3眼镜蛇毒与鲎试剂的凝集反应试验：(1)精密称取眼镜蛇毒素结晶14.0mg，加鲎试剂溶解水7.0ml溶解，（浓度为2000Ug/ml）。取0.5ml鲎试剂溶解水至1.0ml，摇匀，再重复稀释2次，备