第四章药物的杂质检查.

第三章电子稿第三章药物的杂质检查掌握药物中杂质的来源和分类、杂质限量的定义和计算掌握一般杂质检查的原理和方法熟悉特殊杂质检查原理了解特殊杂质检查方法。学习目标一、杂质种类及来源杂质是指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。药物中存在的杂质不仅可以影响药物的质量，而且还可以反映出生产贮藏等过程中存在的问题。因杂质的多少反映药物的纯度高低，所以药物的杂质检查又称为纯度检查。第一节药物的杂质及其来源（一）杂质的种类药物中的杂质按来源分为1.一般杂质：在自然界分布广，容易引入药物中的物质。如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。其检查方法收载在药典的附录中2.特殊杂质：指在有关药物生产或贮藏过程中，因其生产工艺或药物本身的性质可能引入的杂质。随药物的品种而异，如：Aspirin中的游离水杨酸、甾体激素中的其他甾体检查方法收载在药典正文各药品的质量标准中按性质分为信号杂质和有害杂质信号杂质本身一般无害，但其含量的多少可反映出药物的纯度水平，如含量过高，表明药物的纯度差。如氯化物、硫酸盐等属于信号杂质。有害杂质如砷盐、重金属、氰化物对人体有害，在质量标准中要严格控制。（二）药物中杂质的来源1.生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物（2）试剂、溶剂、催化剂类（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质(As\Pb\Fe)2贮藏过程中引入(1)保管不善或贮存时间过长(2)包装不当　　产生杂质发霉潮解、型转化、聚合、异构化、晶水解、氧化、分解在外界条件药品气、微生物温度、湿度、日光、空二、杂质限量检查及其计算（一）杂质的限量检查在不影响药物疗效、稳定性及不发生毒性的前提下,药物中所含杂质的最大允许量.通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示杂质量≤杂质限量＜杂质量药品合格药品不合格限量检查方法有以下三种：对照法灵敏度法比较法（二）杂质限量的有关计算供试品量允许杂质存在的最大量杂质限量%100ScVL供试品量标准溶液浓度标准溶液体积杂质限量%100ScVL%100STVLS式中L——杂质限量，%（或mg/kg）；T——标准溶液浓度，mg/ml（或µg/ml）；V——标准溶液的体积，mL；S——供试品取样量，g。第三节一般杂质检查第二节一般杂质检查一、氯化物检查法1.原理对照法白色浑浊药物：AgClAgNOCl3HNO3白色浑浊）（对照：AgClAgNO,NaCl3HNO3Vc2.操作方法取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25mL（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10mL；溶液如不澄清，应滤过；置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，摇匀，即得供试液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50mL纳氏比色管中，加稀硝酸10mL，加水使成40mL，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0mL，用水稀释至50mL，摇匀，在暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得。3.注意事项标准氯化钠溶液配制：称取氯化钠0.165g，置1000mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10mL，置100mL量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，即得（第1mL相当于10ug的Cl)。3.注意事项①使用的标准氯化钠溶液每1mL相当于10μg的Cl-。测定条件下，氯化物浓度以50mL中含50～80μg的Cl-为宜，相当于标准氯化钠溶液5～8mL。此范围内氯化物所显浑浊度明显，便于比较。应以此计算供试品取样量范围。3.注意事项②加硝酸可避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银及氧化银沉淀的干扰，且可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。酸度以50mL供试溶液中含稀硝酸10mL为宜。③供试品溶液如不澄明，可用含硝酸的蒸馏水洗净滤纸中氯化物后再滤过。3.注意事项④供试品如带颜色，常采用内消色法处理，即取供试品溶液两份，分置50mL纳氏比色管中，一份加硝酸银试液1.0mL，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复过滤，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50mL，摇匀，在暗处放置5min，作为对照溶液；另一份加硝酸银试液1.0mL与水适量使成50mL，摇匀，在暗处放置5min，对两管进行比浊。此外，也可采用外消色法，即加入某种试剂，使供试液褪色后再检查。⑤操作时的温度一般控制在30～40℃，以产生最大的浑浊度，结果也较恒定；若在20℃以下，生成氯化银浑浊的速度较慢，也不恒定。⑥检查氯化物时，应按规定操作程序进行，先制成约40mL水溶液后，再加硝酸银试液，以免在较大浓度的氯化物存在时产生沉淀，影响比浊结果。加入硝酸银试液后，宜缓慢地混匀，如过快则生成的浑浊减少。另外，标准管与供试管必须平行进行实验，如加入试剂的程序及放置时间应一致，所用纳氏比色管的规格一致，比浊时同置于黑色衬底上自上而下观察。二、硫酸盐检查法（一）原理对照法白色浑浊药物：4HCl224BaSOBaClSO白色浑浊）、（对照：4HCl242BaSOBaClSOKVc2．操作方法取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成约40mL（溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性）；溶液如不澄清，应滤过；置50mL纳氏比色管中，加稀盐酸2mL，摇匀，即得供试液。另取各药品项下规定量的标准硫酸钾溶液，置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，加稀盐酸2mL，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5mL，用水稀释成50mL，充分摇匀，放置10min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得。3．注意事项标准硫酸钾溶液的制备：称取硫酸钾0.181g，置1000mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL相当于100ug的SO42-）。3．注意事项①每1mL标准硫酸钾溶液相当于100μg的SO42-。②供试品溶液加入盐酸使成酸性，可防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀生成，影响比浊。但酸度过大可使硫酸钡溶解，降低检查灵敏度，以50mL供试中含2mL稀盐酸为宜。③供试溶液如需滤过，应先用盐酸使成酸性的蒸溜水洗净滤纸中硫酸盐。④供试品如有色，采用内消色法处理，即取供试品溶液两份，分置50mL纳氏比色管中，一份加25%氯化钡溶液5mL，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复过滤，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50mL，摇匀，放置10min，作为对照溶液；另一份加25%氯化钡溶液5mL与水适量使成50mL，摇匀，放置10min，按上述方法对照溶液比较，即得。⑤温度对浑浊有影响，操作温度一般控制在25～30℃，若温度太低，产生的白色浑浊既慢又少，且不稳定。故室温低于10℃时应将比色管在25～30℃水浴中放置10min，再进行比较。⑥采用25%氯化钡溶液，呈现的浑浊度较稳定，使用时不必新配。三、铁盐检查法红色药物：36SCNFeHCl6SCNFeFeFe3o23红色、对照：36HCl3SCNFe6SCNFeVc（一）硫氰酸盐法1.原理2.检查方法药典附录除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品：过硫酸铵50mg25ml稀HCl4mL30%硫氰酸铵H2O50mlH2O供试品标准溶液3mlHNO3与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取各药品项下规定量的标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成25ml，加稀盐酸4ml与（NH4）2S2O850mg，用水稀释使成35ml后，加30%NH4SCN溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀）比较，即得。3、注意事项标准铁溶液的制备：称取硫酸铁铵0.863g，置1000mL量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5mL，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL相当于10ug的Fe)。3、注意事项（1）适宜的比浊浓度为10-50ugFe3+/50mL。（2）测定法中，加入氧化剂过硫酸铵将供试品中Fe2+氧化成Fe3+，同时可防止硫氰酸铁因光照还原或分解褪色。（3）有些药物如葡萄糖、糊精、硫酸氢钠和硫酸镁等在检查过程中加硝酸处理，则不再加过硫酸铵，但必须加热煮沸除去一氧化氮，因硝酸中可能含亚硝酸，能与硫氰酸根离子作用，生成红色亚硝酰氰化物，影响比色。3、注意事项（4）铁盐与硫氰酸根离子的反应为可逆反应，加入过量的硫氰酸铵可增加产物配离子稳定性，提高反应灵敏度，还能消除氯化物等干扰。（5）消色方法：用正丁醇或异戊醇外消色法。四、重金属检查法以铅为代表，共有3种检查方法系指在实验条件下，能与CH3CSNH2或Na2S作用显色的金属杂质。如银、铅、汞、铜、镉、铋、锡、砷、锑、镍、钴、锌等第一法硫代乙酰胺法黄色～棕黑色药物：PbSSHPbpH3.522适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物SHCONHCHOHCSNHCH223pH3.5223黄色～棕黑色、对照：PbSSHPbNOpH3.523Vc1.原理悬浊液2.操作方法除另有规定外，取25ml纳氏比色管三支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml后，加水或各品种项下规定的溶剂稀释成25ml，乙管中加入按各品种项下规定的方法制成的供试液25ml，丙管中加入与甲管相同量的标准铅溶液后，再加入与乙管相同量的按各品种项下规定的方法制成的供试液，加水或各品种项下规定的溶剂使成25ml；若供试液带颜色，可在甲管与丙管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之均与乙管一致；再在甲乙丙三管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。如丙管中显出的颜色浅于甲管，应取样按第二法重新检查。第二法适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。1.原理：500～600℃炽灼，使有机结合的重金属游离，经处理后，依第一法检查。依一法检查氯化物残渣置坩埚中样品：缓冲液左右调节至、、℃炽灼残渣～mlS0.25.3pHpH7.0OHNHOHHClHNO6005002323依一法检查对照：空坩埚缓冲液溶液）（标准、、、、ml0.25.3pHNOPbOHOHNHHClHNOSOH232233422.操作方法H2SO4进一步消化溶解（三）第三法硫化钠法适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。1.原理对照法黄色～棕黑色药物：PbSSNaPbNaOH22黄色～棕黑色、对照：PbSSNaPbNONaOH23Vc悬浊液2.方法取供试品适量，加氢氧化钠试液5mL与水20mL溶解后，置纳氏比色管中，加硫化钠试液5滴，摇匀，与一定量的标准铅溶液同样处理后的颜色比较，不得更深。3.注意事项硝酸铅标准溶液的制备：称取硝酸铅0.1599g，置1000mL量瓶中，加硝酸5mL与水50mL溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液10mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL相当于10ug的Pb)，本液仅供当日使用。3.注意事项（1）适宜的比浊质量浓度为10-30ug/27mL。（2）反应的PH值是3.5，故配制醋酸盐缓冲液时要用PH计测定，调至PH=3.5，此酸度下PbS沉淀较完全。（3）必须蒸干除去氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色检查。3.注意事项（4）温度愈高，重金属损失愈多，炽灼温度为500-600