紫外-可见分光光度法标准操作规程

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------紫外-可见分光光度法标准操作规程制订人/日期文件编码：QC-FF-0011审核人/日期文件版本：00批准人/日期第1页共6页生效日期：年月日第份分发部门：质量管理部、质量控制部目的：建立紫外-可见分光光度法标准操作规程范围：本规范适用于紫外-可见分光光度法检查职责：质量控制部全体人员内容：1.简述本法是通过被测物质在紫外光区的特定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的方法。本法主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。2.仪器紫外-可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。2.1仪器的校正和检定由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm与576.96nm,或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm与637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同会有微小的差别，使用时应注意。波长/nm235(最小)257（最大）313（最小）350（最大）吸收系数124.5144.048.62106.6吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，如上表，相对偏差应在±1％以----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------紫外-可见分光光度法标准操作规程文件编号：QC-FF-0011版本号：00第2页共6页内。杂散光的检查可按下页表的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。试剂浓度（%，g/ml）测定用波长nm透光率%碘化钠1.00220∠0.8亚硝酸钠5.00340∠0.82.2对溶剂的要求测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸收度。溶剂和吸收池的吸收度，在220～240nm范围内不得超过0.40，在241～250nm范围内不得超过0.20，在251～300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。3.样品测定操作方法3.1吸收系数测定（性状项下）按各品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长测定其吸光度，并计算吸收系数，应符合规定范围。3.2鉴别及检查按各品种项下的规定，测定供试品溶液的最大及最小吸收波长，有的必须测定其在最大吸收波长与最小吸收波长处的吸光度比值，均应符合规定。3.3含量测定3.3.1对照品比较法按各品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的（100±10）%以内，用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度。3.3.2吸收系数法按各品种项下配制供试品溶液，在规定的波长及该波长±3nm处测定其吸光度，按各该品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。采用吸收系数法应对仪器进行校正后测定，如为测定新品种的吸收系数，需按后列“吸收系数测定法”的规定进行。----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------紫外-可见分光光度法标准操作规程文件编号：QC-FF-0011版本号：00第3页共6页3.3.3计算分光光度法按中国药典规定，计算分光光度法一般不宜用于含量测定，对于少数采用计算分光光度法的品种，应严格按各品种项下规定的方法进行。用本法时应注意：有一些吸光度是在待测成分吸收曲线的上升或下降陡坡处测定，影响精度的因素较多，故应仔细操作，尽量使供试品和对照品的测定条件一致。若该品种不用对照品，如维生素A测定法（见中国药典附录），则应在测定前对仪器作仔细的校正和检定。4.注意事项,4.1试验中所用的量瓶和移液管均应经检定校正、洗净后使用。4.2使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸收池的透光率，如透光率相差在以下者可配对使用，否则必须加以校正。4.3取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装样品溶液的体积以池体积的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用醮有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放人样品室时应注意每次放入方向相同。使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干防尘保存，吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸（3:1v/v）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。4.4测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，可用1cm石英吸收池盛溶剂以空气为空白（即参比光路中不放置任何物质）测定其吸光度，应符合下表规定，并不得在溶剂的截止使用波长以下测定。4.5每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀的同批溶剂。4.6称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取容积一般应不少于5ml。含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±5%以内。作鉴别或检查可取样品1份。4.7供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸光度以在0.3-0.7之间为宜，吸光度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸光度线性范围，配制合适的读数浓度。4.8选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带半高宽的，否则测得的吸光度值----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------紫外-可见分光光度法标准操作规程文件编号：QC-FF-0011版本号：00第4页共6页会偏低，或以减小狭缝宽度时供试品溶液的吸光度不再增加为准，对于中国药典紫外测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但当吸收带的半高宽小于20nm时，则应使用较窄的狭缝，例如青霉素钾及钠的吸光度检查需用1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸光度会偏低。4.9测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长作为测定波长，除另有规定吸光度最大波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。4.10用于制剂含量测定时，应注意供试液与对照液的PH值是否一致，如PH值对吸收有影响，则应调溶液的PH值一致后再测定吸光度。5.结果计算5.1对照品比较法可根据供试品溶液及对照品溶液的吸光度与对照品溶液的浓度以正比法算出供试品溶液的浓度，再计算含量。C样品=A样品×C对照/A对照式中：A为吸光度；C为测试液浓度（以mg/ml计）。5.2吸收系数法中国药典规定的吸收系数，系指E1%1cm，即在指定波长时，光路长度为1cm，试样浓度换算为1%（g/ml）时的吸光度值，故应先求被测样品的E1%1cm值，再与规定的E1%1cm值比较，可计算出供试样品的含量。E1%1cm（样品）=AC×L式中A为供试品溶液测得的吸光度值；C为供试品溶液的进分浓度，即100ml中所含溶质的克数（g/ml）；L为吸收池的光路长度（cm）。供试品的含量%=E1%1cm（样品）×100E1%1cm（标准）式中E1%1cm（样品）为根据前式计算出的供试品吸收系数；E1%1cm（标准）为药典或药品标准中规定的吸收系数。----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------紫外-可见分光光度法标准操作规程文件编号：QC-FF-0011版本号：00第5页共6页5.3吸收系数测定法本法主要用于新品种的吸收系数测定。5.3.1测定方法取精制样品精密称取一定量，使样品溶液配成吸光度读数在0.6-0.8之间，置1cm吸收池中，在规定波长处测出吸光度读数，然后再用同批溶剂将溶液稀释1倍，使吸光度在0.3-0.4之间，再按上述方法测定。样品应同时测定2份，同一台仪器测定的2份结果，对平均值的偏差应不超过±0.3%，否则应重新测定。测定时，先按仪器正常灵敏度测试，然后再减小狭缝测定，直到减小狭缝吸光值不增加为止，取吸光度不改变的数据。再用4台不同型号的仪器复测。吸收系数可根据朗伯-比尔定律求算。5.4测定注意事项5.4.1样品应为精制品，水分应另取样测定，扣除干燥失重。5.4.2所用的容量仪器及分析天平应经过检定，如有相差应加上校正值。5.4.3测定所用的溶剂，其吸收度应符合规定。吸收池应于临用时配对或作空白校正。5.4.4称取样品时，其称量准确度应按中国药典规定要求。5.4.5所用的分光光度计应经过严格检定，特别是波长准确度和吸光度精度要进行校正。要注明测定时的温度。附件：无相关文件与记录：无培训范围：质量控制部全体人员参考文献：《中华人民共和国药典》2010年版二部，2010年1月第1版，中国医药科技出版社。《中国药品检验标准操作规范》2010版，2010年9月第一版，中国医药科技出版社。编制历史与变更原因：本规程属于海南**制药有限公司第一版文件。版次号修订内容描述生效日期----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------紫外-可见分光光度法标准操作规程文件编号：QC-FF-0011版本号：00第6页共6页00初建