紫外作业指导书

://北京@@@@@@@作业指导书紫外可见分光光度计第1版ZKGX-YQ-SOP-010编制人/日期：审核人/日期：批准人/日期：北京@@@@@@@UV2600型紫外分光光度计操作规程一、开机1.打开仪器电源。2.打开电脑，点击UVAnalyst进入光谱分析软件。3.将仪器端口设置为“Com3”，点击“联机”，软件与仪器联机成功。二、选择测试模式根据实验需求选择测试模式。仪器提供的测试模式有“定量测试”、“定性测试”、“动力学测试”、“多波长测试”、“标准曲线”、“脱氧核糖核酸/蛋白质测试”。【定量测试】在190-1100nm范围内选择所需的测试波长，测定试样在某一波长的吸光度和透射比。1.参数及设置范围2.测试步骤a.在应用程序菜单下，选择“定量测试”，单击。b.设定测试波长，单击确定。c.在样品槽内放入参比，单击OA/100%T快捷键。d.设定标样浓度，按提示放入标样，单击确定。e.在样品槽内放入待测试样，单击测试键，可在右侧的资料区显示测试结果。f.完成测试后，可根据需要打印、存盘。参数设置范围测试波长190-1100nm标样浓度标准样品的浓度值浓度因子吸光度转换为浓度的因子测试方式（二种方式任选一种）并行测试、连续测试样品槽全选或任选北京@@@@@@@【定性测试】在190-1100nm范围内选择所需的波长范围进行试样的吸光度、透射比或能量方式的波长扫描。可根据需要选择所需的扫描次数、扫描精度、起始波长、终止波长和纵坐标的上下限。完成光谱扫描后，可在屏幕操作界面选择所需的功能，对所获得的测试资料进行分析、处理。1.其主要功能有：a.测定波峰和波谷的波长及其相应的吸光度和透射比。b.显示测试波长范围内所有波长的吸光度（透射比）值资料。c.将扫描得到的光谱图转换成1-4阶导数光谱。d.进行光谱的迭加和四则运算。e.对光谱进行平滑。f.进行图谱坐标的标尺变换或将显示部分图谱放大。g.将测试波长范围内的吸光度或透射比资料存盘保存。h.打印所扫描的光谱或数据。2.波长扫描参数及设置范围扫描参数设置范围扫描方式可从三种方式中任选一种Abs（吸光度）%T（透射比)能量方式（放大倍数1-6倍）扫描次数可选择试样的扫描次数1-8次北京@@@@@@@扫描精度可选择相邻二次测定的波长间隔供选择的有0.1,0.2,0.5,1,2,5nm6档起始波长在所建基线波长范围内设置扫描的起始波长190-110nm终止波长在所建基线波长范围内设置扫描的终止波长190-110nm坐标下限设置吸光度、透射比的坐标下限吸光度-0.1——3.0透射比-05——200坐标上限设置吸光度或透射比坐标上限吸光度-0.1——3.0透射比-05——2003.测试步骤a.在“应用程序”菜单下单击“定性测试”。b.设置扫描参数：通过扫描参数设置操作界面，设置扫描方式、扫描次数、扫描精度、起始波长、终止波长、坐标下限和坐标上限，单击确定键。c.建立基线：在光度计的样品槽内放入参比，在“附属功能”的菜单下单击“建立仪器基线”（或单击界面的ScanBaseline键），在对话框内输入起始波长和终止波长值，单击确定键。d.在定性分析图谱操作界面，选择A/T及所需的扫面信道，单击。e.在样品槽内放入待测试样，单击扫面键，即可得到相应的扫描光谱图。f.待光谱扫描完成后，可根据需要采用相应的功能，对测试资料进行分析处理，也可存盘打印。g.如需停止扫描，可按“停止”键，如需返回参数设置界面可按“RESET参数”键。4.测试资料的分析处理a.波峰和波谷吸光度或透射比值测定用鼠标单击Peak/Vally快捷键。将光标移至波峰位置，单击左键，即可显示波峰的波长值及相应的吸光度（透射比）值（黄色）。用鼠标将光标移至波谷位置，单击右键，即可显示波谷的波长值及相应的吸光度（透射比）值（蓝色）。注：仪器不会自动识别波峰/谷，打印出来的报告中只根据左右键来区分波峰/谷。b.数据表单击该键时，可显示测试波长范围内所有波长相应的吸光度或透射比值。c.导数光谱用鼠标将光标移至“数学功能”菜单，单击，再将光标移至“导数光谱”北京@@@@@@@单击，然后选择导数光谱的阶数，单击，即可将光谱转换成相应阶数的导数光谱。d.光谱运算：用鼠标将光标移至“数学功能”菜单，单击，再将光标移至光谱运算，单击。选择“图谱迭加”，单击，在相应的源信道调入所需进行运算的光谱图，选择加、减、乘、除，按确定键。即可将两个光谱进行加、减、乘或除。在光谱运算屏幕操作界面中，选择“图谱四则运算”单击，在源信道内调入所需进行运算的光谱，按提示输入所需的常数值，选择“+”、“-”、“*”或“/”，即可将原光谱加、减、乘或除某一常数值。e.光谱平滑用鼠标将光标移至“数学功能”菜单单击，再将光标移至“光谱平滑”单击。即可对原有的光谱进行平滑处理。f.坐标标尺变换用鼠标将需要更换的纵坐标和横坐标端点的坐标值双击，输入新的坐标值，单击，回车，即可将原来的坐标标尺变换为新的坐标标尺。g.显示部分图谱放大按鼠标左键，画出所需显示部分的图谱，单击界面Zoom快捷键，即可将部分图谱放大。h.A/T%转换单击界面的A或T%，即可进行A/T%转换。【动力学测试】动力学测试的功能可使您在190-1100nm范围内选择某一测试波长进行单波长的吸光度或透射比的时间扫描，建立吸光度（透射比）——时间曲线。其扫描时间、采样间隔及延时时间可任选。1.参数及设置范围参数设置范围测试波长190-1100nm扫描时间（需扫描的总时间）＞0秒采样时间（相邻二次测定的时间间隔）≥1秒延时时间（从按开始键到正式开始扫描的延时时间）≥0秒吸光度（透射比）坐标上限吸光度-0.1——3.0透射比-0.5——200吸光度（透射比）坐标下限浓度因子由已知样品通过一点法求得浓度单位由用户自定义北京@@@@@@@2.测试步骤a.在应用程序菜单下，选择“动力学测试”单击。b.设定测试波长，单击确定。c.在样品槽内放入参比，单击0Abs/100%T快捷键。d.设置时间扫描参数：扫描时间、采样间隔、延时时间、坐标上下限、浓度因子和浓度单位。e.在样品槽内放入试样，按开始键，开始进行动力学测试。f.完成测试后，屏幕界面可显示吸光度（透射比）——时间扫描曲线，也可按界面上“数据表”键，显示所有的测试资料，可根据需要打印或保存图谱和测试。如需终止测试可按停止键。【多波长测试】可根据需要测定不多于32个波长处的吸光度或透射比值。1.参数及设置范围参数设置范围测试波长1-32（190-1100nm范围内）测试方式Abs/%Trans2.测试步骤a在应用程序菜单下选择多波长测试，单击。b.在多波长测试操作界面，设置测试波长数。c.输入测试波长，单击回车。d.选择测试方式手动，单击测试键。e.在样品槽内放入参比，单击仪器波长设置快捷键，设置测试波长，单击确定。f.在样品槽内放入待测试样，双击对应测试波长的吸光度和透过率栏，即可记录该波长处的吸光度和透射比值。g.重复e、f步骤，记录其他测定波长处的吸光度和透射比值。h.完成测试后，可根据需要进行打印或存盘。【标准曲线】建立设定单波长的吸光度——浓度曲线。最多可设置8个标准样品点，并按需要选择曲线的类型。其曲线类型有：线性曲线：可由标准样品作出线性曲线，并显示每个标准样品的吸光度和浓度值及其曲线方程和相关系数。线性过零点：可由标准样品作出校正后过原点的线性曲线，并显示每个标准样品的吸光度和浓度值，以及曲线方程和相关系数。分段拟合：可将有标准样品作出的曲线分段拟合，并显示每个标准样品的吸光度和浓度值。二项式拟合：可将标准样品作出的曲线拟合呈二次曲线，并显示每个标准样品的吸光度和浓度值，以及二次项、一次项和常数项的系数。北京@@@@@@@1.参数及设置范围参数设置范围测试波长190——1100样品数目2-8浓度单位mg、μg、μg/ml2.测试步骤在应用程序菜单下，选择“标准曲线”，单击。设定测试波长，单击确定键。设定标准样品数和浓度单位。在工作表中键入各标样的浓度值。在样品槽内放入参比，单击0Abs/100%T快捷键。在样品槽内依次放入标准样品，双击对应的吸光度栏，即可记录该标样的吸光度值。按绘图键，从标准曲线图谱屏幕操作界面，选择所需的曲线类型，单击，即可得到相应的曲线图以及曲线方程、吸光度、浓度点击左侧主功能栏中的“核酸测量”即可进入核酸测量界面。1.根据实验要求，在“设置”设定检测参数。2.在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。3.点击“空白”，以扣除该波长中空白溶液的背景吸收。4.将检测光路中的空白溶液换成待测样品，点击“测量”得到230nm、260nm、280nm和320的吸光度值同时计算出A260/A280、A260/A230和样品浓度。5.点击“保存”并选择保存路径即可保存测量结果。【蛋白质测量】1.点击左侧主功能栏中的“蛋白质测量”即可进入蛋白质测量界面。2.根据实验要求，在“设置”设定检测参数。3.在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。4.点击“空白”，以扣除该波长中空白溶液的背景吸收5.将检测光路中的空白溶液换成待测样品，点击“测量”，仪器会按照设定好的计算方式和浓度计算方法计算出浓度。6.样品测量完毕后，点击“结束”生成结果文件。7.点击“保存”并选择保存路径即可保存测量结果。三、关机北京@@@@@@@将比色皿中的溶液倒尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，倒立晾干。关电源将干燥剂放入样品室内，盖上防尘罩，做好使用登记，得到管理老师认可方可离开。四、注意事项：1.在光谱线校正过程中光度计状态窗口的读数变化，如测定过程中的改变切换波长，必须重新进行基线校正。2.光谱图像要保存的，一定要保存，否定软件关闭后会丢失。3.此色皿光亮面一定要用擦镜纸，小心划伤。4.先用两个空白溶液，校正吸光度，用一个供试品取代一个空白溶液，测定吸光度。5.一般空白放里面一个，供试样品放外面一个。