第6章芳酸类非甾体抗炎药的分析.

药物分析总论杂质检查药物分析各论学习（具体某类药物）各论的学习方法学习是一种探索和习惯:理解记忆药物结构理化性质鉴别杂质检查含量测定第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析遵义医学院2011级药物制剂专业课程学习要求1.典型芳酸类非甾体抗炎药物的结构与性质2.鉴别试验3.特殊杂质及其检查法4.含量测定方法非甾体抗炎药（NonsteroidalAntiinflammatoryDrugs，NSAIDs）非甾体抗炎药（NonsteroidalAntiinflammatoryDrugs，NSAIDs）是一类不含有甾体骨架的抗炎药，多数具有芳酸基本结构。本类药物的结构特点：•水杨酸类•邻氨基苯甲/乙酸类•芳基丙酸类•吲哚乙酸类•苯并噻嗪甲酸类•其它非甾体抗炎药第一节典型芳酸类非甾体抗炎药物的结构与性质一、典型药物与结构特点OOHOR'R(水杨酸类)OHOHO(水杨酸)(SalicylicAcid)OOHOCH3O(阿司匹林)(Aspirin)OOHOOOH(双水杨酯)(Salsalate)FFOHOHO(二氟尼柳)(Difunisal)水杨酸类(邻羟基苯甲酸类)酸性光谱特性OHNOCH3CH3甲芬那酸HMefenamicAcidOHNORH邻氨基苯甲酸类酸性酸性光谱特性邻氨基苯甲酸类NROOR'H邻氨基苯乙酸类NNaOOClClH双氯芬酸钠DiclofenacSodium酸性酸性光谱特性基团特性邻氨基苯乙酸类pH=7.68UV276nmR'RCH3HOO芳基丙酸类CH3HOOCH3CH3布洛芬IbuprofenCH3HOOO酮洛芬KetoprofenCH3HOOOCH3萘普生Naproxen酸性芳基丙酸类NOOH3CHOCH3ClO吲哚美辛IndometacinNR'RCH3OHO吲哚乙酸类酸性光谱特性吲哚乙酸类NSOHCH3NROOOH苯并噻嗪甲酸类NSOHCH3NOONOH吡罗昔康PiroxicamNSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康Meloxicam水解光谱特性苯并噻嗪甲酸类NO2HNSCH3OOO尼美利舒NimesulideHONCH3OH对乙酰胺基酚Paracetamol其它非甾体类抗炎药水解光谱特性二、本类药物的主要理化性质酸性：pKa3～6水解反应：酯→酸+醇（酚）光谱特性：含共轭体系，在一定波长处有UV吸收。均有红外吸收基团或元素特征pKa4.26pKa3.49pKa2.95第二节鉴别试验一、与三氯化铁反应水杨酸反应OHOHOOOOFeOH+FeCl3+H2O+3HCl紫堇色pH4~6阿司匹林：紫堇色双水杨酯：紫色二氟尼柳：深紫色均通过产生水杨酸与三氯化铁反应显色酚羟基反应•对乙酰氨基酚与三氯化铁显蓝紫色HONCH3OH对乙酰胺基酚ParacetamolFeCl3+Fe1/3ONCH3OH+HCl蓝紫色NSOHCH3NOONOH吡罗昔康PiroxicamNSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康Meloxicam显玫瑰红色显淡紫色二、缩合反应显色CH3HOOO酮洛芬+NHNO2NO2NH2CH3HOONNO2NNO2橙红色H2SO4-H2OH三、重氮化-偶合反应（芳伯胺基）NH2H+,HNO2N2+Cl-NNOHCOOHRCOOHROHOH-RCOOH芳伯胺or水解产生芳伯胺红色偶氮化合物1.H+，亚硝酸钠2.OH-，b-萘酚OCOCH3COONHCOCH3+3H2OHCl贝诺酯HONH2HCl+OHCOOHNaNO2,2HClHON2+Cl-OHNaOHOHNNOH橙红色四、氧化反应甲芬那酸＋H2SO4深蓝色(O)K2Cr2O7△黄色并产生绿色荧光随即变为棕绿色五、水解反应白色沉淀↓+醋酸臭气•酯键or酰胺键•特征现象阿司匹林DCOOHOCOCH3COONaOHCOOHOHNaCO23H2SO4六、特征元素反应ClCl-AgCl↓（双氯酚酸钠）SS2-PbS↓（美洛昔康）OH-DAg+高温Pb2+七、光谱法UV、IRλmax，λminλ-Aλ-吸收系数Aλ1/Aλ2UV八、色谱法供试品保留时间对照品保留时间-COOH-OH-COOHPh-C邻位取代Ph第三节:特殊杂质及其检查法表6-3典型非甾体抗炎药物的主要有关物质药物名称有关物质结构式代码/名称药物名称有关物质结构式代码/名称阿司匹林双水杨酯游离水杨酸萘普生I．6-甲氧基-2-萘乙酮甲芬那酸2,3-二甲基苯胺对乙酰氨基酚氨基酚对氯苯乙酰胺一、阿司匹林中游离水杨酸与有关物质的检查1.游离水杨酸来源：生产中乙酰化不完全贮藏中水解产生ONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+COOHOCOCH3(CH3CO)2OH2SO4,70~75C。ASP水杨酸COOHOOOH双水杨酯OH-CO2副产物危害性：1.对胃肠道的强烈刺激性2.被氧化生成有色醌型化合物，使阿司匹林变色COOHOHCOOHOHHOOOCOOH[O][O]HOOHCOOHCOOHHOOOCOOHHOCOOHOO+COOHOOOCOOH-+检查原理-ChPbefore2010用水杨酸与Fe3+生成紫堇色配离子的原理,用稀硫酸铁铵溶液显色法检查供试品溶液制备过程中阿司匹林水解-ChP2010（HPLC）制备供试品溶液：1%冰醋酸甲醇溶液（防水解）外标法；不得超过0.1%-原料、制剂限量不同原料：0.1%片：0.3%肠溶片：1.5%肠溶胶囊：1.0%泡腾片：3.0%栓剂：3.0%2.有关物质OH(CH3CO)2OOCOCH3+OCOCH3COOHOCOCH3COO+OHCOOHOHCOO醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯HPLC法•有关物质–原料苯酚+副产物–HPLC（图6-2）阿司匹林水杨酸乙酰水杨酰水杨酸a:阿司匹林供试品(10mg/ml)；b:0.5%自身对照(50g/ml)；c:0.05%自身对照(灵敏度试验5g/ml)；d:水杨酸对照(10g/ml)；e:空白阿司匹林的检查五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺HPLCClNO2NH2HOHONO2HONHCOCH3水解还原酰化ClNHCOCH3限量要求：对氨基酚不得过0.005%；对氯苯乙酰胺不得超过0.005%第四节含量测定•羧基：酸碱滴定、非水滴定•酯基：剩余酸碱滴定•苯环：紫外分光光度法、HPLCORCOOH原料药：酸碱滴定法制剂：UV、HPLC一、酸碱滴定法酸碱滴定法水解后剩余量滴定法阿司匹林USP,BP,JP非水溶液滴定法吡罗昔康吡啶环显碱性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定剩余量滴定法美洛昔康水及与水混溶的有机溶剂中难溶,溶于氢氧化钠滴定液后盐酸回滴定直接滴定法水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,尼美舒利以ASP及其制剂为例(一)直接滴定法苯甲酸pKa4.20水杨酸pKa2.98酸性较强COHOHO羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；并有氢键，更增加了其极性直接滴定Aspirin、双水杨酯、二氟尼柳、甲芬那酸、布洛芬、尼美舒利等均采用本法测定含量。pKa3~6的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定pKa6~9的药物要用非水溶液滴定法中性乙醇COOHOCOCH3NaOH20℃以下COONaOCOCH3H2O1.测定法本品约0.4g,精密称定,加中性乙醇20ml溶解后,加酚酞指示液3滴,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定2.讨论①乙醇：溶解Asp，防止Asp水解;②中性乙醇：对酚酞指示液显中性，消除滴定误差③滴定在不断振摇下稍快进行,防阿司匹林水解④受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰只能用于合格原料药的测定。本法特点：简单(二)剩余量滴定法NSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康Meloxicam本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几乎不溶，在丙酮中微溶。所以ChP使用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，再用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。烯醇式结构:酸性为什么氢氧化钠能溶解之？(三)水解后剩余量滴定法OCOCH3COOH2NaOHH2OOHCOONaCH3COONa2NaOHH2SO4Na2SO42H2O取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，缓缓煮沸10min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4USP32-NF271、水解后剩余量滴定法含量%=(V0-V)×F×TW×100%T=0.5××12180.16=45.04(mg/ml)滴定度2、两步滴定法——水解后剩余量滴定法的改进用于Aspirin片测定片剂中有稳定剂HOCCOOHCH2COOHCH2COOH枸橼酸CitricacidHOCHCOOHCHCOOHHO酒石酸Trataricacid水解产物水杨酸SAHAc第一步：NaOH滴定所有的酸：ASP，CA，TA，SA，HAc第二步：水解后剩余滴定取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20ml，振摇使ASP溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4COONaOCOCH3NaOHCOONaOHNaAcH2O2NaOHH2SO4Na2SO42H2O阿司匹林片含量测定方法(ChP2005)如下:含量计算供试品中阿司匹林的含量,由水解时消耗的碱量计算–第1步:中和时,阿司匹林的游离羧酸中和–第2步:水解后剩余量滴定法时阿司匹林与氢氧化钠反应的摩尔比为1:1–滴定度:T=0.1×(1/1)×180.16=18.02(mg/m1)–片剂含量:标示量%=WW×××××标示量100%(V0-V)FT空白消耗样测消耗校正因数滴定度片剂规格平均片重游离SA偏高时结果偏高不能完全排出干扰缺点优点操作简便水杨酸干扰少结果准确，避免游离SA及片剂中稳定直接滴定法水解后剩余滴定法两步滴定法(四)非水溶液滴定法（自学）1.原理吡罗昔康具有吡啶环,显碱性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定2.测定法本品约0.2g,精密称定,加冰醋酸20ml使溶解,加结晶紫指示液1滴,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色,并将滴定的结果用空白试验校正T=33.14mg/ml二、紫外-可见分光光度法(一)直接分光光度法原料药对照品法%100smnAAc对供对百分含量%100WAWDCA%RRS标示量标示量制剂二氟尼柳,美洛昔康,尼美舒利制剂,对乙酰氨基酚及部分制剂;二氟尼柳胶囊含量测定:精密称取内容物适量(二氟尼柳0.1g),置100ml量瓶,加溶剂(0.1mol/L的盐酸乙醇溶液)适量,超声处理10min,用溶剂稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置l00ml量瓶,用溶剂稀释至刻度,摇匀,在315nm的波长处测定吸光度;另取二氟尼柳对照品,用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含50µg的溶液作为对照品溶液,同法测定,计算式中,D为供试品溶液稀释体积(ml,D=100100/5=2000);标示量为胶囊剂的规格(mg/粒)%100WAWDCA%RRS标示量标示量三、高效液相色谱法%100%R标示量标示量WWDAACRX定量方法：外标法色谱方法：反相离子抑制色谱法见书P217表6-4