联合检测NF-KBP50NF-KBP65在甲状腺癌中的表达及意义修改版20141012

NF-kBP50、NF-kBP65在甲状腺癌中的表达及意义[摘要]:目的探讨NF-KBp50、NF-kBp65蛋白在甲状腺癌、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、正常甲状腺组织中的表达及二者与甲状腺癌的浸润、转移的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测NF-kBp50和NF-kBp65蛋白在甲状腺癌组(60例乳头状癌、20例滤泡癌和20例髓样癌)及对照组(30例健康者)的甲状腺组织的表达；并检测30例甲状腺腺瘤患者的甲状腺腺瘤组织和30例结节性甲状腺肿患者的结节性甲状腺肿组织中NF-kBp50和NF-kBp65蛋白的表达及相关性。结果NF-kBp50蛋白在100例甲状腺癌组织的阳性率为73.00%，呈高表达现象，在30例甲状腺腺瘤患者的甲状腺腺瘤组织和30例结节性甲状腺肿患者的结节性甲状腺肿组织的阳性率分别为30.00%和33.33%，呈低表达现象。而在30例健康者的甲状腺组织的阳性率为6.67%，呈极低表达现象。经X2检验，得出NF-kBp50蛋白在甲状腺非癌组织明显低于癌组织，且差异具有统计学意义(P0.05)。NF-kBp65蛋白在100例甲状腺癌组织的阳性率为74.00%，同样呈高表达现象，在30例结节性甲状腺肿患者的结节性甲状腺肿组织和30例甲状腺腺瘤患者的甲状腺腺瘤组织的阳性率分别为36.67%和40.00%，表达率相对较低。而在30例健康者的甲状腺组织的阳性率为10.00%，同样为极低表达现象。经X2检验，得出NF-kBp65蛋白在甲状腺非癌组织明显低于癌组织，且差异具有统计学意义(P0.05)。NF-kBp50蛋白在肿瘤直径≥1.0cm组和肿瘤直径＜1.0cm组阳性率分别为79.41%和56.25%，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，NF-kBp65蛋白在肿瘤直径≥1.0cm组和肿瘤直径＜1.0cm组阳性率分别为94.12%和81.25%，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，NF-kBp50蛋白和NF-kBp65蛋白在淋巴结转移组的阳性率分别为85.19%和87.04%，在无淋巴结转移组的阳性率分别为56.52%%和69.57%，经X2检验其差异均具有统计学意义(P＜0.05)，经X2检验和Spearman等级相关分析，NF-kBp50蛋白和NF-kBp65蛋白的表达呈正相关关系(X2=15.128，r=0.712，P＜0.05)。结论NF-kBp50蛋白和NF-kBp65蛋白参与着甲状腺癌的表达，并于甲状腺癌的发生、发展过程中发挥着重要的协同作用。[关键词]：甲状腺癌；NF-kBP50、NF-kBP65；免疫组化CombineddetectionexpressionandsignificanceofNF-kBP50andNF-kBP65inthyroidcancer[Abstract]:ObjectiveDiscussionNF-KBp50,NF-kBp65proteininthyroidcancer,thyroidadenoma,nodulargoiterandnormalthyroidtissuesandtheircorrelationwiththyroidcancerinvasionandmetastasis.MethodsImmunohistochemicalstainingwasusedtodetecttheexpressionofp50NF-kBandNF-kBp65proteinandcorrelationintheexperimentalgroupof60casesofpapillarycarcinoma,20casesoffollicularcarcinoma，20casesofmedullarycarcinoma，30casesofhealthythyroidtissueascontrolgroup,30casesofthyroidadenomathyroidadenoma，30casesofnodulargoiterpatientswithnodulargoiter.ResultsNF-kBp50proteinin100casesofthyroidcancerpositiverate73.00%,showinghighexpressionofthephenomenon,nodulargoiter30casesofthyroidadenomapatientswiththyroidadenomaand30casesofnodulargoiterpatientsinthepositiverateoftissueand33.33%30.00%respectively,showedlowexpressionofthephenomenon.In30casesofhealthythyroidtissuepositiverate6.67%,showingaverylowexpressionofthephenomenon.ByX2test,drawNF-kBp50proteininthyroidcancertissueswassignificantlylowerthannon-canceroustissue,andthedifferencewasstatisticallysignificant(P0.05).NF-kBp65proteinin100casesofthyroidcancerpositiverate74.00%,thesamephenomenonwashighlyexpressedin30casesofnodulargoiterpatientswithnodulargoiterand30casesofthyroidadenomathyroidglandthepositiverateoftumortissuewas36.67%and40.00%,respectively,expressionrateisrelativelylow.In30casesofhealthythyroidtissuepositiverate10.00%,thesameasthephenomenonofverylowexpression.ByX2test,drawNF-kBp65proteininthyroidcancertissueswassignificantlylowerthannon-canceroustissue,andthedifferencewasstatisticallysignificant(P0.05).NF-kBp50proteinintumordiameter≥1.0cmgroupandtumordiameter1.0cmpositiveratesetat79.41%and56.25%respectively,thedifferenceswerestatisticallysignificant(P0.05),NF-kBp65proteinintumordiameter≥1.0cmgroupandtumordiameter1.0cmgroup,thepositiveratewas94.12%and81.25%respectively,thedifferenceswerestatisticallysignificant(P0.05),thepositiverateofNF-kBp50proteinandNF-kBp65proteininlymphnodemetastasisgrouprespectively,85.19%and87.04%,thepositiverateinthegroupwithoutlymphnodemetastasiswas56.52%%and69.57%,respectively,throughtheX2testthedifferenceswerestatisticallysignificant(P0.05),bytheX2testandSpreamananalyse,NF-kBp50proteinandproteinexpressionofNF-kBp65positivecorrelation(X2=15.128，r=0.712,P0.05).ConclusionsNF-kBp50proteinandNF-kBp65proteininvolvedintheexpressionofthyroidcancer,andplaysanimportantsynergiesinthedevelopmentandprogressionofthyroidcancer.[Keywords]:Thyroidcancer;NF-kBP50,NF-kBP65;immunohistochemistry甲状腺癌是内分泌系统最为常见的恶性肿瘤，也是近年来普外科中的常见病，发病率呈逐年增高的趋势[1-2]。甲状腺癌的病理类型有4种，分别为乳头状癌(papillarythyroidcarcinoma,PTC)、滤泡癌(follicularthyroidcarcinoma，FTC)、未分化型癌(undifferentiatedthyroidcarcinoma，UTC)和髓样癌(medullarythyroidcarcinoma,MTC)，且甲状腺癌以乳头状癌在临床上较为多见[3-4]。目前对于甲状腺的诊断方式较多，但是由于其形态不典型等原因而存在一定的误诊或漏诊，因此应用分子生物学辅助诊断技术可以为其诊断和评估提供可靠的依据。NF-kB为一种蛋白因子，有研究表明[5-6]，NF-kB可通过持续活化而促进肿瘤细胞的增殖，降低其凋亡速度，上调血管内皮生长因子而促进血管新生，诱导基质金属蛋白酶的表达，并提高肿瘤细胞的浸润和转移能力，因此NF-kB参与了肿瘤的发生、发展等多个环节。NF-kBp50、NF-kBp65参与了多种癌细胞的表达，且发挥着重要作用。故本实验联合检测NF-kBP50、NF-kBP65在甲状腺癌中的表达，为甲状腺癌的治疗提供新的思路。1材料与方法1.1研究对象选择2010年2月到2014年2月来我院甲状腺外科进行手术切除的甲状腺组织的新鲜标本190例，其中实验组甲状腺癌标本100例，包括60例乳头状癌、20例滤泡癌和20例髓样癌，另取30例健康者的甲状腺组织，30例甲状腺腺瘤患者的甲状腺腺瘤组织和30例结节性甲状腺肿患者的结节性甲状腺肿组织。纳入标准：全部甲状腺患者均经确诊，无其他严重的脏器类疾病，且所有患者手术前3周内无任何放疗治疗。在100例甲状腺癌标本中，男35例，女65例，年龄为15-78岁，平均年龄为(45.3±15.0)岁，有淋巴结转移者54例，无淋巴结转移者46例，肿瘤直径≥1.0cm者68例，肿瘤直径＜1.0cm者32例。所有患者均在手术前签署我院医学伦理学研究会制定的患者知情书。1.2主要仪器与试剂电热手提式压力蒸汽灭菌器(上海隆拓仪器设备有限公司)，干燥箱(上海维菱科学仪器有限公司)，电热恒温培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)，电子分析天平(北京京科瑞达科技有限公司)，OlympusBH-2显微镜(日本Olympus公司)，显微照相仪(日本Olympus公司)，超纯水系统(德国赛多利斯集团)；兔抗人NF-kBp50克隆抗体(上海田源生物技术销售部),兔抗人NF-kBp65多克隆抗体(上海田源生物技术销售部),免疫组化染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)，浓缩型DAB试剂盒(上海信誉科技有限公司)，其余试剂均购自天津化学试剂三厂。1.3免疫组化染色将本次实验使用的所有标本组织离体后进行固定，乙醇梯度脱水并以石蜡包埋，冷冻后切成4μm的组织切片，加热切片2h后放入4℃的冰箱中保存。取出切片进行苏木精-伊红染色后严格按照免疫组织化学SP染色法的操作步骤进行免疫组织化学染色，以测的NF-kBp50，NF-kBp65蛋白在甲状腺癌及非癌组织中的表达。对照组为NF-kBp50、NF-kBp65阳性表达的乳腺癌切片，且染色结果均为阳性，以含0.05%吐温-20的