胡辛麻镇痛软膏中延胡索乙素提取方法的优化研究

-1-胡辛麻镇痛软膏中延胡素提取方法的优化研究季锡中，韩关绥，方志军（江苏省中医药研究院，江苏南京210028）摘要：目的探索优化延胡素的提取方法。方法在原有临床研究及制剂预试的基础上，对原药材的关键技术条件及基质处方进行优选。结果初步建立了可行、稳定的制备工艺流程，以及制备工艺流程关键步骤的质量控制方法、成品质量控制标准。结论该工艺条件下制备出安全、有效、稳定的中药镇痛霜剂。关键词：延胡索乙素，渗漉，软膏剂，提取工艺中图分类号：R927文献标识码：A文章编号：1673-6427（2012）06-0039-03胡辛麻镇痛软膏为我院已故外科专家，林祖庚主任医师根据多年临床经验，设计的科研处方。主药由祖师麻、延胡索、细辛组成，制成O/W型软膏剂。根据原药材所含主要活性成分理化特性及立题前预试，拟将祖师麻用乙醇提取，延胡索用酸性乙醇提取，细辛提挥发油及水提醇沉其余部分。本实验针对延胡索的单独提取工艺，利用正交法，做工艺技术条件的优选。1仪器与材料1.1仪器与试剂WtersHPLC仪，510泵，996型二极管阵列式检测器，Millenuium2010色谱管理系统；CQX25-06超声清洗器，上海必能信超声有限公司；B-490(水浴)BÜCHI；对照品延胡索乙素（dl-tetrahydropalmatine）购自中国药品生物制品检定所；试剂均为AR（上海化试厂）。1.2药材市售合格药材、经南京中医药大学吴德康教授鉴定，系罂粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的干燥块茎。2方法与结果2.1试验方案的设计：经预试，选用提取方法，溶媒浓度，溶媒酸度及饮片粒度为考察因素见表1，作L8（27）正交优选，考察指标选用具镇痛活性的延胡索乙素[1]及总提取物量，各试验号平行操作。2.2含量测定方法2.2.1色谱条件色谱柱μ-bondpakTMC18(ø3.9×300mm);流动相：甲醇-水-醋酸（76：24：2），10%NH4OH溶液调PH至4.6；流速0.5ml/min；检测波长为280nm；柱温：室温。2.2.2对照品溶液的制备及线性关系的初步考察，精密称定对照品1.750mg，无水乙醇溶解，定容至1ml，为对照品溶液。精密吸取对照品溶液，2、6、10、14、18μl按上述色谱条件测定峰面积见表1。计算得回归方程：Y=1620331X–10882，r=0.9998。表明延胡索乙素在3.5-31.5μg范围内有良好线性关系。作者简介：季锡中（1962-），男，汉族，江苏·宜兴，副研究员，医学学士，从事中药制药工程研究。Tel：[phone]E-mail:[e-mail]-2-2.2.3供试品溶液的制备取相应粒度延胡索30g，照表2因素、水平配对，1-8试验号随机平行试验，相应的提取液浓缩至100ml。按序编号，备用。表1线性考察数据进样量（ul）26101418峰面积5938771716466318279761723993960250914033表2因素、水平表2.2.4测定方法2.2.4.1延胡索乙素含量值测定吸取供试品溶液5ml，挥尽乙醇，10ml水溶解，30%Ca(OH)2调PH至11，乙醚萃放3次（20，20，15ml）合并醚液，回收、挥尽乙醚，残渣以无水乙醇溶解，过滤，定容至5ml，参照《中国药典》2005版一部附录HPLC法相关要素测定[2]，每次进样20µl，计算含量见表3。表3延胡索乙素含量测定结果2.2.4.2固型物测定精密吸取样品2ml，水浴挥干，105℃烘干至恒重，精密称定见表4。表4总提取物测定结果试验号12345678总提取物（mg/ml）19.620.615.716.119.119.618.718.62.3正交试验结果分析正交试验结果见表5，影响延胡索乙素提取的主要因素是C，方差分析具较显著差异见表6，余影响大小依次为B、A、D见表6，最优组合为A1B2C1D2；影响总提取物的主要因素是B，方差分析具较显著差异见表7，余影响大小依次为A、C、D，最优组合为A2B1C2D2。表5延胡索提取正交试验表ABCD延胡索乙素总提取1234567含量值×100物×101111111140219621112222405206因素ABCD水平提取方法醇浓度（%）PH粒度（目）1回流（8倍1h，6倍0.75h）504202渗漉（10倍媒，流速1ml/min）70640试验号12345678含量（mg）4.024.055.464.514.463.744.763.77-3-312211225461574122221145116152121212446191621221213741967221122147618782212112377186K11804162716661869169817741702K21673185018171608177917031775R43563768201819S22145621630818515820630666K1720791775733735737740K2760691707749747745742R1125174320.5S222051250578321880.5表6延胡索吸收度方差分析来源离善平方和自由度方差F值显著性A2145121451.42B6216162164.11C8515185155.63*D66616660.40e453131510.3F0.05(1,3)=10.1F0.1(1,3)=5.54*P0.1表7总提取物方差分析来源离差平方和自由度方差F值显著性A220.51220.51.10B1250112506.21*C321320.16e6043201.3F0.05(1,3)=10.1F0.1(1,3)=5.54*P0.1结合成本等综合因素考虑，工艺选用A2B2C1D1，即20目延胡素用PH4的70%乙醇渗漉。2.4工艺小试确定具体技术参数（以供工艺放大参考）2.4.1样品制备照正交优选的工艺技术条件及《中国药典》2005版一部附录[3]流侵膏制备法中渗漉要点操作。用HCl调至PH4的乙醇为渗漉溶媒，取20目延胡索2kg，3L渗漉溶媒湿润4h，装筒、浸渍16h后，滴速6ml/min渗漉。渗漉液收集到10L时，每500ml取样一次，以原浓度供TLC检出。2.4.2TLC检出试验、计算用量参照《中国药典》2005版一部附录TLC法[4]，硅胶G板，点样5ul，环CBADBACD-4-已烷—二乙胺（15:1）展开，改良碘化铋钾试液显色，视有无明显的延胡索乙素斑点见表8。表8延胡索乙素TLC检出试检样品号12345678910111213TLC结果++++++++++++--渗漉用溶媒=3+10+0.5×13=19.5L，延胡索渗漉溶媒量约为物料量的10倍。2.4.3渗漉速度的计算渗漉速度=6ml/min÷2kg×投料量kg=3×投料量（kg数）ml/min3结论及讨论经正交试验及工艺小试，胡辛麻镇痛软膏延胡索的提取工艺定为以1.5倍量渗漉溶媒湿润物料4h，装筒，浸渍16h后，以与投料量相应的渗漉速度渗漉，制成相应的中间品备用。中药软膏多采用凡士林、饴糖等为基质调制而成，相比之下W/O、O/W型软膏基质对所载主药的量和其理化性质有较为苛刻的要求，如有较多直接粉碎入药的或提取物量较大的主药，往往达不到良好的乳化效果或乳化了却无合格的稳定性。本实验目的在优化延胡索提取工艺，以获得指标成分含量较高的提取物，以便制成合格的软膏剂。另外，对传统渗漉法具体工艺技术参数的确定，作了考察研究，获得了较为理想的可参考数据，给工艺放大提供了依据。参考文献：[1]原永芳，李修禄，柳正良等.超临界流体萃取及高效液相色谱法分析延胡索中延胡索乙素的含量[J].药学学报，1996，31(4):282.[2]《中国药典》[S].一部.2005,附录VID.[3]《中国药典》[S].一部.2005,附录IO.[4]《中国药典》[S].一部.2005,附录VIB.