胰弹性蛋白酶的制备

生物制药工艺学实验生物技术实验实验要求•实验2人一组，•穿工作服。•实验听从老师安排，注意仪器使用，安全。•不得缺席，旷课三次没有成绩。•实验结束洗涤，值日、检查安全。实验报告：•英文书写•内容:实验目的（英文）实验原理（英文）操作流程（英文）实验结果（英文）讨论（英文、中文或双语）实验成绩评分标准•平时实验20•+实验报告60•+设计实验20Experiment1：PreparationofElasticProteasefrompancreasandAnalysisofEnzymeActivity实验一：胰弹性蛋白酶的制备与活性分析Purpose•1.LearntheprincipleofPreparationofElasticProteasefrompancreas.•2.Mastertheanalysismethodofenzymeactivity.Frozenpancreas（75g）Activation24℃，24hremovethefat，cutintopiecesadd50mlHAc-buff,mashedPancreaticplasmaadd250mlHAc-buff，ph4.525℃stirfor1hours,FilterFiltrate40gResinAdsorption25℃stirfor1.5hours,WaterwashingResin(absorbprotein)add50ml1MNH4Cl-buff，ph9.0stirfor1h,adjustpH(5.2pH6.0)，FilterEluateAdd3-time-volumncoldacetoneRoomtemperature20min,4000rpm×10minprecipitationAcetonewash2timesEtherwashonetime，VacuumdryingElastasepowderProceduresstandardcurveTubeNo012345Referencesubstancesolution（ml）02.04.06.08.010.0mixtureofboricacidbufferandphosphateacidbuffer(1:1)（ml）10.08.06.04.02.00A（495nm）value2：SamplepreparationTake3tubestooperateaccordingtothetablebelow:TubeNo012Congoredelastin（mg）1.233PH8.8Boricacidbuffers（ml）544Awaitmeasuringenzymeliquid（ml）－1137℃ishydrolyzedfor20minutes'(Theintermittenceisstirred20ormoretimes)PH6.6Phosphoricacidbuffers（ml）555Takethesupernatantaftercentrifugation(3000rpm×10min)A（495nm）value制备工艺：活化剪去脂肪，切块加250mlHAc-buff，ph4.5冻胰脏（75克）-------------→-------------→胰浆-------------------------24℃，24h加50mlHAc-buff37℃搅拌1h,过滤40g树脂加50ml1MNH4Cl-buff，ph9.0滤液------------------------------树脂------------------------------------------------25℃搅拌2h,水洗涤搅拌1h,间隔测pH(5.2pH6.0)，抽滤丙酮洗涤2次，洗脱液-----------------------------沉淀--------------------------------------------弹性酶粉加入2-3倍冷丙酮，乙醚洗1次，真空干燥•附：•树脂处理：取干AmoerliteCG50树脂，水漂洗后加5倍体积1NNaOH搅2小时，水洗至中性。加5倍体积1NHCl处理2小时，水洗至中性，再用pH4.50.1M醋酸缓冲液平衡过夜。注意事项•离心的转子和离心机配套使用。•离心前要平衡转子。•离心有机溶剂，要封上保鲜膜。•干燥蛋白前要封上保鲜膜并戳洞。•磁力搅拌器不要加热。