脂肪酸提取和检测的方案

海带粉碎成粉，过筛称取250g的海带粉装入500ml的大圆底烧瓶，加入石油醚（乙醇、乙醚）用微波萃取法提取脂肪酸，500ml大圆底烧瓶称重固液比分别为1：6，1：7，1：8，1：9，1：10微波功率500W，提取时间5min，温度50℃抽滤滤液浓缩60℃滤渣继续提取，提取3次固液比分别为1：6，1：7，1：8，1：9，1：10微波功率500W，提取时间5：00，温度50℃称重集中收集，一起浓缩称100ml的空锥形瓶，称取5g的样品加入到100ml的锥形瓶中加10mL0.5mol/L氢氧化钠—乙醇溶液，在瓶口上插一小漏斗，漏斗上再盖一块玻璃沸水加热1小时反应完成后移去漏斗，继续加热除去乙醇。再加人10mL蒸馏水，加热，使皂化物溶解成混合液。加浓盐酸(约5mL)使之呈酸性加热，可见脂肪酸呈油状浮于上层时，用分液漏斗分开上下层上层用热水重复洗涤三次，每次用水100m1，除去混杂于脂肪中的无机盐、甘油、盐酸等，静置澄清，上清液即为脂肪酸加入10ml，0.5mol/L的硫酸，在瓶口上插一小漏斗，漏斗上再盖一块玻璃加热1小时加人10mL蒸馏水油状物分层，用分液漏斗分开上下层，上次用热水重复洗涤三次，洗去甘油、硫酸等，静置澄清，上清液即为脂肪酸称量两个100ml圆底烧瓶中加入2g经预处理的样品[1]加入25ml,0.5mol/l的KOH-CH3OH,25ml石油醚加热60℃，处理30min冷却加入甲醇7ml和3-4滴BF3-乙醚冷却后加入25ml饱和NaCl溶液至中性，取上层清夜，称重加入为处理的2g未经预处理的样品加入25ml,10：1的浓硫酸-CH3OH加热60℃，处理30min加入2ml石油醚再加蒸馏水至瓶颈，取出上清，再用2ml石油醚洗多次，合并上清，放入小瓶中待测，称重参考文献：[1]寇秀颖，于国萍.脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究.《食品研究与开发》,2005,26(2),起止页码[2]闰玉霞,李平林,蔡扬鹏,李八方.利用GC一MS测定不同甲醋化条件下沙蜚脂肪酸组成.《中国海洋药物杂志》，2010，第29卷第6期[3]何勇，彭莺，黎军.硫酸催化甲酯化气相色谱法测肥皂产品中的脂肪酸分布及总脂肪物含量.《顺德职业技术学院学报》,2011,7:第9卷第3期[4]曾虹燕,李昌珠,蒋丽娟.用GC-MS分析不同方法提取的茶油脂肪酸.《热带亚热带植物学报》，2005,13(3):271-274[5]蔡心尧,尹建军.海藻中多不饱和脂肪酸的测定方法.《无锡轻工大学学报》，1999，9：第18卷第5期[6]罗盛旭，梁振益，陈佩.海带脂肪酸的提取及其成分分析.《海南大学学报自然科学》，2005，9：第23卷第3期[7]冯小峻，邓舟，陆慧宁等.GN海带新品系脂肪酸的气相色谱一质谱联用分析.《中山大学学报》，2010，11：第49卷第6期[8]纪丽丽，宋文东，刘建秀.红树林植物露兜中挥发油和脂肪酸的测定.《现代食品科技》,2008:V01．24，No．6[9]朱晓楠,魏士刚等.微波辅助提取一气相色谱质谱联用测定肉桂中的挥发油.《高等学校化学学报》，2009，7：V01．30，No．7，1300一13041.脂肪化学名甘油三酯，脂肪是由甘油和脂肪酸组成的三酰甘油酯，其中甘油的分子比较简单，而脂肪酸的种类和长短却不相同。脂肪酸分三大类：饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸。脂肪在多数有机溶剂中溶解，但不溶解于水。2.多不饱和脂肪酸指含有两个或两个以上双键且碳链长度为18～22个碳原子的直链脂肪酸。通常分为omega－3和omega－6，在多不饱合脂肪酸分子中，距羧基最远端的双键在倒数第3个碳原子上的称为omega－3；在第六个碳原子上的，则称为omega－63.单不饱和脂肪酸,在分子结构中仅有一个双键；多不饱和脂肪酸,在分子结构中含两个或两个以上双键脂肪转化为脂肪酸的方法：1.脂肪在碱性溶液底下水解生成脂肪酸钠，然后加入硫酸，溶于水，不溶于乙醇。无水物是白色晶体或粉末，浓缩把乙醇蒸出，得到脂肪酸脂肪酸提取：称200g的海带粉，加入固液比为1:5的乙醇在50℃,500W的条件下用微波法提取，抽滤，取滤液静置，滤渣再加入1:4的乙醇溶剂进行二次提取，提取条件为50℃,500W的条件下进行,提取后抽滤，静置至一段时候后,充分析出白色固体后抽滤进行浓缩,在浓缩前可适当加入甲醇,再经行浓缩现象:甲酯化：酸化甲酯化1.加入正己烷4ml，浓度2mol的氢氧化钾一甲醇溶液2ml，剧烈振摇1—2min，30度水浴反应20min。加入三氟化硼-甲醇溶液，3000r／min离心10min。取上清液待测。其中三氟化硼法能利用快速皂化使脂肪酸盐直接转化成脂肪酸甲酯，减少酸化提取手续2.取1．3g浸膏，加0．5mol·L～KOH-CH3OH溶液25mL，苯一正己烷(体积比为1：1)溶液25mL，室温下振荡5min后，加热至60℃，处理20min，冷却后，加入饱和NaCI溶液25mL，静置分层后取上层清液进行GC—MS分析。3.样品5g，于小烧杯中，加入乙醚16.7mL，正己烷8.3mL，使脂肪完全溶解后转入250mL容量瓶，加入甲醇25mL，再加入0.8mol/L甲醇-KOH溶液25mL，摇匀后静置10min。加蒸馏水至刻度，吸取上层溶液，待作GC-MS分析。气相条件：进样口温度270℃，温100℃，以10℃/min升到170℃保持1min后，以3℃/min升到250℃，保持4min；流速：恒流模式2.4mL/min，分流进样分流比为50:1。测定方法：将沙棘油进行氢氧化钾-甲醇室温酯化法处理后进样分析，进样量0.2μL。按气相条件，用GC-MS测定样品后得到色谱图。利用气质联用仪所带的标准图谱库的质谱数据进行自动检索，同时根据质谱图及相关文献鉴定出主要色谱峰对应的物质名称，并使用数据处理系统对色谱峰进行面积归一化处理，从而计算出各物质相对含量。加入3-4滴BF3-乙醚溶液，将混合物放置在70℃的水浴中加热3分钟，冷却后，加入1ml正己烷，振摇使甲酯转入正己烷层4.称取2．0mg提取出的茶籽油于小样品瓶中，加入1．5mL正己烷溶解油样，摇匀，加入60“L乙酸甲酯，摇匀静置10min。用移液枪往每个小瓶中加入100“L27mg／mL甲醇钠甲醇溶液，在振荡器上振荡2min，然后静置20min以上使甲酯化完全，加入饱和草酸60¨L使甲酯化终止，摇匀静置于一24℃冰箱内20min。取出，将样液通过无水硫酸钠微柱脱水，用小瓶收集滤液约1．2mL上机测定。5.取1ml样品,加2N的甲醇氢氧化钾溶液0.5ml,然后加10ml正庚烷在120度的温度下加热半小时就可以直接进样了.也可以用比较复杂的方法进行,样品大约20克,无水甲醇50ml左右,加浓硫酸5ml,在不低于95度的水浴中回流六小时以上,然后萃取甲酯.萃取后甲酯用无水乙醇以1:3或1;5比列稀释后进样即可.6.加入3ml的KOH甲醇溶液，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温（可用水冷），加入5ml三氟化硼溶液，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入3ml正己烷，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入适量饱和食盐水溶液，静止3~5min，取上层油样1ml于试样瓶中，进GC分析脂肪酸甲酯化方法的选择。在对食物样品中的反式脂肪酸含量进行分析测定前，需对其甲酯化处理。甲酯化的方法很多，常用的有氢氧化钾一甲醇法、浓硫酸一甲醇法、三氟化硼一甲醇法。氢氧化钾-甲醇法是一种在常温下进行的碱处理方法，其原理是将油脂降解为甘油和脂肪酸，脂肪酸与甲醇结合生成瞻肪酸甲酯。该方法无需冷凝回流，常温下酯化效果好，组分完全分离，适用范围广。可用于分析动植物油脂、食品中油脂、藻类、微生物类脂肪酸，目操作简单。省时省力。加入5ml的甲醇,摇匀,稍微加热至溶解配取0.5ml浓硫酸和2.5ml的,加入到上述样品中摇匀,组装回流装置称取1g样品加入到50ml的圆底烧瓶内,在60℃下水浴加热回流,回流时间为30min回流时加入搅拌子充分搅拌,避光回流冷却后,加入15ml的石油醚萃取,提出上层,下层重复前萃取步骤称量100ml空瓶子重量,合并上层溶液到100ml的圆底烧瓶内,在50℃下水浴浓缩至干,称重样品点板酸化体积比1:15浓硫酸-甲醇溶液0.碱化取样品1g加入到100ml的圆底烧瓶加入5ml的甲醇,摇匀,微热溶解加入0.4g的KOH固体2.5ml的甲醇内,搅拌,直至KOH固体完全溶解后加入到100ml的圆底烧瓶内,摇匀1mol/L的KOH-CH3OH组装回流装置,在60℃下水浴回流,回流30min,加入搅拌子搅拌,避光回流冷却至室温,加入15ml的石油醚萃取,提取上层,下层重复前萃取步骤两次称量100ml圆底烧瓶,合并上层液到100ml圆底烧瓶,在50℃下水浴加热浓缩至干,称量点板