第七章苯乙胺类拟肾上腺素药物分析

第七章苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析拟肾上腺素类药物具有收缩血管、升高血压、舒张支气管等药理作用，临床用于升压、平喘、充血治疗等，应用广泛。R1CHCHNHR2·HXOHR3乙胺含苯环的基团苯乙胺类CH(OH)COOHCH(OH)COOHH2SO4HCl•1、苯环常被活泼的酚羟基取代•2、具有碱性的脂肪乙胺侧链，易于被氧化第一节结构与性质常见的苯乙胺类药物HOHOCOHHCH2NHCH3肾上腺素R1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3HOHOCOHHCH2NH2重酒石酸去甲肾上腺素CCCOOHCOOHOHHHHOR1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素R1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3HOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素盐酸苯乙双胍R1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3R1CHCHNHR2OHR3HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素盐酸麻黄碱ClH2NClCHOHCH2NHC(CH3)3HCl盐酸克仑特罗H2SO42HOCH2OHCHOHCH2NHC(CH3)3硫酸沙丁胺醇R1HCOHHCR3NHR21.弱碱性：烃胺基侧链，仲胺氮－弱碱性。2.溶解性：其游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水。*主要化学性质3.酚羟基特性：•邻苯二酚（或苯酚）结构，与重金属离子络合呈色；•在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；•在碱性溶液中更易变色；•甲醛-硫酸反应。4.光学活性：手性碳原子，具有旋光性。5.苯环取代基特性：如盐酸克伦特罗芳伯氨基6.紫外吸收、红外吸收特性第二节鉴别试验一、与三氯化铁的反应——酚羟基与Fe3+络合（多显绿色），加入碱性溶液即变色（多为紫色），随后被高铁离子氧化并发生颜色变化（多为紫红色）。药物与三氯化铁反应显色肾上腺素翠绿色，加氨试液，显紫色紫红色重酒石酸去甲肾上腺素翠绿色，加碳酸氢钠试液，显蓝色红色盐酸去氧肾上腺素紫色盐酸异丙肾上腺素深绿色，滴加新制的5％碳酸氢钠试液，显蓝色红色硫酸沙丁胺醇紫色，加碳酸氢钠试液，橙黄色混浊二、与甲醛-硫酸反应与甲醛-硫酸试液反应，形成具有醌式结构的有色化合物。可用于区别同类药物。药物与甲醛－硫酸试液反应肾上腺素红色重酒石酸去甲肾上腺素淡红色盐酸去氧肾上腺素玫瑰红橙红深棕红盐酸异丙肾上腺素棕色至暗紫色三、氧化反应本类药物分子结构中多数具有酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾等氧化剂氧化而呈现不同的颜色。药品条件氧化剂现象肾上腺素中性或酸性碘或过氧化氢生成肾上腺素红，放置可变为棕色多聚体盐酸异丙肾上腺素偏酸性碘试液（加硫代硫酸钠使过量的碘褪色）生成异丙肾上腺素红，溶液显淡红色重酒石酸去甲肾上腺素加酒石酸氢钾饱和溶液（pH3.56）溶解加碘试液放置5分钟后，加硫代硫酸钠试液无色或仅显微红色或淡紫色四、双缩脲反应：盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱侧链具有氨基醇的结构，可显双缩脲特征反应。中国药典2010盐酸麻黄碱的鉴别：醚层紫红色乙醚蓝紫色CuSO4+盐酸麻黄碱水层蓝色20%氢氧化钠1mlNH2ClCH3H3COH+CuSO4+4NaOHONHH3CCH3CuOCH3HNCH3+++Na2SO4NaCl4H2O盐酸麻黄碱显蓝紫色加乙醚乙醚层显紫红色，水层显蓝色2•盐酸去氧肾上腺素的鉴别：•盐酸去氧肾上腺素+CuSO4显紫色•乙醚层不显色20%氢氧化钠1ml乙醚HOHCOHHCCH3NH2重酒石酸间羟胺水溶解亚硝基铁氰化钠试液丙酮(无甲醛)数滴，碳酸氢钠少量△红紫色丙酮中不能含有甲醛?OHNa2[Fe(CN)5NO]+H2NNa2[Fe(CN)5H2NOH]+H2OOH-五、与亚硝基铁氰化钠反应（Rimini试验）——脂肪伯氨基脂肪族伯胺的专属反应六、紫外特征吸收与红外吸收光谱中国药典规定利用紫外特征吸收与红外吸收光谱可以用来鉴别苯乙胺类药物。例：盐酸异丙肾上腺素可采用其水溶液(浓度为0.O5mg/ml)在280nm处的吸收度为0.50，进行鉴别;盐酸异丙肾上腺素亦采用红外吸收光谱进行鉴别。第三节特殊杂质检查一、酮体检查酮体：肾上腺素等在合成过程中都是经过中间体肾上腺酮等通过催化氢化而得到的还原产物。当氢化不完全时，在产品中会带入上述酮类杂质，中国药典将其总称为酮体。原理：利用酮体在310nm波长处有最大吸收，而药物本身在此波长处几乎没有吸收，规定一定浓度溶液在310nm波长处的吸收度限制酮体的量。方法：吸收度法。肾上腺酮肾上腺素肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线肾上腺素肾上腺酮药物杂质溶剂C(mg/ml)λ(nm)A肾上腺素肾上腺酮HCl(9→2000)2.0310≤0.05盐酸去氧肾上腺素酮体水2.0310≤0.20重酒石酸去甲肾上腺素去甲肾上腺酮水2.0310≤0.05盐酸异丙肾上腺素酮体水2.0310≤0.15盐酸甲氧明酮胺水1.5347≤0.06紫外分光光度法检查酮体的条件及要求肾上腺素的杂质限量计算：310nmA2.0mg/mlHCl0.05mol/L测的溶液溶液样品规定：A310nm≤0.05限量计算肾上腺酮的453E%1cm12/1000100=0.055杂质限量%=4530.05××%%1001定容至100ml量瓶二、光学纯度检查：ChP2010：测定比旋度值。常用方法：高效液相色谱法和毛细管电泳法。药物溶剂C(mg/ml)比旋度肾上腺素HCl(9→2000)20-50.0~-53.5盐酸去氧肾上腺素水20-42~-47重酒石酸去甲肾上腺素水50-10.0~-12.0盐酸麻黄碱水50-33~-35.5盐酸伪麻黄碱水50+61.0~+62.5手性碳原子三、有关物质检查盐酸去氧肾上腺素——TLC（高低浓度对比法）盐酸苯乙双胍——PC（下行法）肾上腺素——HPLC第四节含量测定原料药:非水溶液滴定法、溴量法、亚硝酸钠法制剂:紫外分光光度法、比色法和高效液相色谱法等。一、非水溶液滴定法定义：是指在非水溶剂中进行的酸碱滴定测定法.应用：主要用于测定有机碱及其氢卤酸盐、硫酸盐以及有机酸碱金属盐类药物的含量，也用于测定某些有机弱酸的含量。溶剂种类：（1）酸性溶剂：有机弱碱在酸性溶剂中可显著地增强其相对碱度，最常用的酸性溶剂是冰醋酸。（2）碱性溶剂：有机弱酸在碱性溶剂中可显著地增强其相对酸度，最常用的碱性溶剂是二甲基甲酰胺。（3）两性溶剂：兼有酸碱两种性能，最常用的是甲醇。（4）惰性溶剂：溶剂没有酸碱性，如甲苯、三氯甲烷、丙酮。应用非水溶液滴定法的原因酸碱滴定是在水溶液中进行的溶剂--水局限性：(1)许多弱酸或弱碱,Ka或Kb小于10-8，不能直接滴定(2)有些有机酸或有机碱在水中溶解度小，使滴定不能直接准确进行(3)-些多元酸或碱，混合酸或碱由于Ka(Kb)值较接近，不能分步或分别滴定。•本类药物含有脂烃胺基侧链，多为弱碱性，在水溶液中用酸碱滴定液直接滴定没有明显的突跃，终点难以观测。而在非水酸性溶剂中，只要在水溶液中的pKb10，均可以被冰醋酸均化到溶剂醋酸根水平，相对碱度显著增强。因而可使弱碱性的药物都能顺利进行滴定。以高氯酸滴定弱酸为例，在冰醋酸中：弱碱BpKb10则在水溶液中无法进行滴定再置换4444BHAcBHAcHClOAcHAcClOBHClOBHClO滴定时总的反应先反应相当于（一）基本原理游离碱盐类：被置换出的HA的酸性强弱不同，对滴定反应的影响也不同。若酸性较强，比如氢卤酸，则反应不能定量完成，这时要加入醋酸汞以消除氢卤酸的干扰。（二）一般方法•在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示剂或电位法确定终点。并用空白试验校正。•注意：（1）有机碱的盐酸盐不能直接用高氯酸滴定，要加醋酸汞消除氢卤酸的干扰。（2）若碱性较弱应加入醋酐使突跃明显。（3）加入醋酐应防止氨基被乙酰化，因此用冰醋酸溶解样品后应放冷再加醋酐。（4）伯氨基的乙酰化物不能用结晶紫指示终点。（三）问题讨论•1、适用范围：主要用于Kb﹤10-8的有机碱盐Kb在10-8～10-10时，选用冰醋酸做溶剂Kb在10-10～10-12时，选用冰醋酸和醋酐的混合溶液做溶剂Kb在﹤10-12时，选用醋酐做溶剂2、酸根的影响在醋酸介质中的酸性排序为：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸磷酸有机酸氢卤酸盐：加醋酸汞冰醋酸溶液消除对滴定的干扰加入的醋酸汞量不足时，会影响滴定终点而使结果偏低过量的醋酸汞(理论量的1～3倍)并不影响测定的结果为环保用醋酐代替冰醋酸为溶剂。磷酸盐：直接滴定。硫酸盐：直接滴定。硫酸为二元酸，但在非水介质中只显示一元酸解离为HSO4－，目视终点灵敏度较差，电位突跃也不明显，用大量醋酐代替冰醋酸，为溶剂，可以提高终点的灵敏度。硝酸盐：硝酸会使指示剂退色，用电位滴定法指示终点。3、滴定剂的稳定性溶剂醋酸具有挥发性，膨胀系数较大。若温差超过10℃应重新标定。不超过10℃浓度需要校正。4、终点指示法电位滴定法：玻璃电极为指示电极，饱和甘汞电极为参比电极。指示剂法：常用指示剂为结晶紫。5、其他干扰对有机碱性药物碱化处理，提取分离出游离碱。二、溴量法盐酸去氧肾上腺素、重酒石酸间羟胺原料药采用溴量法测定含量。例：以盐酸去氧肾上腺素为例讨论溴量法原理：测定方法：•样品溶解密塞，放置15分钟并时时振摇密塞，振摇滴定至蓝色消失水溴滴定液HClKINa2S2O3淀粉指示液操作要点(1)游离的碘及溴极易挥发，操作过程中必须防止逸失。(2)溴液不能太过量:过量：溴代反应中会引起酚羟基的氧化或溴化一般加入的溴液以过量2%为宜。(3)进行空白试验：校正操作中溴及碘的可能逸失。三、亚硝酸钠法盐酸克伦特罗，芳伯氨基，重氮化反应，永停滴定法指示终点。NH2ClClCHCH2NHC(CH3)3HON2ClClClCHCH2NHC(CH3)3HO+NaNO22HClNaCl2H2O+++四、紫外分光光度法：苯乙胺类药物分子具有苯环结构具有特征的紫外吸收，Chp2010采用这种方法测定多种此类药物。如盐酸甲氧明注射液，重酒石酸间羟胺注射液。比色法：分子中具有芳伯胺基的药物采用重氮化-偶合反应显色，分子中含有酚羟基可与亚铁离子显色，然后进行比色测定。Chp2010采用比色法测定盐酸盐酸克仑特罗栓和盐酸异丙肾上腺素。五、高效液相色谱法