芦丁的提取

实验红枣中黄酮类化合物（芦丁、槲皮素）的提取、精制与鉴定惠岑怿生命与化学科学学院化学实验中心概述黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一类重要的天然有机化合物。其不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。这类含有氧杂环的化合物多存在于高等植物及羊齿类植物中。分布：黄酮类化合物在花、叶、果等组织中多以苷的形式存在，而在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在。(苷，即糖苷的简称）性质：黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再将碱水提取液调成酸性，黄酮苷类即可沉淀析出。此法简便易行，芦丁、橙皮苷、黄芩（qin)苷提取都应用此法。芦丁的提取与定性反应一实验目的和要求实验目的：以槐米中提取黄酮类化合物--芦丁，掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法掌握黄酮类化合物的化学定性鉴定，熔点和薄层分析等方法，了解UV及NMR在苷类结构鉴定中的应用实验要求获得三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰物能根据化学实验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解芦丁的提取与定性反应OHOOHOOOHOHOOHOHOHCH2OOOHOHOHOAcOOAcOOOAcOAcOOAcOAcOAcCH2OOOAcOAcOAc槲皮素芦丁芦丁十乙酰化物OHOOHOOHOHOH5733'4'芦丁的提取与定性反应实验原理提取原理---芦丁分子中有酚羟基，呈弱酸性。在碱水中成盐而增大其溶解度。然后，在酸中不溶而沉淀析出，从而进行提取。精制原理---利用芦丁易溶于热水或热甲醇，而较难溶于冷水或冷甲醇，由此进行重结晶而精制。芦丁—槲皮素—实验流程搅拌下加入石灰乳（4gCaO加40ml)加1g硼砂和250ml水槐花米（25g）调节PH8-9直火加热保持微沸30min趁热过滤滤液残渣在60-70℃下，用浓盐酸调PH3-4静置提取芦丁的提取与定性反应黄酮苷的水解滤液沉淀（粗品芦丁，60℃烘干）均分2份重结晶苷水解抽滤按1：60量加入蒸馏水，沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟后，趁热抽滤残渣滤液冷却抽滤精制芦丁（60℃烘干，备用）按1：70量加入2%硫酸，加热40min，放冷静置，抽滤沉淀滤液（苷）干燥槲皮素（备用）糖鉴定芦丁的提取与定性反应苷水解反应+鼠李糖+葡萄糖糖的鉴定水解所得滤液5ml用Ba(OH)2乳调PH值至中性，折叠扇形滤纸过滤白色沉淀1.5gBa(OH)2加10ml水残渣滤液蒸干，放冷加1ml95%乙醇溶解得样品溶液纸色谱芦丁的提取与定性反应糖的纸色谱鉴定标准品：葡萄糖乙醇液、鼠李糖乙醇液展开剂：正丁醇：醋酸：水（4：1：5，上层）显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺显示剂，105℃烘箱加热10min,显棕色斑点samplegluglusamplerharha点样层析芦丁的提取与定性反应芦丁中糖的鉴定1、取一对直径大小相同的培养皿，内置一小层析槽，装上展开剂，密闭。2、取一圆形滤纸，以圆心为中心，用铅笔将其分为六等份，分别标注。将标准品和样品用毛细管在距圆心1cm处分别以弧形点样[1]，挥干溶剂。3、另取一小长条滤纸卷成纸卷，从圆滤纸的圆心处穿进去，插入层析槽的展开剂中上下培养皿密闭。由于毛细作用，展开剂在滤纸上不断水平扩散，当展开至距原点5-6cm处时取出，红外灯下烘干，喷显色剂，再烘至显出斑点为止。观察结果并记录Rf值。注：[1]为确定点样量，应先做纸斑反应。方法为：取一长条滤纸，用毛细管分别点不同量的样品溶液，红外灯下烘干，喷显色剂，再烘至显出斑点为止。确定最佳点样量。定性反应盐酸-镁粉反应将样品溶于1ml乙醇，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，1-2min内，观察颜色变化。Molish反应将样品溶于1ml乙醇，加入等体积10%α-萘酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两界面产生的变化。黄酮母核苷类芦丁的提取与定性反应芦丁的全乙酰化芦丁0.1g加入2ml无水吡啶加入8ml醋酐反应液直火，水浴上回流30min，放冷，搅拌下将反应液倒入70ml水中，一直搅拌到油滴消失，白色沉淀析出为止反应液抽滤，干燥反应物防水芦丁的提取与定性反应聚酰胺薄层色谱样品：分别取少量芦丁、槲皮素、芦丁的十乙酰化物用1ml95%乙醇溶解展开剂：75%乙醇10ml显色剂：氨水，2%AlCl3/EtOH颜色氨水熏AlCl3喷雾Rf值日光UV日光UV日光UV标准品芦丁槲皮素样品芦丁槲皮素芦丁酰化物观察记录芦丁的提取与定性反应定性反应盐酸-镁粉反应将样品溶于1ml乙醇，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，1-2min内，观察颜色变化。Molish反应将样品溶于1ml乙醇，加入等体积10%α-萘酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两界面产生的变化。黄酮母核苷类样品：少量芦丁、槲皮素芦丁的提取与定性反应2%二氯氧锆-柠檬酸反应将样品溶于1ml乙醇，加入2%二氯氧锆-柠檬酸溶液，摇匀，观察颜色变化。将反应液均分成两份，向其中一份滴加柠檬酸甲醇溶液，另一部分加等量醇溶液作对照。比较颜色变化。3-OH，5-OH定性反应OHOOHOOHOHOH5733'4'ZrOClH2O稳定性：3-OH络合物〉5-OH络合物芦丁的提取与定性反应实验注意事项芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但pH值不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉淀析出pH值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解，降低收率（最佳pH值为5）芦丁的提取与定性反应思考题苷类结构的检识大体程序如何？苷类水解的方法？怎样确定芦丁分子中只含有一分子葡萄糖及一分子鼠李糖怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素3-OH上？苷元的结构怎样确定？怎样确定苷键的构型？芦丁的全乙酰化的植被过程中为什么要保证无水条件？芦丁的提取与定性反应