紫外分光光度法操作规程

页数：1/5起草：日期：审核：日期：批准：日期：生效日期：签字：拷贝号：变更记载：制定（变更）原因及目的：修订号批准日期生效日期000102分发部门(档案存档1份)生产部[]份计划供应室[]份质量部QA[]份生产车间[]份仓储管理室[]份质量部QC[]份设备部[]份销售管理室[]份办公室[]份紫外分光光度法操作规程1.适用范围：适用于本厂品种紫外分光光度法检验。2.职责QC检验员：严格按照操作规程进行检验。QC主管：监督检查操作规程执行情况。3.内容紫外分光光度法是通过被测物质在在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的吸收度，对该物质进行定性分析和定量分析的方法。本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查、含量测定。3.1紫外分光光度计的检定3.1波长准确度3.1.1波长准确度的允差范围双光束光栅型紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差为±0.5nm。单光束棱镜型350nm处±0.7nm，500nm处±2.0nm，700处±4.8nm。3.1.2波长准确度检定方法用氧化钬玻璃检定将氧化钬玻璃放入样品光路,参比光路为空气，按测定吸收光谱图方法测定。校正自动记录仪器时，应考虑记录仪的时间常数，测定样品与校正时取同一扫描速度。氧化钬玻璃在279.4,287.5,333.7,360.9,418.7,460.0,484.5,536.2及637.5nm波长页数：2/5处有尖锐的吸收峰,可供波长检定用。氧化钬玻璃因制造的原因，每片氧化钬的吸收峰波长有差异，应使用经计量部门校验过的。3.2吸收度准确度精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约600mg，置1000ml量瓶中，用硫酸液（0.005mol/L）溶解并稀释至1000ml,用配对的1cm石英池,以硫酸液(0.005mol/l)为空白,在235,257,313,350nm分别测定吸收度,然后换算成%11cmE，测得值应符合下表中规定的允差范围（±1%）。国际药典规定的允差变为±1%。波长（nm）吸收强度吸收系数（%11cmE）允差范围235257313350最小最大最小最大124.5144.048.62106.6123.3-125.7142.6-145.448.13-49.11105.5-107.7分辨率、杂散光、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定，按中华人民共和国国家计量检定规程JJG682-90《双光束紫外可见分光光度计检定规程》执行，并应符合有关项下的规定。日常常规测定主要是对以上两项时常检查。3.3样品测定操作方法3.3.1吸收系数测定（性状项下）按各该品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长（参见5.8项）测定其吸收度，并计算吸收系数，应符合规定范围。3.3.2鉴别及检查按各该品种项下的规定，测定供试品溶液在有关波长处的最大及最小吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值呀最大吸收与最小吸收的比值，均应符合规定。3.3.3含量测定3.3.3.1对照品比较法按各该品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的（100±10）%以内，用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度。3.3.3.2吸收系数法按各该品种项下配制供试品溶液，在规定的波长±1nm处测定其吸收度，按各该p品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。采用吸收系数法应对仪器进行校正后测定，如为测定新品种的吸收系数，需按“吸收系数测定法”的规定进行。页数：3/53.3.3.3进行光光度法采用计算分光光度未能的品种，应严格按各该品种项下规定的方法进行，用本法时应注意：有一些吸收度是在供试品或其成分吸收曲线的上升或下降陡坡部处测定，影响精度的因素较多，故应仔细操作，昼使测定供试品和对照品的条件一致，若该品种不用对照品，如维生素A测定法（见中国药典附录），则应在测定前对仪器作仔细的校正和检定。3.4注意事项3.4.1试验中所用的量瓶，移液管均应经检定校正、洗净后使用。3.4.2使用的石英吸收池必须洁净。用于盛装样品、参比及空白溶液的吸收池，当装入同一溶剂时，在规定波长测定吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配对使用，否则必须加以校正。3.4.3取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装盛样品溶液以池体积的4/5为度，使用挥发笥溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦试干净，检视应无残留溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用醮有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同，使用后用溶剂及水冲洗干净，景干防尘保存，吸收池如污染不易洗耳恭听净时可用硫酸发烟硝酸（3：1V/V）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中发长时间浸泡，否则清洁液保的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。3.4.4测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，可用1cm石英吸收池盛溶剂以空气为空白（即参比光路中不放置任何物质）测定其吸收度，应符合下表规定。以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸收度的规定波长范围（nm）220-240241-250251-300300以上吸收度≤0.4≤0.2≤0.1≤0.05每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀的1批溶剂。3.4.5称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取容积一般应不少于5ml。含量测定供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品一向也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴别或检查可取样品1份。页数：4/53.4.6供试品测试溶液的浓度，除各该品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸收度以在0.3-0.7之间为宜,吸收度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸收度线性范围,配制合适的读数浓度。3.4.7选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于中国药典紫外测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但对某些品种如青霉素及钠的吸收度检查则需用1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸收度会偏低。3.4.8测定时除另有规定者外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm石英吸收池，在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的吸收度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的波长±1nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。3.5结果计算3.5.1对照品比较法可根据供试品溶液及对照品溶液的吸收度与对照品溶液的浓度以正比法算出供试品溶液的浓度，再计算含量。A样品：A对照=C样品：C对照C样品=A样品×C对照/A对照式中A为吸收度值C为测试液浓度（以mg/ml计）。3.5.2吸收系数法中国药典规定的吸收系数，系指%11cmE即在指定波长时，逃跑和长度为1cm，试样浓度换算为1%（g/ml）时的吸收度值，故应先求出被测样品的%11cmE值，再与规定的%11cmE值比较，可计算出供试样品的含量。%11cmE（样品）=CLA式中A为供试品溶液测得的吸收度值；C为供试品溶液的百分浓度，即1000ml中所含溶质的克数（g/ml）；L为吸收池的光路长度（cm）。页数：5/5供试样品的含量%=100%11%11）cm（）cm（EE标准样品式中%11）cm（E样品为根据前式计算出的供试品的百分吸收系数%11）cm（E标准为药典或药品标准中规定的百分吸收系数。3.6吸收系数测定法本法主要用于新品种的吸收系数测定。3.6.1测定方法取精制品精密称取一定量，使样品溶液配成吸收度读数在0.6-0.8之间，置1cm吸收池中，在规定波长处按5.8项的规定测出读数,然后再用同批溶剂将溶液稀释1倍,使吸收度在0.3-0.4之间,再按上述方法测定。样品应同时测定2份，同一台仪器测定的2份间相对误差应不超过±0.5%，否则应重新测定。测定时，先按仪器正常灵敏度测试，然后再减小狭缝测定，直到减小狭缝吸光值不增加为止，取吸收度不改变的数据。再用4台不同型号的仪器复测。吸收系数可根据比尔-朗伯定律求算，以下例说明：已知某化合物的分子量为287，用乙醇配成浓度为0.0030%的溶液，在波长297nm处，用1cm石英池，测得吸收度为0.6139，求%11cmE值及克分子吸收系数ε值。%12971nmcmE=A/CL=10030.06139.0=205nm297=A/CL=16139.02870030.01001000=58733.7测定注意事项3.7.1样品应为精制品，水分应另取样测定，扣除干燥失重。3.7.2所用容量仪器及分析天平应经过检定，如有相差应加上校正值。3.7.3测定所用溶剂，其吸收度应符合规定。吸收池应于临用时配对。3.7.4称取样品时，其称量准确度应按中国药典规定要求。3.7.5所用的分光光度计应经过严格检定，特别是波长准确度和吸收度要进行校正。要注明测定时的温度。4.编制依据《中国药品检验标准操作规范》2005年版