维生素C及其制剂的分析

药物分析设计性实验维生素C及其制剂的分析药学（临床药学方向）2005级（1）班第一组：黄鹏浩（0703503151）陈燕泓（0703503152）指导教师：李康高晓霞2010年4月摘要：维生素C，在化学结构上和糖类十分相似，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起到重要的作用。但过量摄取会产生多尿、下痢、皮肤发疹等副作用；滥用维生素C会削弱人体免疫力。因此，在生产维生素C药物过程中要做好其质量控制研究和生产后的含量测定。《中国药典》收载有维生素C原料及其片剂、泡腾片、颗粒剂和注射剂。维生素C的含量测定方法有碘量法，2，6—二氯靛酚滴定法，高效液相色谱法，紫外分光光度法，2，4-二硝基苯肼法，原子吸收法等。关键词：维生素C；制剂；质量控制；含量测定维生素C又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素，无色晶体。在化学结构上和糖类十分相似，酸性，具有较强的还原性，加热或在溶液中易氧化分解，在碱性条件下更易被氧化。本品在水中极易溶，在乙醇中略溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。熔点为91～92。C，熔融时同分解。比旋度为+20.5。至+21.5。。一个维生素分子由六个碳原子、八个氢原子和六个氧原子构成。维生素C在体内参与多种反应，如参与氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。从组织水平看，维生素C的主要作用是与细胞间质的合成有关。包括胶原，牙和骨的基质，以及毛细血管内皮细胞间的接合物。用于增强机体抵抗力，预防和治疗各种急、慢性疾病、坏血病或其他疾病，用于病后恢复期‘创伤愈合期及过敏性疾病的辅助治疗。因此，当维生素C缺乏所引起的坏血病时，伴有胶原合成缺陷，表现为创伤难以愈合，牙齿形成障碍和毛细血管破损引起大量瘀血点，瘀血点融合形成瘀斑。按《中国药典》记载有维生素C原料及其片剂、泡腾片、颗粒剂和注射剂[1]。维生素C的含量测定大多是基于其具有强的还原性，可被不同氧化剂定量氧化。因容量分析法简便快速、结果准确，被各国药典所采用，如碘量法，2，6-二氯靛酚法等。又相继发展了紫外分光光度法和高效液相色谱法等。1维生素C原料1.1据《中国药典》2005版记载1.1.1维生素C性状、熔点及比旋度维生素C原料为白色晶体或结晶性粉末；无臭，味酸；久置色渐变黄；水溶液显酸性反应。本品在水中极易溶，在乙醇中略溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。熔点为1901～92。C，熔融时同分解。比旋度为+20.5。至+21.5。。1.1.2维生素C鉴别方法一：去本品0.2g，加水10ml溶解后，分成二等份，在一份加硝酸银试液0.5ml即生成银的黑色沉淀。在另一份中，加二氯靛酚钠1～2滴，试液的颜色即消失。方法二：本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集450图一致）。1.1.3检查溶液的澄清度与颜色取本品3.0g，加水15ml，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法（附录IVA），在420nm的波长处测定吸光度，不得过0.03。1.1.4含量测定取本品约0.02g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显示蓝色并在30秒中内不褪。没1ml碘滴定，至溶液（0.05mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。1.1.4制剂维生素C制剂包括：维生素C片，维生素C泡腾片，维生素C泡腾颗粒，维生素C注射液和维生素C颗粒[2]。2维生素C的含量测定方法2.1碘量法2.1.1原理维生素C在醋酸酸性条件下，可被碘定量氧化。根据消耗碘滴定液的体积，即可计算维生素C的含量。2.1.2方法取本品20片（具体制剂具体分析），精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素C0.2g），置100ml量瓶中，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml的混合液适量，振摇使维生素C溶解并稀释至刻度，摇匀，经干燥滤纸迅速过滤，精密量取续滤液50ml，加淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。该方法适用于维生素C原料，片剂，泡腾片，颗粒剂和注射液的含量测定。《中国药典》2005版对维生素C的含量测定，采取该法。2.22，6—二氯靛酚滴定法2，6—二氯靛酚为一染料，其氧化型在酸性溶液中显红色，碱性溶液中为蓝色。当与维生素C反应后，即转变为无色的酚亚胺（还原型）。因此，维生素C在酸性溶液中，可用2，6—二氯靛酚标准滴定至溶液显玫瑰红色为终点，无需另加指示剂。维生素C具有很强的还原性。它可分为还原型和脱氢型，根据它具有还原性测定其含量。还原型抗坏血酸能还原料2．6—二氯酚靛酚，本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中2．6—二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。因此，当此染料滴定含有VC的酸性溶液时,VC尚未全部被氧化前，则滴下的染好临用前配制；④0．1％2．6—二氯酚靛酚溶液：称取250mg2．6二氯酚靛酚溶于150ml含有52mgNaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至250ml，滤去不溶物，贮于棕色瓶中冷藏(4摄氏度)约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。本法多用于含维生素C的制剂和食品的分析的含量测定。2.3薄层扫描法扫描条件确定在制备的染料试纸上定量点维生素C对照品进行扫描，维生素C在290nm处有最大吸收，420nm处无吸收，故选择λ1=290nm，λ2=420nm．双渡长反射式锯齿扫描。测定用5l定量毛细管，分别吸取对照品溶液各5ul，点于试纸上。点样后晾干，并将试纸固定在20cm×20cm玻璃板上，放入Cs一93O薄层扫描仪。测定△A的积分值y(峰面积)为纵坐标，样量为横坐标x，得一直线方程。样品的含量测定取维生素C片1O片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放zkl00m[容量瓶中，加^缓冲液至刻度，振摇，使维生素C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml移至10m[容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用5l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上，然后扫描测定峰面积，由工作曲线法计算维生素c片中的维生素C含量[3]。2.4用线性电位滴定法2.4.1方法原理抗坏血酸pKa=4．17，pKa=11．56，一般表现为一元酸m．线性滴定法测定一元酸依据的Ingman公式如下：Ve—V=VKHHA［H］一[OH])(1+KHHA{H})(1)式中为达到化学计量点时耗用的标准碱液体积；V、Cb为加人的标准碱液体积与浓度；V。为待测酸液初始体积；{H}、［H］、[OH]分别为氢离子活度、氢离子浓度、氢氧根离子浓度，本文［H］与[OH]用氢离子活度{H}与氢氧根离子活度{OH}代替。用实验值V、pH代人(1)式求Ve—V，将Ve—V对进行线性回归，由回归方程的截距m与斜率k可得Ve=一m／k。式(1)中KHHA为一元弱酸的条件稳定常数，要求实测。2.4.2方法抗坏血酸的分析：精确称取0．1g抗坏血酸，分别加入一定体积的离子强度调节缓冲液，稀释至50．00mI，使离子强度分别为0.2、0.3、0.4，分别用No．1～N0．3标准碱液等量(0．50m1)分步滴定，记录V与pH、上机输入V与pH，由程序判断化学计量点所在范围，由化学计量点前的数据计算KHHA．将实验值V、pH与计算值代入(1)式计算V—V，用Ve—V对v进行线性回归，回归直线方程Ve—V=0处对应的V即为Ve，由Ve计算出抗坏血酸的回收率。样品分析：首先取维生素C片20片精确称重后计算每片平均重量；然后将其研细混匀后精确称取粉样0.1g，溶解后加入定量离子强度调节缓冲液稀释至50．00m1，使离子强度为0．3，用No．2标准碱液等量分步滴定，记录与pH-由计算机程序计算后求得，进而求得每片维生素C片抗坏血酸的平均含量，用此含量除以标示量得相当标示量[4]。滴定前必须用缓冲溶液仔细校正酸度计，称量好的样品应立即进行测定[5]。线性电位滴定法测定维生素C片抗坏血酸含量快速简便，仅使用常用药品，耗用药品量少，测量结果可满足半微量分析要求。2.5高效液相色谱法本法选择色谱柱为ODS（4.6nm*20cm，5um）；流动相为5mmol/LnaH2PO4溶液（磷酸调pH至2.5）；流速为1.0mol/min；检测波长245nml；柱温20摄氏度。测定时进样20uL,采用外标法，以峰高计算含量。理论板数按维生素C计应大于2000，各峰分离度应大于2。取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生cl00mg)，置100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过再精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度摇匀，取20斗l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素c对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中C6H8O6。的含量[6]。2.62，4-二硝基苯肼法可测总抗坏血酸，总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与2，4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算样品中总VC。原理：用酸处理过的活性碳把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，在继续氧化为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与2，4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎，其成色的强度与二酮古乐糖酸浓度呈正比，可以比色定量。2.7原子吸收法维生素C的结构中含有烯二醇基团而具有还原性，在酸性介质中可将Cu2+定量地还原为Cu+，并与SCN-反应生成CuSCN沉淀，在高速离心机下有效地分离出沉淀，小心洗涤后再经浓硝酸溶解，用原子吸收法测定含铜量，即可推知样品中维生素c的含量[7]。2.8旋光法根据维生素C具有旋光性的特点：精密称取105℃干燥恒重的维生素C对照品04931g，0．7995g，1．0184g，1．2503g，1．5551g，2．0261g，分别置50ml量瓶中，用5％碳酸氢钠溶液稀释至刻度，以5％碳酸氢钠溶液为空白，依法“测定它们的旋光度，以旋光度对浓度作线性回归。样品测定取12．5％维生素c注射液适量，用5％碳酸氢钠溶液将样品稀释成浓度为25mg／ml，按上述方法进行测定，每个批号样品测定3次，代入直线回归方程，计算出含量。本法具有操作简便、快速等优点，适用于药厂中间体的含量控制与快速分析[8]。2.9紫外分光光度法在PH5~10范围内维生素C在波长267nm处有最大吸收峰，可在这个条件下测定供试液的吸收度，用对照品比较法求出样品含量。此法的专属性较好，多种还原性物质以及多种药物辅料存在时，对维生素c的测定均无干扰，但此法需要对照品，对仪器设备的要求高。2.9.1方法（以维生素含片为例）溶液制备：对照品溶液取对照品25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加0．005mol／L硫酸液适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液取本品20片精密称定，研细，精密称取适量(约相当于维生素C0．05g)，置100ml量瓶中，加0．005mol／L硫酸液适量，振摇使维生素C溶解，加0．005mol／L硫酸液至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液；精密量取续滤液5ml置250ml量瓶中，用0．005mol／L硫酸液稀释至刻度，摇匀，即得。测定波长的选择取供试品溶液置1cm吸收池内，在200～300nm波长范围内进行扫描。2.10快速比色法根据资料显示维生素C与Fe（Ⅲ）一邻菲罗啉复合物反应生成Fe(Ⅱ)一邻菲罗啉复合物，后者在510nm波长处有最大吸收。测定条件的考察：1．维生素C着色复合物吸收光谱：称取维生素c适量配制成约25g/ml的溶液．精密吸取2ml．以下操作同样品测定方法项下。用UV一240型分光光度计自动扫描(558nm~400mm)．在510nm处有最大吸收．与文献报道一致(见附图)。2．浓度与吸收度的关系：精密称取维生紊c适量，用水溶解，制成约2g／ml的溶液．精密吸取1．0、2．0、3．0、4．0、5．0、6．0ml，分别置于25ml容量瓶中。求出浓度和吸收度的关系，求出回归方程。样