第六章第二节食品中致病球菌的检验2

食品中溶血性链球菌的检验主要内容溶血性链球菌概述溶血性链球菌生物学特性溶血性链球菌检验一、概述（一）分布：在自然界分布较广，可存在于水、空气、尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中。（二）分类1、按溶血能力分类：（1）甲型（α）溶血性链球菌（2）乙型（β）溶血性链球菌（3）丙型（γ）链球菌一、概述2、按血清学分类主要是根据链球菌细胞壁抗原进行分类，这种方法可靠，但工作复杂。根据族特异性抗原的不同，将乙型（β）溶血性链球菌分成ABCDEFGHKLMNOPQRST，共18族在一个族内因表面抗原（即型特异性抗原）不同，又分成若干型。如A族分成60多个型，B族分为4个血清型，C族分成13个血清型。用阿拉伯数字表示。与人类疾病有关的大多属于乙型溶血链球菌，其血清型90%属于A族链球菌。（一）形态与染色：1、呈球形或卵圆形，直径0.5um-1um链状排列（长短不一）2、革兰氏染色阳性，衰老培养物常成阴性3、无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜二、生物学特性二、生物学特性（二）培养特性1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧2、对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加血清、血液、腹水等）。大多数菌株需苏氨酸、核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。3、最适温度37℃PH7.4~7.64、在液体培养基中，溶血菌株,呈絮状或颗粒状沉淀生长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链菌。（二）培养特性5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、圆形突起的细小菌落，直径0.5—0.75mm，针尖大小。不同菌型其菌落周围的溶血现象不同。甲型在菌落周围出现1-2mm的绿色溶血环，放冰箱一夜呈透明溶血环，且溶血环扩大；乙型在菌落周围有2-3mm的透明溶血环；丙型菌落周围不具溶血环。二、生物学特性甲链乙链丙链二、生物学特性(三)生化特性1、均分糖葡萄糖产酸2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶。4、乙型溶血链球菌山梨醇阴性，不被胆汁溶解、不分解菊糖，奥普托辛试验阴性，可与肺炎双球菌区别。4、触酶阴性可与葡萄球菌区别。5、A族菌对杆菌肽敏感，可被其抑制。二、生物学特性（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶1、溶血素：有溶解红细胞，杀死白细胞、血小板及毒害心脏的作用，有O和S两种。链球菌溶血素O为含有-SH基的蛋白质，能破坏白细胞和血小板，动物试验又证实对心脏有急性毒害作用，使心脏骤停，抗原性强，感染后2～3周，85%以上病上产生抗“O”抗体。S为小分子多肽，相对分子质量较小，故无抗原性。S对氧稳定，对热和酸敏感。血平板所见透明溶血是由“S”所引起，能破坏白细胞和血小板，给动物静注可迅速致死。注射小鼠腹腔，引起肾小管坏死。二、生物学特性（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶2、致热外毒素：曾称红疹毒素(Erythrotoxin)或猩红热毒素(Scarletfevertoxin)，是人类猩红热的主要致病物质，为外毒素。主要有A族链球菌产生。小剂量可使局部产生红疹，大剂量引起全身性红疹，并伴有发热、头痛、恶心、呕吐、周身不适等。3、透明质酸酶：又称扩散因子，可溶解组织间质的透明质酸，故能增加细菌的侵袭力。4、链激酶：又称溶纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织中的扩散作用。5、杀白细胞素：在肉汤培养基中培养可产生。可使白细胞失去动力，变为球形，最后膨胀破裂。二、生物学特性（五）抵抗力抵抗力一般不强，60℃30min即被杀死，对常用消毒剂敏感。乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。青霉素是溶血链球菌感染的首选药物。(六)流行病学与致病性溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。二、生物学特性一般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染；2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。化脓性链球菌)三、微生物检验（一）检验程序液体检样固体检样→样品处理→增菌培养→分离培养→分纯培养→生化鉴定→报告（二）检验操作要点1、采样：食品：按常规2、增菌培养：葡萄糖肉浸液肉汤：一般情况36±1℃24h匹克氏肉汤：在污染严重时用（二）检验操作要点3、分离培养：血平板，37℃24h,菌落:灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血环4、分纯培养：血平板37℃24h5、镜检：革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生化鉴定。三、微生物检验（二）检验操作要点6、生化鉴定：（1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌18-24h36℃肉浸液肉汤培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于36℃水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。三、微生物检验三、微生物检验（二）检验操作要点6、生化鉴定：（2）杆菌肽敏感试验将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划线处贴附杆菌肽纸片，37℃18h，出现抑菌带为阳性，据此可推测为乙型溶血性链球菌。（二）检验操作要点7、报告：根据培养后的形态，菌落特征及生化试验可报告：有乙型溶血性链球菌生长。三、微生物检验思考题1、链球菌的溶血现象有哪几个类型，各类型的溶血特征如何？2、溶血性链球菌能产生什么毒素和酶？3、溶血性链球菌在血平板中生长有何特征？