益生菌和果寡糖与日粮组合效应对后备母猪生长性能免疫功能和肠道微生物的影响-中国畜牧

益生菌、果寡糖及组合效应对后备母猪生长性能、免疫功能和肠道微生物的影响王博1，田河山1，张福亮2，崔燕飞3，朱祥雨3（1.中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，北京100081；2.河南省卫辉市畜牧局，河南453100；3.河南雏鹰农牧股份有限公司，河南453100）摘要：本试验旨在研究益生菌、果寡糖及其组合效应对后备母猪的生长性能、免疫功能和肠道微生物的影响。选用相同日龄的长白×大白后备母猪224头，随机分为4个组（对照组、益生菌组、果寡糖组、益生菌和果寡糖复合组），每组4个重复，每个重复14头。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中分别添加0.2%益生菌、0.1%果寡糖、0.1%益生菌和0.05%果寡糖，试验期30d。结果表明：1）各试验组的日增重均显著高于对照组（P＜0.05），料重比低于对照组，饲粮能量和蛋白质消化率高于对照组。2）益生菌组、益生菌和果寡糖复合组血清中三碘甲状腺原氨酸（T3）、四碘甲状腺原氨酸（T4）、生长激素（GH）的水平显著高于对照组（P＜0.05）。3）益生菌组、益生菌和果寡糖复合组的血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）的水平显著高于对照组（P＜0.05）。4）各试验组的大肠杆菌数量均显著低于对照组（P＜0.05）；各试验组相对于对照组双歧杆菌数量均有所提高（P＜0.05），但是乳酸杆菌的数量在3个试验组间没有显著差异。由此可见：益生菌和果寡糖都可以不同程度的提高后备母猪的生长性能、免疫机能，改善后备母猪的肠道微生物菌群，且益生菌和果寡糖的组合效应的作用效果更为显著。关键词：后备母猪；益生菌；果寡糖；生长性能；免疫机能；肠道微生物近几年来，动物福利问题在畜禽养殖中越来越引起人们的重视，但是抗生素作为饲料添加剂的使用违背了这一理念，其巨大的经济利益后面隐藏着种种弊端。尽管使用抗生素对畜禽的生长有促进作用，美国允许使用，但欧洲一些国家对抗生素的使用已经实行严格的控制。研制开发绿色环保的饲料添加剂是亟需解决的问题[1]。益生菌、果寡糖就是其中的两种，二者以其组成成分来源于天然、无污染、无毒副作用的特点，成为抗生素的首选替代品，这一领域也成为新型饲料添加剂的研究热点。David等[2]对仔猪进行研究，发现饲粮中添加益生收稿日期：资助项目：公益性行业（农业）科研专项经费项目（201003011）作者简介：王博（1989-），女，辽宁沈阳人，硕士,主要从事动物营养与饲料科学研究。Email：[e-mail]手机：[phone]*通讯作者：田河山,Email：[e-mail]菌可以提高仔猪的日增重（ADG）；范国歌等[3]研究表明，寡糖组的粗蛋白、能量表观消化率皆显著地高于对照组（P＜0.05）；盛东峰等[4]人表明，果寡糖能使血液中三碘甲状腺原氨酸（T3）、四碘甲状腺原氨酸（T4）等与生长有关的激素水平升高，从而提高动物的生产性能。目前，许多试验表明，益生菌和果寡糖单独作用对断奶仔猪和生长育肥猪的生长性能和免疫机能均有促进作用，但是后备母猪作为育种繁殖的重要阶段却鲜有研究，且未见有益生菌和果寡糖组合效应的研究报道。本试验主要研究益生菌、果寡糖分别添加及组合添加对后备母猪生长性能、免疫机能和肠道微生物数量的影响，用以指导畜牧生产。1材料与方法1.1试验设计选择日龄、体重相近且健康的长白×大白二元杂交后备母猪224头，随机分为4组（对照组、益生菌组、果寡糖组、益生菌和果寡糖复合组），每组4个重复，每个重复14头。对照组饲喂基础饲粮，益生菌组、果寡糖组、益生菌和果寡糖复合组在基础饲粮的基础上分别添加0.2%益生菌制剂、0.1%果寡糖制剂、0.1%益生菌和0.05%果寡糖混合制剂（使用剂量参照产品说明中注明的最佳添加剂量，益生菌和果寡糖复合组使用果寡糖组和益生菌组的各二分之一复合添加）。参照NRC(1998)猪营养需要量标准配制基础饲粮，饲粮的组成及营养水平见表1。试验于2014年4月至5月在位于河南省卫辉市的河南雏鹰农牧股份有限公司的猪场进行。对照组和试验组在相同条件下饲养。每天06:00、11:00和17:00定时饲喂三次，每次饲喂前将食槽内余料清理干净，自由饮水，其他按饲养管理手册进行饲养管理。每天记录猪只健康状况。试验期30d。表1基础饲粮配方及营养水平（风干基础）%项目含量玉米33.50消化能(MJ/kg)13.39小麦45.00粗蛋白质15.84豆粕15.50粗脂肪3.77豆油2.00粗纤维2.484%预混料4.00钙0.75粗灰分4.64食盐0.50总磷0.46合计100.00赖氨酸0.80注:每千克基础日粮中添加维生素A6000IU,维生素D32000IU,维生素E30IU,维生素K30mg,维生素B12mg,维生素B24mg,维生素B61mg,维生素B120.02mg，泛酸20mg,叶酸1mg,烟酸25mg,生物素0.2mg,铁70mg,锌70mg,锰4mg，铜10mg,碘0.14mg，硒0.2mg。1.2试验材料益生菌制剂由山东宝来利来生物工程股份有限公司提供，主要成分为枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌等，活菌总数≥5.0×108cfu/g。果寡糖制剂由上海易实格信饲料科技有限公司提供，含量≥76%。1.3样品采集试验第30天早晨，每个重复随机选择5头健康母猪进行前腔静脉采血，每头采血5mL，3000r/min离心10min制备血清，收集血清于EP管中，立即放入-20℃冰箱保存。样品用于免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）和T3、T4、生长激素（GH）水平的测定。试验第30天早晨，每个重复随机选择5头健康母猪进行粪便采集，每头采集新鲜无污染粪样粪样100g，立即放入-20℃冰箱保存以备肠道微生物培养计数。从试验21d至27d，每个重复随机选择5头健康母猪进行粪便采集，每头采集粪样100g。将粪样混匀，称重，取总粪重的1％。全部粪样品加入10％硫酸10mL。混合均匀，65℃烘干，回潮，风干以备养分消化率测定。从试验21d至27d，每组沿栏舍中间布5点依次取样，采样于每天同一时间和同一地点进行，采样点距栏舍地面30cm，采气量1L，用于氨气浓度测定。1.4检测指标及方法1.4.1日增重及料重比试验开始时对每只母猪进行称重，记录耳号，试验结束时再次对对应耳号猪只称重，计算每组的平均日增重。料重比计算公式如下：料重比（F/G）=日采食量（ADFI）/平均日增重（ADG）。1.4.2血清激素T3、T4、GH测定血清激素采用放射免疫分析法测定，所用试剂盒购自北京华英生物技术研究所，检测仪器为日本日立r-911全自动放免计数仪。1.4.3血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM测定血清免疫球蛋白采用免疫比色法测定，所用试剂盒购自北京华英生物技术研究所，检测仪器为日本日立7160全自动生化仪。1.4.4肠道微生物计数粪样稀释：超净台内取0.5g粪样于装有4.5mL已灭菌的生理盐水的试管中，用磁力振荡器震荡3～5min至混合均匀，得到10-1倍稀释液，再取0.5mL待测菌液加入装有4.5mL已灭菌生理盐水的试管中，振荡混匀，得到10-2倍稀释液，重复以上操作将菌液分别稀释至10-3，10-4，10-5，10-6，10-7倍稀释菌液。接种及培养：大肠杆菌（E.coli）计数时取粪样稀释液中10-2～10-4倍稀释液0.1mL接种于麦康凯培养基平皿上，每等级稀释液两个重复，37℃有氧培养24h后进行菌落计数；乳酸菌（Lactobacillus）计数时取粪样稀释液中10-4～10-6倍稀释液0.1mL接种于MRS培养基平皿上，每个稀释浓度做两个重复，37℃厌氧培养24h后进行菌落计数；双歧杆菌（Bifidobacterium）计数时取粪样稀释液中10-4～10-6倍稀释液0.1mL接种于TPY培养基平皿上，每个稀释浓度做两个重复，37℃厌氧培养24h后进行菌落计数。1.4.5养分消化率饲粮及粪便中的酸不溶灰分（AIA）含量根据VanKeulen和YongMcCanthy等的方法测定4mol／L-HCI不溶灰分。AIA法养分消化率计算公式：某养分消化率(％)=100－l00×(A1/A2×F2/F1)。式中，A1为饲料中AIA的含量(％)；A2为粪中AIA的含量(％)；F1为饲料营养物质含量(％)；F2为粪中营养物质含量(％)。1.4.6氨气含量测定氨气根据GB/T14669-93纳氏试剂比色法进行浓度分析，分析仪器为Spectrumlab22PC分光光度计。每次通过吸收液吸收采集气体500mL，在420nm的波长下进行比色，并通过现场配置的标准溶液曲线计算出氨气的实际浓度。1.5数据统计分析数据先用Excel进行初步处理，再用SPSS22.0中的单因子方差分析（one-wayANOVA,LSD），以P＜0.05作为差异显著性判断标准，试验结果用“平均值±标准差”表示。2结果2.1益生菌和果寡糖对后备母猪生长性能的影响益生菌和果寡糖对后备母猪生长性能的影响见表2。益生菌组、果寡糖组、益生菌和果寡糖复合组分别与对照组相比较平均日增重都有所提高，差异显著（P＜0.05），其中益生菌和果寡糖复合组提高最为显著，比对照组提高了21.2%，益生菌组和果寡糖组分别比对照组提高了17.0%和8.51%。但各试验组之间未见显著差异(P＞0.05)。料重比值，益生菌和果寡糖复合组显著低于其它试验组（P＜0.05）。表2益生菌和果寡糖对后备母猪生长性能的影响kg组别始重末重日增重日采食量料重比1对照组27.57±4.7042.60±4.960.47±0.03b1.25±0.32b2.65±0.13c2益生菌组27.03±3.1144.77±3.750.55±0.03a1.36±0.41a2.47±0.20b3果寡糖组28.87±4.0946.70±4.390.51±0.02a1.35±0.52a2.64±0.16c4益生菌和果寡糖复合组29.03±3.2947.30±2.830.57±0.02a1.36±0.36a2.39±0.23a同列数据后所标字母相异表示差异显著（P＜0.05），所标字母有一相同表示差异不显著（P＞0.05）。Differentlettersinthesamecolumnmeanssignificantdifferencebetweenthetreatments（P＜0.05）,thesameletterinthesamerowmeansnotsignificantdifferencebetweenthetreatments（P＞0.05）.2.2益生菌和果寡糖对后备母猪血清中激素的影响益生菌和果寡糖对后备母猪血清中激素的影响见表3。益生菌组、益生菌和果寡糖复合组血清中的T3、T4、GH的水平均显著高于对照组（P＜0.05），T3水平分别提高了29.4%和37.3%；T4水平分别提高了47.6%和52.6%；GH水平分别提高了16.3%和19.5%。添加果寡糖的试验组T3有显著提高了13.7%（P＜0.05），但对T4和GH影响不显著(P＞0.05)。表3益生菌和果寡糖对血清中激素水平的影响ng/mL组别T3T4GH1对照组0.51±0.04c14.10±1.88b4.11±0.43b2益生菌组0.66±0.07a20.81±1.82a4.78±0.39ac3果寡糖组0.58±0.05b15.87±1.95b4.37±0.49bc4益生菌和果寡糖复合组0.70±0.07a21.51±1.35a4.91±0.26a同列数据后所标字母相异表示差异显著（P＜0.05），所标字母有一相同表示差异不显著（P＞0.05）。Differentlettersinthesamecolomnmeanssignificantdifferencebetweenthetreatments（P＜0.05）,thesameletterinthesamerowmeansnotsignificantdiffere