盐酸精氨酸验证

产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第1页共13页产品中盐酸精氨酸含量测定方法验证方案QC-GTP7051(00)-2012执行标准：注册标准国家GMP规范实验项目：产品中盐酸精氨酸含量测定方法方法名称：化学法方法版本号：12.01确认方式：再确认确认方案制订人：日期：确认方案审核人：日期：确认方案批准人：日期：产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第2页共13页目录1.验证原则2.验证目的3.验证实验项目的概述4.验证的参数和接受标准5.验证内容5.1材料5.2分析方法5.3供试品溶液的制备5.4分析方法的验证6.验证结果7.验证结论8.偏离清单9．再验证和风险评估10.评价与建议1.验证原则产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第3页共13页本验证适用于采用新的检验方法、检验方法需变更的、采用药典及法定标准未收载的检验方法、法规规定的需验证的检验方法，该检验方法为药典未收载方法，所以进行方法再验证。2.验证目的通过方法验证来证明该方法适合相应的检测要求。3.验证实验项目的概述本法系根据盐酸精氨酸在硼砂缓冲液作用下与四氯苯醌发生荷移反应，在350nm波长下测定其吸光度，从而计算出样品中盐酸精氨酸含量。4.验证的参数和接受标准4.4.1准确度：平均回收率：98.0%-102.0%RSD（n=9）≤2.0%;线性：R≥0.9904.4.2精密度：重复性RSD（n=6）≤2.0%4.4.3专属性：人纤维蛋白原中加入甘氨酸，测定结果应无干扰4.4.4范围：盐酸精氨酸含量在（3.0%-6.0%）范围内，平均回收率：98.0%-102.0%，RSD（n=12）≤2.0%4.4.5耐用性：当实验反应温度发生变化，结果无明显变化。温度变化前后结果对比RSD（n=6）≤2.0%5.验证内容5.1材料5.1.1供试品品名：人纤维蛋白原（未添加盐酸精氨酸）批号：来源：本公司生产贮藏条件：2-8℃产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第4页共13页5.1.2标准品名称：人纤维蛋白原（未添加盐酸精氨酸）来源：本公司批号：20070331有效期：/含量：2.5%、3.5%、4.5%、5.5%、6.5%贮藏条件：2-8℃5.2分析方法5.2.1试剂名称生产厂家批号盐酸精氨酸四氯苯醌硼砂5.2.2试剂配制5.2.2.110mg/ml盐酸精氨酸标准贮备液的制备精确称取经105℃干燥至恒重的盐酸精氨酸1.0g，加纯化水溶解，并准确稀释至100ml。5.2.2.20.1%四氯苯醌醇溶液精密称取四氯苯醌0.1g，加无水乙醇溶解，并准确稀释至100ml。5.2.2.3硼砂缓冲液(pH9.18)5.2.3仪器仪器名称生产厂家型号编号是否确认或校验722分光光度计5.2.4实验器皿容量瓶、15ml具盖玻璃离心管若干、刻度吸管、移液管、5ml刻度吸管、移液产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第5页共13页器5.供试品溶液的制备5.3.1准确度测定样品的制备5.3.1.1标准管的制备（1）.S1取盐酸精氨酸标准液1.0ml,用水准确稀释至50ml，即为200μg/m（2）.S2取S16ml加水2ml，即为150μg/ml（3）.S3取S15ml加水5ml，即为100μg/ml（2）.S4取S35m加水5ml，即为50μg/m5.3.1.2待检样品管的制备1.称取盐酸精氨酸1.75g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成3.5%盐酸精氨酸溶液，即得样品1；2.称取盐酸精氨酸2.25g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成4.5%盐酸精氨酸溶液，即得样品2；3.称取盐酸精氨酸2.75g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成5.5%盐酸精氨酸溶液，即得样品3；准确度测定用样品1、2和3分别制备3份。5.3.2精密度测定样品的制备1.称取盐酸精氨酸1.75g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成3.5%盐酸精氨酸溶液；2.称取盐酸精氨酸2.25g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成4.5%盐酸精氨酸溶液；3.称取盐酸精氨酸2.75g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成含5.5%盐酸精氨酸溶液；产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第6页共13页5.3.3专属性测定样品的制备样品1制备称取盐酸精氨酸1.75g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成3.5%盐酸精氨酸溶液①；样品2制备称取甘氨酸0.3g，取盐酸精氨酸溶液①稀释至10ml，配成含3%甘氨酸溶液；专属性测定用样品1和2分别制备3份。5.3.4范围：验证该方法适用的高低限浓度的区间。样品溶液的制备1.称取盐酸精氨酸1.5g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成3.0%盐酸精氨酸溶液；2.称取盐酸精氨酸2.0g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成4.0%盐酸精氨酸溶液；3.称取盐酸精氨酸2.5g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成5.0%盐酸精氨酸溶液；4.称取盐酸精氨酸3.0g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成6%盐酸精氨酸溶液；5.3.4耐用性：当实验反应温度发生变化，结果无明显变化。温度变化前后结果对比RSD（n=6）≤2.0%称取盐酸精氨酸2.25g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成4.5%盐酸精氨酸溶液；反应水浴温度分别为40℃、50℃，分别制备3份。产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第7页共13页5.4分析方法的确认5.4.1准确度测定⑴.于50ml容量瓶中加入硼砂缓冲液5ml，0.1%四氯苯醌溶液3ml，再加入各标准稀释液各2ml，混匀，置50℃水浴2小时后，定容，于350nm波长测吸光度，同时用2ml水代替样品做空白对照。S1S2S3S4吸光度回归方程A：B：r：⑵.①分别取溶解后的样品1.0ml于100ml容量瓶中，加水稀释刻度并混匀，再取稀释后样品2ml加水5ml，混匀。②于50ml容量瓶中加入硼砂缓冲液5ml，0.1%四氯苯醌溶液3ml，再加入各标准稀释液各2ml，混匀，置50℃水浴2小时后，定容，于350nm波长测吸光度，同时用2ml水代替样品做空白对照。。③将各样品测定吸光度代入回归方程计算，求出相应的盐酸精氨酸含量3.5%供试品3.5%供试品3.5%供试品4.5%供试品4.5%供试品4.5%供试品5.5%供试品5.5%供试品5.5%供试品吸光度测定浓度回收率计算：产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第8页共13页将9份样品的测定值与中检所白蛋白质控样的标示值分别计算回收率，再计算回收率的平均值和相对标准偏差。5.4.2精密度测定①分别取溶解后的样品1.0ml于100ml容量瓶中，加水稀释刻度并混匀，再取稀释后样品2ml加水5ml，混匀。②于50ml容量瓶中加入硼砂缓冲液5ml，0.1%四氯苯醌溶液3ml，再加入各标准稀释液各2ml，混匀，置50℃水浴2小时后，定容，于350nm波长测吸光度，同时用2ml水代替样品做空白对照。。将上述九次中取六次测定回收率结果计算其相对标准偏差RSD3.5%供试品3.5%供试品4.5%供试品4.5%供试品5.5%供试品5.5%供试品回收率RSD评价：5.4.3专属性①分别取溶解后的样品1.0ml于100ml容量瓶中，加水稀释刻度并混匀，再取稀释后样品2ml加水5ml，混匀。②于50ml容量瓶中加入硼砂缓冲液5ml，0.1%四氯苯醌溶液3ml，再加入各标准稀释液各2ml，混匀，置50℃水浴2小时后，定容，于350nm波长测吸光度，产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第9页共13页同时用2ml水代替样品做空白对照。。将样品1的3份测定结果均值与样品2的3份测定结果均值进行比较，计算其相对标准偏差。未加甘氨酸供试品未加甘氨酸供试品未加甘氨酸供试品加甘氨酸供试品加甘氨酸供试品加甘氨酸供试品含量值RSD5.4.4范围：验证该方法c适用的高低限浓度的区间。1分别取溶解后的样品1.0ml于100ml容量瓶中，加水稀释刻度并混匀，再取稀释后样品2ml加水5ml，混匀。２于50ml容量瓶中加入硼砂缓冲液5ml，0.1%四氯苯醌溶液3ml，再加入各标准稀释液各2ml，混匀，置50℃水浴2小时后，定容，于350nm波长测吸光度，同时用2ml水代替样品做空白对照。3.将各样品测定吸光度代入回归方程计算，求出相应的盐酸精氨酸含量3%供试品4%供试品5%供试品6%供试品吸光度（1）含量（第1次）回收率（1）吸光度（2）产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第10页共13页含量（第2次）回收率（2）吸光度（3）含量（第3次）回收率（3）计算：5.4.5耐用性：当实验反应温度发生变化，结果无明显变化。温度变化前后结果对比RSD（n=6）≤2.0%①分别取溶解后的样品1.0ml于100ml容量瓶中，加水稀释刻度并混匀，再取稀释后样品2ml加水5ml，混匀。②于50ml容量瓶中加入硼砂缓冲液5ml，0.1%四氯苯醌溶液3ml，再加入各标准稀释液各2ml，混匀，置50℃水浴2小时后，定容，于350nm波长测吸光度，同时用2ml水代替样品做空白对照。。40℃供试品40℃供试品40℃供试品50℃供试品50℃供试品50℃供试品吸光度测定浓度RSD产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第11页共13页评价：5.4.4方法确认所提供的检验记录盐酸精氨酸含量测定记录6.确认结果确认内容标准限度测定结果结论准确度回收率（平均值）RSD（n=9）98.0～102.0%≤2.0%精密度重复性，RSD（n=6）≤2.0%线性，R≥0.990范围：耐用性RSD≤2.0%7.确认结论本实验方法确认准确度、精密度、范围结果。8.偏离说明8.1实验过程中的偏差或异常。实验过程中任何失败的测试，过程中的偏差或异常均需复核和评估并查出原因。过程中的偏差或异常需在下面表格中填入偏差或异常报告编号、偏差或产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第12页共13页异常简单说明并签字。每填写一项都要在“项目确认/日期”一列中签字。偏差或异常报告编号偏差或异常简要说明项目确认/日期8.2偏差或异常报告编号偏差或异常报告编号偏差或异常项目偏差或异常说明结论确认人/日期复核人/日期9.再确认和风险评估9.1变更后的再确认当出现下列情况时，一般需要进行检验方法的再确认药物生产方法变更；制剂的组分变更；原分析方法进行了修订；检验仪器发生改变；产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第13页共13页实验室场所发生改变；药典的常规方法用于新药。9.2定期再确认初始确认后的定期再确认一般为每五年进行一次，主要可采用回顾性确认的方式实现。9.3风险评估使用未经校验或确认合格的紫外分光光度计可能会影响实验结果，对测定带来风险。使用未经校验合格或未清洁干净的移液管、容量瓶等可能会影响实验结果，对测定带来风险。使用不合格的或已过有效期的化学试剂可能会影响实验结果，对测定带来风险。检验人员配制试剂、配制样品溶液、仪器使用等操作失误会影响实验结果，对测定带来风险。盐酸精氨酸含量测定方法验证记录产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第14页共13页检品名称批号规格检验方法仪器型号仪器编号检验日期温度湿度一、线性：验证该方法检验结果与供试品中被测物质浓度呈正比关系的程度。（1）.S1取盐酸精氨酸标准液（）加水，即为（2）.S2取S1加水，即为（3）.S3取S1加水，即为（2）.S4取S3加水，即为于50ml容量瓶中加入硼砂缓冲液ml，0.1%四氯苯醌溶液ml，再加入各标准稀释液各ml，混匀，置50℃水浴2小时后，定容，于nm波长测吸光度，同时用2ml水代替样品做空白对照。S1S2S3S4吸光度回归方程A：B：r：评价：二.准确度：验证该方法检验结果与真实值接近程度，以回收率(%)表示。1.样品溶液的制备1.1.称取盐酸精氨酸g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，产品中盐酸精氨酸含量测定方法确认方案第15页共13页配成盐酸精氨酸溶液；1.2.称取盐酸精氨酸g，取未加盐酸精氨酸人纤维蛋白原稀释至50ml，配成盐酸精氨酸