第三章血液分析仪检验

第三章血液分析仪检验通过本章节学习，你将能回答关于“血液分析仪检验”的下列问题：1．自动血液分析仪在哪一年代问世？在临床检测中有何强劲优势？2．现代血液分析仪具有检测哪几类血细胞的功能？3．简述三分群血液分析仪细胞检测的主要原理？4．射频电导法可检测细胞的哪些特征？5．什么是流式细胞术Mie光散射理论？6．简述流式细胞术检测细胞的主要原理？7．简述激光散射法系统的基本组成？8．血液分析仪应用分光光度法何种原理、检测何种物质？9．血液分析仪应用哪两大类溶血剂检测血红蛋白？各有何特点？10．血液分析仪检测白细胞应用哪些原理？试列举尽可能多的检测参数？11．血液分析仪检测红细胞应用哪些原理？试列举尽可能多的检测参数？12．血液分析仪检测血小板应用哪些原理？试列举尽可能多的检测参数？13．什么是VCS？检测血细胞各具有何特点？14．血液分析仪检测白细胞分类、网织红细胞、有核红细胞、网织血小板分别用哪些特殊细胞染色法？15．什么是MAPSS？检测血细胞具有何特点？16．什么是DHSS？检测血细胞具有何特点？17．血液分析仪检测红细胞计数、血小板计数分别应用哪些原理？18．血液分析仪有哪几类结果显示形式？19．简述三分群血液分析仪白细胞、红细胞和血小板直方图的表达特点？20．哪些因素可影响正常细胞直方图？21．简述五分类血液分析仪散点图上任意一点的表达特点？22．红细胞体积血红蛋白九分区散点图有何特点？23．什么是血液分析仪的报警概念？常见哪些报警方式和内容？24．标本中哪些因素可引起血液分析仪检测参数报警（分检测参数举例）？25．国际上有哪些重要文件涉及血液分析仪质量保证、仪器校准和性能评价？26．血液分析仪质量保证包括哪些环节？27．血液分析仪仪器校准有哪些要点？28．血液分析仪性能评价有哪些要点和具体评价项目？29．血液分析仪白细胞分类计数性能评价对标本来源有何要求？30．2005年，国际血液学组织发布的血液分析仪显微镜复检规则有几条？31．用什么原则和指标评价血液分析仪检测参数的临床应用价值？32．简述红细胞参数RDW、IRF、CHr临床意义？33．简述血小板参数MPV、IPF临床意义？34．简述白细胞参数MID、IG、HPC、MPXI临床意义？自动血液分析仪（automatedhematologyanalyzer，AHA），早年称血细胞计数仪（bloodcellcounter），已是目前国内外临床检验最常用的筛检仪器之一。传统手工法显微镜血细胞计数或分类方法，不仅速度慢，而且因操作过程的随机误差、实验器材的系统误差和检测方法的固有误差，检测的精密度不高。在应对检查大量临床标本时，显微镜细胞计数法难以满足临床及时诊断疾病的需求。20世纪50年代初，美国W.H.Coulter申请了粒子计数法的技术专利，在世界上研发了第1台电子血细胞计数仪，并应用于临床，开创了血细胞计数的新纪元。从此，随着基础医学和高科技，特别是计算机软件技术的发展，其检测原理逐渐完善，检测技术不断创新，检测参数显著增多。“精度高、速度快、易操作、功能强”是血液分析仪的强劲优势，还可与血涂片制备和染色仪进行组合，由后者完成血液分析仪检测后的形态学复检。现代血液分析仪的功能还扩展到检测体液红细胞、白细胞计数和分类。当前，应用多项检测原理的血液分析仪问世，为临床不同层次需求提供了有效的血细胞检测参数，对疾病诊断与治疗有着重要的临床意义。现代血液分析仪的功能有：①全血细胞计数功能（红细胞、白细胞和血小板计数及其相关的计算参数）。②白细胞分类功能（3分群或5分类白细胞百分率和绝对值）。③血细胞计数和分类功能的扩展功能，包括：有核红细胞计数、网织红细胞计数及其相关参数检测；未成熟粒细胞、幼稚粒细胞、造血干细胞计数；未成熟血小板比率；淋巴细胞亚型计数；细胞免疫表型检测等。第一节检测原理现代血液分析仪主要综合应用了电学和光学2大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和无形成分（血红蛋白）。电学检测原理包括电阻抗法和射频电导法；光学检测原理包括激光散射法和分光光度法。激光散射法检测的对象有2类：染色的和非染色的细胞核、颗粒等成分。一、电阻抗法（一）血细胞计数原理悬浮在电解质溶液中的血细胞相对于电解质溶液为非导电颗粒，其电阻比电解质溶液大。利用两者导电性能的差异，当体积大小不同的血细胞（或类似颗粒）通过计数小孔时，可引起小孔内、外电流或电压的变化，形成与血细胞数量相当、体积大小相应的脉冲电压，从而间接区分出血细胞群，并分别进行计数，这就是电阻抗原理（principleofelectricalimpedance），即库尔特原理（Coulterprinciple）（图3-1）。图3-1电阻抗细胞计数原理电阻抗法可准确测量出细胞（或类似颗粒）的大小，是三分群血液分析仪的主要应用原理。电阻抗法还与光学检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。（二）三分群血液分析仪基本组成三分群血液分析仪基本组成见表3-1。表3-1三分群血液分析仪基本组成组成功能信号发生器各种微粒（血细胞、细胞碎片、杂质等颗粒）通过检测小孔产生电阻抗脉冲信号的检测源放大器将血细胞微弱脉冲信号放大以触发电路系统阈值调节器调节能区分不同群细胞合适的信号电平甄别器去除非参考电平的各种假信号以提高计数的准确性整形器将不一致的脉冲波形信号调整为标准的波形后触发计数电路系统计数系统将整形后的血细胞脉冲信号显示为不同类群的细胞数二、射频电导法射频（radiofrequency，RF）指射频电流，是每秒变化大于10000次的高频交流电磁波。电导性（electricalconductivity）即电的传送性能。高频电流能通过细胞壁。用高频电磁探针渗入细胞膜脂质层可测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质（如比例）、颗粒成分（如大小和密度）等特征性信息（图3-2）。电导性特别有助于鉴别体积虽相同、但内部结构性质不同的细胞（或相似体积的颗粒）；如淋巴细胞和嗜碱性粒细胞两者直径虽均为9～12μm，但在高频电流检测时，因两类细胞不同核质比例而出现不同的检测信号。射频电导法结合其他检测原理一起应用于血液分析仪中。图3-2射频电流检测原理三、激光散射法（一）基本检测原理激光散射法应用了流式细胞术（flowcytometry，FCM）检测原理。1．流式细胞术光散射理论目前，细胞分析应用Mie同质性球体光散射理论（Mietheoryoflightscatterforhomogenenousspheres）。即：当光散射符合“2λ/π＜D＜10λ/π”（λ，入射光波长；D，球形物体直径）时，则测定光照射在颗粒上所形成的光散射强度的公式是：S＝Ｆ（λ，α，τ，φ，β）其中，S：散射光强度；λ：使用波长；α：折射率；τ：容积；φ：检测角度；β：形状因子。2．流式细胞术检测原理将经试剂稀释、染色、球形化的细胞（或其他颗粒）悬液注入鞘液流中央，单个细胞随悬液和鞘液流两股液流整齐排列，以恒定流速定向通过石英毛细管（图3-3）。当细胞（或其他颗粒）通过激光束被照射时，细胞（或其他颗粒）因本身的各种特性（如体积大小、染色程度、细胞成分浓度或细胞核密度等），可阻挡或改变激光束的方向，产生与细胞（或其他颗粒）特征相应的各种角度的散射光。置放在石英毛细管周围不同角度的信号检测器（光电倍增管）接受到特征各异的散射光。来自低角度散射光（或称前向散射光）的信息，反映细胞（或其他颗粒）的数量和表面体积大小；来自高角度散射光（或称侧向散射光）的信息，反映细胞（或其他颗粒）的内部颗粒、细胞核等复杂性。如细胞（或其他颗粒）用荧光染料染色，则染色后的细胞（或其他颗粒）被激光照射时，可产生不同波长的荧光散射，可用检测器接受散射荧光（图3-4）。将来自各种散射光的信息进行综合分析，即可准确区分正常类型的细胞（或其他颗粒）。激光散射法在区别体积相同而类型不同的细胞特征时，比电阻抗法血细胞分群更准确。故激光散射法已成为现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。图3-3鞘流技术（二）激光散射法系统基本组成激光散射法系统基本组成见表3-2，图3-4。表3-2激光散射法系统基本组成名称组成及评价光源气体（氦-氖、氩气等）激光或固体（半导体）激光（单色光）；钨光源（多色光）鞘流维持颗粒于液流中央，顺序、单个、恒速向前流动，即流体动力学聚焦（hydrodynamicfocusing）细胞悬液被检测细胞（颗粒）的悬液，由气压导入流动池光检测器接受来自各种角度的散射光或吸收光信号，并转换成相应特征的电信号图3-4流式细胞术检测通道和光路系统四、分光光度法分光光度法检测原理遵循Lambert-Beer比色定律，即A=lg（I0/I）。其中，A是吸光度（absorbance），或称光密度（opticaldensity，D）；I0是单色入射光强度，I为透过光强度。被检物质吸收的单色光量与有色溶液（或悬液）的性质、厚度和浓度有关。当液体性质和厚度固定后，则吸光度与液体物质浓度成正比。分光光度法仪器的主要组成：单色光源、检测池和比色容器、光检测器。三分群或五分类血液分析仪均用分光光度法原理测定血红蛋白：含有溶血剂的稀释液使红细胞溶解并释放出血红蛋白，血红蛋白与溶血剂中某些成分结合，形成一种稳定的血红蛋白衍生物，在特定的光波范围（530～550nm）下进行比色；吸光度的变化与血液血红蛋白浓度成正比。目前，用于血红蛋白测定的溶血剂有2大类。一类是含氰化物的溶血剂，所形成氰化血红蛋白（HiCN），最大吸收峰在540nm，显色稳定。另一类是不含氰化物的溶血剂，如月桂酰硫酸钠血红蛋白（sodiumlaurylsulfate，SLS）法，当用HiCN法校准后，其检测的优点是既可达到与HiCN法相当的精密度和准确性，又可避免HiCN法试剂对操作人员的潜在危害和对环境的污染。五、血液分析仪检测参数原理（一）血液分析仪检测参数原理不同类型血液分析仪检验参数的原理不尽相同。高档仪器应用2种或2种以上检测原理，组合电学、光学、细胞化学等技术，在独特检测通道测定红细胞、血小板和白细胞系列的数量、亚类及相关参数（表3-3、表3-4）。表3-3血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术－白细胞系列检测参数英文全称缩写单位检测原理和技术白细胞计数whitebloodcellcount/concentrationWBC×109/L光散射（或加荧光染色）（五分类）；电阻抗法（三分群，五分类）中性粒细胞neutrophilcount/absoluteNEUT#×光散射（或加荧光染色，或加细胞化计数concentration109/L学法）、射频法、鞘流电阻抗法、光吸收法（五分类）；电阻抗法（三分群）淋巴细胞计数lymphocytecount/absoluteconcentrationLYMPH#×109/L单核细胞计数monocytecount/absoluteconcentrationMONO#×109/L光散射（或加荧光染色，或加细胞化学法）、射频法、鞘流电阻抗法（五分类）、光吸收法（五分类）嗜酸性细胞计数eosinophilcount/absoluteconcentrationEO#×109/L嗜碱性细胞计数basophilcount/absoluteconcentrationBASO#×109/L中间细胞群计数middlecellcountMID#×109/L电阻抗法（三分群）中间细胞群百分率middlecellpercentMID%来自计算（三分群）粒细胞群计数granulocytecountGRAN#×109/L电阻抗法（三分群）粒细胞群百分率granulocytepercentGRAN%%来自计算（三分群）淋巴细胞群计数lymphocytecountLYM#×109/L电阻抗法（三分群）淋巴细胞群百分率lymphocytecountLYM%%来自计算（三分群）淋巴细胞百分率lymphocytepercentageofWBCsLYMPH%%来自计算（五分类、三分群）单核细胞百分率monocytepercentageofWBCsMO