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生物必修三知识点1.基因工程:①别名DNA重组技术②操作水平:DNA分子水平③过程:剪切~拼接~导入~表达④作用:定向改变生物性状2.分子的手术刀-限制性核酸内切酶①具有专一性②断键:磷酸二脂键③结果:产生粘性末端或平末端3.分子缝合针-DNA连接酶①种类:E·coliDNA连接酶(大肠杆菌):连接粘性末端T4DNA连接酶:连接粘性末端和平末端(平末端连接效率较低)②链接磷酸二酯键4.分子运输车-载体①作用:目的基因导入受体细胞对目的基因进行大量复制②条件:(1)能在宿主细胞中稳定保存并大量复制(2)具有多个限制酶切点(3)具有标志基因③种类:细菌的质粒(环状DNA分子).λ噬菌体的衍生物.动植物病毒5.限制酶的切点必须是标志基因以外6.基因工程得以实现的理论基础:①所有生物的DNA都以四种脱氧核糖核苷酸为基本单位,构成独特的双螺旋结构。②所有生物共用一套密码子。7.DNA连接酶起作用时不需要模版。8.限制酶不切割细菌自身DNA的原因:原核生物中不存在识别序列或识别序列的碱基已被修饰。9.基因工程的基本操作程序:目的基因的获取→基因表达载体的构建(核心)→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定一.目的基因的获取:①基因文库获取(基因组文库,cDNA文库)②PCR技术(多聚酶链式反应):体外复制特定DNA片段。过程:变性(90~95℃,断H键)→退火(55~60℃)→延伸(70~75℃)前提:一段已知目的基因的核苷酸序列。酶:热稳定的DNA聚合酶(Taq酶)原料:四种脱氧核苷酸。③人工合成(1)反转录法(2)DNA合成仪二.基因表达载体的构建包含:目的基因,启动子(RNA聚合酶识别和结合的位置),终止子,标志基因条件:同种限制酶,DNA连接酶,ATP结合可能:载体-载体,载体-目的基因(所需),-目的基因-目的基因三.将目的基因倒入受体细胞①导入植物细胞农杆菌转化法(主要),基因枪法,花粉管通道法农杆菌质粒上的T-DNA(可转移的DNA)可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上。②倒入动物细胞:显微注射技术③倒入微生物细胞:Ca+处理使其成为感受态细胞四.目的基因的检测与鉴定①导入检测:DNA分子杂交技术(杂交带)②转录检测:DNA-mRNA分子杂交技术③翻译检测:抗原-抗体杂交个体水平检测:抗虫,抗病接种试验10.基因工程应用植物:抗虫转基因植物(Bt毒蛋白),抗病转基因植物,抗逆转基因植物,利用转基因改良植物品质。动物:提高动物生长速度,改良畜产品品质,用转基因动物生产药物,用转基因动物做器官移植的供体。11.基因治疗:把正常基因导入病人体内,让基因表达产物发挥作用,从而达到治疗的目的。12.蛋白质工程:从预期蛋白质功能出发→设计出预期的蛋白质结构→推测应有的核苷酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列(基因)13.基因工程只能生产自然界中存在的蛋白质,蛋白质工程可以生产出自然界中不存在的蛋白质。14.蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程,二者相互促进。专题二细胞工程15.细胞工程:应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法,通过细胞水平或细胞器水平上的操作,按照人们的意愿来改变细胞内遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。16.分类:操作对象:植物细胞工程,动物细胞工程。所用技术的不同:细胞与组织培养,细胞融合,细胞核移植,染色体工程。17.细胞的全能性:具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞,都具有发育成完整个体的潜能。原因:生物体的每一个细胞都含有本物种的全套遗传物质,都有发育成完整个体的全套基因。18.植物组织培养培养基:有机物,水分,无机盐,植物激素(生长素和细胞分裂素)生长素含量>细胞分裂素时,利于根的形成。生长素含量<细胞分裂素时,利于芽的形成。19.植物组织培养技术:原理:细胞的全能性过程:离体的植物组织,器官,细胞(脱分化)→愈伤组织(再分化)→根,芽→植物体愈伤组织:一团排列松散,具有分生能力的薄壁细胞脱分化需在无光的条件下进行,再分化后期需要光照。有光时,容易形成维管组织,而不易形成愈伤组织。植物组织培养应选用有形成层的部位。必须经过灭菌处理:避免杂菌消耗营养和感染植物细胞。20.人工种子:再分化得到的胚状体再加上人工胚乳(含营养,杀虫剂等物质)药物:从愈伤组织中提取。21.植物体细胞杂交技术①去壁:酶解法:纤维素酶和果胶酶②诱导融合:物理法:离心,振动,电激等。化学:聚乙二醇(PEG)诱导③原理:细胞膜的流动性和细胞的全能性。④优点:克服了远缘杂交不亲合的障碍。⑤生物基因的表达不是孤立的,他是相互影响,相互作用的。21.动物细胞培养:取材:动物胚胎或幼龄动物的组织,器官。原因:增殖能力强,分裂旺盛,分化程度低,容易培养。过程:将所取得组织剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理,使细胞分散。置于适宜环境中培养。22.冷冻保存的细胞一般为传代10代以内的细胞,可以保证正常的二倍体核型。23.10代以内为原代培养,10代以后为传代培养。10代~50代为细胞株,50代以后为细胞系。24.动物细胞培养的条件:①严格的无菌环境②必须的营养物质(氨基酸,葡萄糖,无机盐,维生素,核苷酸,还需加一定量的动物血清)③适宜的温度和PH④气体环境(O2和CO2,CO2起调节PH的作用)25.动物细胞培养的应用:①生产有价值的生物制品(病毒疫苗,干扰素,单克隆抗体等)②生产基因工程中常用的受体细胞。③检测有毒物质,判断某种物质的毒性。④生理研究。26.与植物细胞培养相比,动物细胞培养的独特之处在于液体培养基中含有动物血清。27.动物细胞培养特点:接触抑制,贴壁生长28.动物细胞培养皿表面必须光滑,无毒,易于贴附。29.克隆属于无性生殖①在分子水平上:克隆指DNA克隆,通过某一特定的DNA片段通过重组DNA技术插入到载体中,然后在宿主细胞中进行自我复制所得的相同DNA片段。②在细胞水平上,克隆是指由一个单一的细胞分裂所形成的细胞群体。③在个体水平上,克隆是指基因型完全相同的两个或更多的个体组成的一个群体。30.克隆的条件①具有包含本物种完整基因组的细胞核的活细胞。②能调控细胞核发育的细胞质。③完成胚胎发育的必要环境条件。31.动物体细胞核移植①概念:将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已去掉细胞核的卵母细胞中,使其充足发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体。②原理:动物细胞核的全能性③类型:胚胎细胞核移植,体细胞核移植④选择的受体细胞是去核的卵母细胞,处于减数第二次分裂中期。选择卵母细胞的原因:(1)卵母细胞中含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。(2)细胞大,便于操作。⑤运用的生物技术:细胞核移植,动物细胞培养,胚胎移植。⑥常用的去核方法:显微操作法⑦克隆不是对供体百分之百的复制。32.动物细胞融合概念:也称动物细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合成一个细胞的过程。①诱导方法:物理:电激化学:聚乙二醇诱导生物:灭活的病毒(特有)②意义:突破了远缘杂交不亲和的障碍。③重要应用:单克隆抗体④形成的杂交细胞包含两个亲本的遗传物质,其染色体数,基因组成情况,染色体组都是两细胞之和,将表现出两个亲本的遗传特性。33.单克隆抗体①概念:由一个细胞经多次无性繁殖形成的一个细胞系称为单克隆,单克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。②获得抗体的传统方法:向动物体内反复注射某种抗原,使动物产生抗体,后从动物血清中提取。缺点:产量低,纯度低,制备的抗体特异性较差。③(1)B淋巴细胞:能产生特异性抗体,在体外不能无限增殖。(2)骨髓瘤细胞:不能产生抗体,但能无限增值。④杂交瘤细胞特点:能产生特异性抗体并能无限增殖。⑤单抗的优点:特异性强,灵敏度高,化学性质单一,并可大量制备。⑥单抗的应用:(1)作为诊断试剂(准确,高效,简易,快速)(2)用于治疗疾病和运载药物。(生物导弹:将单抗与放射性同位素,化学药物或细胞毒素相结合,制成生物导弹(疗效高,毒副作用小))专题三胚胎工程34.内容:体外受精,胚胎移植,胚胎分割,胚胎干细胞培养。35.精子的发生①场所:睾丸②时期:从初情期开始,直到生殖机能衰退。③精子的变形:细胞核→精子头的主要部分高尔基体→头部的顶体中心体→精子的尾线粒体→精子尾的基部的线粒体鞘其他物质→原生质滴36.卵子的发生①场所:卵巢,输卵管②时期:性别分化以后。卵泡的形成和储备在胎儿期,排卵从哺乳动物进入初情起开始。③减数第一次分裂是在雌性动物排卵前后完成的,减数第二次分裂是在精子和卵子结合过程中完成的。④卵子的形成不需要经过变形。37.受精①精子和卵子结合形成合子(受精卵)的过程。②在自然条件下,受精是在输卵管中完成的。③受精前的准备:精子获能卵子的准备:卵子在输卵管中发育到减二中期,才具备受精能力。④受精阶段第一步:精子穿越放射冠和透明带。顶体反应使顶体里的酶释放出来并溶解放射冠内的卵丘细胞;第二步:精子进人卵细胞膜。第三步:原核形成。雌雄原核融合成为合子。第四步:配子结合。⑤防止多精入卵第一道屏障:透明带反应第二道屏障:卵黄膜反应。⑥受精的标志:在透明带和卵黄膜之间观察到两个极体。完成的标志:雌雄原核融合。⑦生理意义:(1)维持生物体前后带染色体数目恒定。(2)对生物体的遗传变异和生物进化十分重要。38.排卵是指卵子从卵泡中排出,而不是指卵泡从卵巢中排出。39.胚胎发育过程①受精卵→桑椹胚→囊胚→原肠胚→幼体②卵裂期特点:细胞数目增加,胚胎总体积不增加或略微减小。③原肠胚是分化能力最强的阶段,细胞已分化成外,中,内三个胚层。40.试管动物:体外受精,并发育成早期胚胎后,再经移植产生后代的技术。41.体外受精:指哺乳动物的精子和卵子在体外经人工控制的环境中完成受精的过程。42.卵母细胞的采集:①对小型家畜(小鼠,兔,猪,羊):促性腺激素处理,促使其超数排卵,后在输卵管冲取卵子。②从刚屠宰的雌性动物体内摘取卵巢,再从卵巢中采集卵母细胞。③活体取卵(从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞)。后两种方法适合大型家畜。43.精子的采集:假阴道法,手握法,电刺激法。44.精子的获能:①培养法。②化学诱导法。(肝素或Ca+载体A23187溶液)45.胚胎早期培养:①培养液:氨基酸,核苷酸,无机盐,有机盐,激素(生长素,细胞分裂素),水,动物血清。②移植时间:桑葚胚或囊胚。46.试管动物和克隆动物区别47.胚胎移植:①胚胎移植是其他技术的最后一道工序。②供体:提供胚胎的个体。受体:接受胚胎的个体。供体的主要职能:产生具有优良遗传特性的胚胎。受体的主要职能:妊娠和育仔。③胚胎移植的生理学基础:(1)供体和受体具有相同的生理环境。(同期发情)(2)早期胚胎处于游离状态,为胚胎收集提供了可能。(3)受体对外来胚胎的认可,对外来胚胎基本不发生免疫排斥。(4)供体胚胎与受体可建立正常联系。④供受体必须是同种生物。⑤受体为常见或存量大的品种,供体则为优良品种。⑥冲卵是指冲取胚胎,而不是卵子。⑦两次使用激素:第一次是做同期发情处理。第二次是用于供体的超数排卵。⑧过程图⑨意义:(1)大大缩短了供体本身的繁殖周期,增加供体一生繁殖后代的数量。(2)充分发挥雌性个体的繁殖潜能。48.胚胎分割:①理论基础:细胞的全能性。②仪器和设备:实体显微镜和显微操作仪。③用分割针或分割刀将胚胎分割。④注意问题:(1)分割时应选择发育良好,形态正常的桑葚胚或囊胚。(2)将内细胞团均等分割,以免影响胚胎的恢复和进一步发育。⑤意义:加快繁殖速度,是动物无性繁殖或克隆的方法之一。49.胚胎干细胞(EK或ES细胞):①由早期胚胎或原始性腺中提取分离出来。②特点:体积小,细胞核大,核仁明显。③体外培养加滋养层细胞,可使胚胎细胞分裂而不分化。④用途:(1)治疗某些顽疾(帕金森综合征,少年糖尿病,老年痴呆)。(2)培育人造组织器官,用于器官移植。(3)研究体外细胞分化的理想材料。⑤注意事项:(1)分割份数不宜过多。(2)均等分割。50.我国对克隆的态度:反对克隆人,并不反对治疗性克隆。51.生态工程的基本原理:(1)物质循环再生原理。(2)物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