液相色谱系统图谱相关知识

液相色谱系统图谱相关知识点击次数：429发布时间：2009-7-17谱图的各种问题液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。A、峰拖尾原因解决方法1、筛板阻塞1、a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷2、填充色谱柱3、干扰峰3、a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反应图5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱B、峰前延原因解决方法1、柱温低1、升高柱温2、样品溶剂选择不恰当2、使用流动相作为样品溶剂3、样品过载3、降低样品含量4、色谱柱损坏4、见A1、A2C、峰分叉原因解决方法1、保护柱或分析柱污染图1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。2、样品溶剂不溶于流动相2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。D、峰变形原因解决方法1、样品过载1、减少样品载量E、早出的峰变形原因解决方法1、样品溶剂选择不恰当1、a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解决方法1、柱外效应1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池G、K’增加时，脱尾更严重原因解决方法1、二级保留效应，反相模式1、a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子2、二级保留效应，正相模式2、a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法3、二级保留效应，离子对3、加入三乙胺（或碱性样品）H、酸性或碱性化合物的峰拖尾原因解决方法1、缓冲不合适1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液I、额外的峰原因解决方法1、样品中有其他组份1、正常2、前一次进样的洗脱峰2、a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰3、a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积J、保留时间波动原因解决方法1、温控不当1、调好柱温2、流动相组分变化2、防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、保留时间不断变化原因解决方法1、流速变化1、重新设定流速2、泵中有气泡2、从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当3、a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相L、基线漂移原因解决方法1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。9、使用循环溶剂，但检测器未调整。9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。10、检测器没有设定在最大吸收波长处。10、将波长调整至最大吸收波长处M、基线噪音（规则的）原因解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空气1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2、漏液图2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）4、减少差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。6、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器N、基线噪音（不规则的）原因解决方法1、漏液图1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、检查流动相的组成。3、流动相各溶剂不相溶3、选择互溶的流动相4、检测器/记录仪电子元件的问题4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。5、系统内有气泡5、用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、检测器灯能量不足8、更换灯9、色谱柱填料流失或阻塞9、更换色谱柱10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置O、宽峰原因解决方法1、流动相组成变化1、重新制备新的流动相2、流动相流速太低2、调节流速3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）3、见section3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。4、检测器设定不正确4、调整设定5、柱外效应影响a、柱子过载b、检测器对反应时间或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大d、记录仪响应时间太长图5、a、小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀释样品b、减少响应时间或使用更小的流通池c、使用内径为0.007-0.01的短管路d、减少响应时间6、缓冲液浓度太低6、增加浓度7、保护柱污染或失效7、更换保护柱8、色谱柱污染或失效，塔板数较低8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。9、柱入口塌陷9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果11、柱温过低11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃12、检测器时间常数太大12、使用较小的时间常数P、分离度降低原因解决方法1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）1、重新配置流动相2、保护柱或分析柱阻塞图2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。Q、所有的峰面积都太小原因解决方法1、检测器衰减设定过高1、减少衰减的设定2、检测器时间常数设定太大2、设定较小的时间常数3、进样量太少3、增大进样量4、记录仪连接不当4、使用正确的连接R、所有的峰面积都太大原因解决方法1、检测器衰减设定过低1、采取较大的衰减2、进样过多2、减少进样量3、记录仪连接不正确3、正确连接记录仪80degree回复于：2009-6-2520:58:071.1如果柱子性能无损害，宽峰最大可能是样品浓度过大；或者流动相不合适，多个组分未有效分离。再有就是柱子类型选择错了，就是样品极性与柱子类型不匹配。1.2馒头峰最大可能流动相种类梯度不合适，再有就是样品复杂，总有极相似成分难于分离，这时可采取适当措施简化样品或者将样品分成几个部分在各自摸索条件。如果馒头峰出现在较早TR值，可能液相系统中未完全替换上合适流动相，即平衡不充分。另外如果馒头峰极其夸张而且很多，检测池也检查一下吧，会伴有压力过高，这种情况单纯液相色谱中不是很常见。注：当然这都是首先排除柱子问题！2.避免宽峰首先要保证样品浓度足够小。然后再去摸索流动相吧！馒头峰如果不是分析对象，无伤大雅的话就凑合用吧（前提是复杂样品比如中药提取物）。3.弥补这个事情很难讲的，看你要干什么，具体问题具体分析吧！[em09511]wyqql2060回复于：2009-7-111:25:081.产生宽峰/馒头峰的原因可能是a。溶解样品的溶剂和流动相不是同一个东西。b。流动相组成比例存在缺陷c。样品量过载d。柱子不能满足实验要求2.平时实验中怎样有效避免宽峰/馒头峰？a。尽量用流动相溶解样品，如过不行，进一针溶剂考察一下系统b。流动相组成应经过验证，寻找最佳比例。c。验证最小进样量，找到最佳的含量进样量d。选柱3.对于已经产生宽峰/馒头峰，有什么好的处理方法来弥补？a。先考虑是溶剂引起的还是流动相引起的，如果是，不予考虑，但应在报告中说明b。如果不是目标峰，应该积分，应有说明c。是目标峰，重新做（减少进样量；是不行，配制流动相（更换组成比例）；还是不行，换柱duliuhui回复于：2009-6-2314:58:30除了柱子污染、失效等原因外，可能原因:样品与柱子不匹配。样品和流动相不匹配。气泡。进样量过大有时也会变成馒头峰。样品前处理不合适。luxw回复于：2009-6-2315:29:18除了柱子出现损害外，1.梯度洗脱时比例阀出现问题，分配比例不准了（在安捷伦1100中遇到过）2.流动相问题，如：内有空气、有机系和水系没有混匀、调节ph或加入的离子对量不正确等3.仪器问题，如：电信号不稳定、检测池有气泡等个人见解，仅供交流！[em09511]duankehai回复于：2009-6-2912:29:30我认为，如果是直接用甲醇溶解样品进样而出现馒头峰，出现这种情况比较正常，因为甲醇经过柱子后会在样品出峰时快速与硅醇链作用，造成样品在柱内的环境迅速变化，色谱峰也必定很不理想~！所以，用流动相溶解药物，为样品创造一个最协调稳定的环境，这样再判断是否柱子不行！hmzhou83回复于：2009-6-1722:06:591）出现气泡或者出现塌陷导致的。这个可能性比较大。2）脱尾那么严重，估计污染也很厉害。3）存在比较大的涡旋死体积了。bestalian回复于：2009-6-188:42:211.柱子的柱效下降，进样量太大，多组分没有分离开2.选择合适的实验条件，包括柱子，进样量等3.已经产生的宽峰/馒头峰，就不能准确的使用面积定量了，所以我都是找找原因重做了liwei7893回复于：2009-6-1810:57:071.柱子柱效下降，柱子和样品不匹配。2.选择适当的柱子和流动相等色谱条件。3.没有，只有找出产生的原因，重做。hgycook回复于：2009-6-1812:17:041.原因最直接的是色谱柱柱效下降，组分分离效果不好。再有就是流动相污染样品处理带入杂质。2.避免选择合适的色谱柱，优化分析方法确保流动相纯净。3.处理一般出现的馒头峰不与采纳需从新进样，对馒头峰造成的干扰也可以采用峰切割，或做拖尾前沿峰处理。我们的检品种有这种出馒头峰的现象，一般对照不产生，样品进样一定次数就会出现，而且位置规定，峰的大小会随进样次数的多少而递增。后断定，这种馒头峰是样品中杂质堆积产生的，可以通过设置进样后运行或走空针的办法来减小这种馒头峰。[em09511]zhangjing770880回复于：2009-6-1814:39:151.色谱柱柱效下降，组分分离效果比较差。还可能流动相污染或样品前处理等过程带入杂质。2.选择合适的色谱柱增大柱效，优化试验方法和确保前处理过程没有杂质介入以及流动相的纯度要保证。3.多找原因，确保试