油茶籽粒茶多酚黄铜类物质正交法有机溶剂法测定

６０％乙醇为溶剂的芦丁标准曲线测定称取在１００℃烘至恒质量的芦丁标准物质０．００３３ｇ以６０％的乙醇定容至２５．０ｍＬ，再分别取标准液０．０、１．０ｍＬ、２．０ｍＬ、３．０ｍＬ、４．０ｍＬ、５．０ｍＬ标准曲线见图１A×V2×100X=_____________________________V1×M×1000式中：X—试样中总黄酮的含量，mg/100g；A—由标准曲线算得被测液中黄酮量，ug；M—试样质量，g；V1—测定用试样体积，mL；V2—试样定容总体积，mL。计算结果保留二位有效数字020406080100406080提取时间不同提取时间Extractiontime/min提取量Extractioncontent/（mg/g)多酚黄酮2.4.2.1提取时间选择试验以60%的乙醇为溶剂,提取温度30℃,料液比1∶10(W∶V),的条件下,选择40,60,80,100min的时间进行提取,比较不同时间对提取液中的油茶叶中多酚含量的影响,选择最适合在油茶叶中多酚提取的时间。2.4.2.2溶剂浓度的确定试验在提取温度30℃,料液比1∶10(W∶V)及提取时间为60min的条件下,分别以20%,40%,60%,80%,100%的乙醇进行提取,选择最合适的溶剂浓度。2.4.2.3提取温度的选择试验在料液比1∶10(W∶V)和提取时间为60min、乙醇浓度为60%的条件下,分别选择20,30,40,50,60,70,80℃对油茶籽多酚进行提取,选择最佳的提取温度。2.4.2.4料液比选择试验在提取温度为50℃和提取时间为60min、乙醇浓度为60%的条件下,分别以1∶5,1∶10,1∶15,1∶20,1∶25,1∶30(W∶V)的料液比对油茶籽多酚进行提取,选择最佳料液比。2.5正交试验设计2.5.1单因素试验确定的范围将乙醇浓度、提取温度、提取时间、料液比作为考察的4因素,以总多酚含量为指标,表二：正交实验设计图表实验号ABCD多酚提取量（mg/g）1111116.7222122218.3443133315.914212318.0745223117.2636231216.187313217.848321316.0919332113.567通过试验，得到超声波辅助乙醇提取油茶叶总黄酮的最佳工艺是:60%的乙醇，提取时间为20min，料液比为1∶20mg/mL，超声波功率450W，在此条件下总黄酮的得率是最高的。在超声波辅助提取下，乙醇浓度、提取时间、料液比、超声波功率四因素对黄酮类化合物的提取量影响的主次顺序为:乙醇浓度＞料液比＞超声波功率＞提取时间。提纯试验中，选择上样速度为3BV/h，上液浓度为1.5mg/mL进行吸附，选择3BV90%的乙醇浓度和1.5BV/h的洗脱流速进行解吸试验。在油茶叶黄酮提取原液中，黄酮纯度为13.1%，经AB－8树脂精制后黄酮纯度为27.2%，提高了2.08倍。油茶叶作为一种可再生资源,不仅资源丰富,而且黄酮含量高,应该具有较好的开发应用前景。油茶叶中含有较高的黄酮类化合物，采用回流法提取油茶叶总黄酮的最佳工艺条件是：乙醇浓度60%，固液比1:20（g/mL），提取温度80℃，每次提取2h，连续提取2次，总黄酮得率为4.87%。在实际操作中,我们发现稀释定容用乙醇的浓度、试剂加入时间、显色时间等因素都会对吸光度值产生较大的影响由图3、图4结果可知,A、B、C、D的F值F(0.05)四因素均对试验结果有显著性影响,影响油茶提取量四因素主次顺序为:温度料液比浓度提取时间,相对来说温度对油茶籽的提取率影响最为显著,最佳组合为A1B1C2D2。本试验中,通过单因素试验和正交试验可知,乙醇浓度、提取温度、提取时间、料液比均对提取油茶籽多酚的效果得出提取茶油籽多酚的最佳工艺条件:甲醇浓度50%,提取温度为50℃,提取时间60min,料液比为1∶15(W∶V)。5610121VmVmX式中：X—样品中总黄酮含量g/5g或g/25mlM1—根据标准曲线计算出待测液中黄酮的量μgM—样品质量或样品体积g或mlV1—样品提取液测定用体积mlV2—样品提取液总体积mlA×1.957×2V1茶多酚(％)＝────────×---------×100结果=10001×m式中——滤液体积记为V1mLm——试样的质量，g；A——试样的吸光度；此次实验测定A=1.957——用10mm比色杯，当吸光度等于0.50时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg