气相色谱法测定环氧乙烷

气相色谱法测定明胶空心胶囊中环氧乙烷摘要：目的：对生产的明胶空心胶囊中环氧乙烷测定气相色谱法进行方法验证；方法：定性除了采用传统的对照品保留时间定性又采用了供试品加标定性和双柱定性，定量采用加标回收率验证方法准确性，方法精密度采用RSD%验证；结论：定性采用保留时间定性、DB-624色谱柱和PLOT/Q色谱柱双柱定性和加标定性，方法定性互相验证正确。定量加标回收率为98.44~99.98%，方法准确。方法精密度RSD%为3.6~4.1，方精密度好可靠。引言：依据《中国药典》（2010版）正文第二部分1204页明胶空心胶囊中环氧乙烷的测定气相色谱法，实验人员照残留溶剂测定法（附录ⅧP第二法附录61页）实验。采用了HP-5、DB-WAX、DB-624和PLOT/Q色谱柱实验（都是方法规定的色谱柱）。其中HP-5和DB-WAX均难以有效分离广生生产的供试品中的干扰峰，改用固定液为（6%）氰丙基苯基（94%）二甲基聚硅氧烷DB-624毛细管柱实现了基线分离，试验了供试品加标定性，加标回收率，加标RSD%。之后，依照残留溶剂测定法“附注（3）干扰峰的排除”又在另一根截然不同的气-固色谱柱做了实验。PLOT/Q色谱柱固定相为聚苯乙烯—二乙烯基苯型的高分子多孔小球。两者检验结果一致，排除了测定中有共出峰的干扰。1实验部分1.1仪器与试剂Agilent7890AGC/FID;GCChemstation(B.04.01)工作站；Agilent7694E顶空进样器。对照品：环氧乙烷（浓度5mg/ml，美国Accustandard）；溶剂：水（实验室超纯水）；供试品：明胶空心胶囊（广生胶囊提供）。1.2色谱条件①色谱条件色谱柱：DB-624毛细管柱（30m*0.53mm*3.0um），固定相：（6%）氰丙基苯基（94%）二甲基聚硅氧烷；柱温：40℃保持5min，升温速率25℃/min，上升到150℃终止程序升温，后运行温度230℃，后运行时间3min；载气流速：5mL/min。汽化室：汽化室110℃，分流比1:1。检测器：260℃，氢气40mL/min，空气400mL/min，尾吹33mL/min。色谱柱：HP-PLOT/Q毛细管柱（30m*0.32mm*20um），固定相：聚苯乙烯—二乙烯基苯型的高分子多孔小球；柱温：110℃保持5min，升温速率6℃/min，上升到120℃终止程序升温，后运行温度230℃，后运行时间3min；载气流速：6mL/min。汽化室：汽化室110℃，分流比1:1。检测器：260℃，氢气40mL/min，空气400mL/min，尾吹33mL/min。②进样方法自动顶空进样器，取10mL溶液置于20mL顶空瓶中压盖密封摇匀。顶空瓶温度80℃，平衡时间15min，定量环温度90℃，传输线温度100℃，取液上汽进样1mL。1.3对照品溶液和供试品溶液的配制1.3.1对照品溶液的配制根据中国药典2010版二部明胶空心胶囊中环氧乙烷的测定气相色谱法把浓度5mg/ml的环氧乙烷逐级稀释至2mg/L，吸取1mL浓度为2mg/L的环氧乙烷置于20mL顶空瓶中，加入9mL超纯水使溶液最终浓度为0.2mg/L。1.3.2供试品溶液的配制精密称取供试品种2.0g，置20mL容量瓶中加10mL温度为60℃超纯水密封不断震摇使溶解，制成供试品溶液。2方法学验证2.1水溶剂的空白试验按1.2节色谱条件，取水溶剂液上气1mL注入气相色谱仪，记录色谱图，表明水溶剂对待测的环氧乙烷无干扰。色谱图见附件2.2专属性按1.2节色谱条件，分别将环氧乙烷高浓度和对照品1mL注入气相色谱仪，记录色谱图，考察环氧乙烷专属性保留时间、分离度，理论塔板数。结果见表1，色谱图见图2。表1ADB-624气相色谱法参数待测组分高浓度保留时间（min）对照品保留时间（min）理论板数分离度环氧乙烷2.3092.311272974.65表1BHP-PLOT/Q气相色谱法参数待测组分高浓度保留时间（min）对照品保留时间（min）理论板数分离度环氧乙烷2.9933.0072220324.25结果表明，5个待测的溶剂专属性保留时间对应准确、分离度，理论板数均符合中国药典2010版规定。[5]该条件可满足各溶剂残留的有效测定。2.3精密度按1.2节色谱条件，吸取1mL浓度为2mg/L的环氧乙烷置于20mL顶空瓶中，加入9mL超纯水使溶液最终浓度为0.2mg/L。取液上气1mL，注入气相色谱仪，.连续进样6次，记录色谱图，依据色谱峰峰面积求其精密度，结果见表2。色谱图见附件表2ADB-624精密度平行样123456RSD%环氧乙烷1.20041.16261.20131.09061.16731.10284.1表2BHP-PLOT/Q精密度平行样123456RSD%环氧乙烷1.13051.06421.19281.11491.13141.12853.6结果表明连续进样,6次，测定的峰面积RSD均小于10%。本色谱条件精密度良好。2.4样品的测定按1.3.2供试品溶液的配制方法配制6个供试品，取液上气1mL，注入气相色谱仪，记录色谱图，依据色谱峰峰面积外标法定量测定结果，结果均为未检出。2.5准确度精密称量6个测定过的供试品各2.0g置于20mL顶空瓶中然后加入9mL温度为60℃超纯水密封不断震摇使溶解，待冷却至室温后加入浓度为2mg/L的环氧乙烷1mL，制成加标供试品溶液，按1.2节色谱条件，取液上气1mL，注入气相色谱仪，.连续进样6次，记录色谱图，依据色谱峰峰面积外标法定量求其加标回收率，以加标回收率验证方法准确度。测定结果见表3，色谱图见附件。表3ADB-624明胶空心胶囊回收率测定结果加入量回收率（%）平均值（%）RSD(%)平行1平行2平行3平行4平行5平行62mg/Kg90.93101.40104.5797.7498.66106.5899．985.6表3BHP-PLOT/Q明胶空心胶囊回收率测定结果加入量回收率（%）平均值（%）RSD(%)平行1平行2平行3平行4平行5平行62mg/Kg96．7198．5092．60104．58105．4692．7798．445.7结果表明：6个供试品在对照品出峰的保留时间均没有色谱峰检出，而加标后的供试品在对照品出峰的保留时间均有色谱峰检出，并且检出量与加入量基本一致，方法准确度验证本方法的回收率好。通过比较验证两种不同的色谱柱检验结果一致，依照残留溶剂测定法“附注（3）干扰峰的排除”排除了测定中有共出峰的干扰,采用本方法进行定性正确，定量准确。3结论方法学验证结果表明，明胶空心胶囊测定环氧乙烷所选的气相色谱条件符合《中华人民共和国药典》2010年版二部要求系统适用性试验分离度大于1.5，理论板数不低于5000，相对标准偏差（RSD）不大于10%的规定，通过比较验证两种不同的色谱柱检验结果一致，依照残留溶剂测定法“附注（3）干扰峰的排除”排除了测定中有共出峰的干扰,采用本方法进行定性正确，定量准确，无干扰，可以作为明胶空心胶囊中环氧乙烷的质量控制方法。