温度对果蝇的影响

《动物遗传学》实验报告实验题目不同温度对果蝇子代数量性状和雌雄比例的影响实验时间2013年10月20日——12月2日成员姓名王枭学号：20110284王进学号：20110287颜俊学号：20110290黄强学号：20110288郭辉学号：20110298向阿敏学号：20110314马向阳学号：20110280班级2011级水教1班指导教师蒋岸岸等级:一、实验目的实验通过对亲代野生型红眼黑腹扩大培养，将子代果蝇按雌雄比例为4:4装入9个培养瓶中每一个温度3个瓶子，并置于17℃、25℃、30℃的恒温箱中培养，观察并记录子代果蝇的数目、性别比，通过比较确定最适温度，探讨温度对果蝇数量性状和雌雄比例的影响。二、实验原理果蝇作为一种良好的动物实验材料，具有生长迅速，繁殖力强；后代数量大，便于统计分析；个体小，外饲养管理方便；变异类型多，易于观察和杂交组合；染色体巨大，且数量较少，便于观察研究等优点。1、培养基的配制（2瓶培养基的配方）成分水（ml）琼脂（g）葡萄糖（g）玉米粉（g）酵母膏（g）丙酸（g）玉米粉培养基10019121小块3-4滴取40ml水于小烧杯中，将玉米粉拌匀至糊状；取60ml水于大烧杯中，加入琼脂1.0g，煮沸溶解后再加入葡萄糖9g，期间要不断搅拌，防止糊底；将二者混合，继续加热，待煮沸后冷却到60℃，加入一团酵母膏（当培养基开始变色即可）和4滴丙酸，搅拌均匀后即可分装到两个培养瓶中。注：玉米粉一定要先用凉水拌匀后再加热，不能直接倒入加热的培养基中，否则容易聚集成团，不易溶解。配制的培养基容易出现块状，不易于果蝇的利用。酵母为活性物质，高温易失活。因此应当在培养基冷却到60℃左右时加入到培养基中，切勿将酵母粉加入到培养基中直接煮沸。2、果蝇的麻醉因为果蝇对乙醚很敏感，易麻醉，可以对作种的果蝇轻度麻醉（果蝇翅膀外展45℃角表示已死亡）。将培养瓶口与麻醉瓶口对接，使麻醉瓶位于上方，由于果蝇具有趋光性，所以会往上面的瓶子爬。待果蝇全部进入麻醉瓶后，在麻醉瓶的棉塞上滴2滴乙醚，并迅速用棉塞将麻醉瓶塞住。半分钟左右，果蝇被麻醉，活动缓慢。若麻醉过度，果蝇两翅展开且肢体僵硬，说明已致死；若麻醉过轻，则果蝇会马上醒过来，对实验造成影响。因此，必须抓紧时间将果蝇移人培养瓶中。可将培养瓶横卧，用干净毛笔把果蝇挑人，待果蝇清醒后，再竖立加塞，防止果蝇粘在培养基上。3、果蝇雌雄的分辨培养果蝇，关键是要准确分辨雌雄。如果按性梳和腹背板上的条纹数来分辨，往往效果不佳，一则由于果蝇的姿态不同，观察的角度不同。雄性的性梳不易观察到。另外，在分辨处女蝇雌雄时，由于果蝇刚刚羽化，腹背条纹不清，性梳也不易分辨。雄性果蝇在腹部下部有突起的交尾器，上有粗黑刚毛，借助光学显微镜一眼就能看出，而凭肉眼只能看见腹部下部有一小黑点；雌性在腹部末端有管状产卵管，没有黑点。三、实验材料野生型红眼黑腹果蝇，果蝇培养方法采用玉米一琼脂培养基：水100ml，琼脂1.0g，葡萄糖9g，玉米粉12g，酵母膏一团，丙酸4滴。四、实验步骤1、培养基的制作将3个干净的培养瓶和棉塞于高压锅内灭菌30min，待冷却至室温，倒入约2cm厚的未完全冷却的培养基，待培养基冷却凝固后如有水分，用酒精棉球将水分擦去，即可将果蝇转入培养。2、果蝇的扩大培养将麻醉好的15对果蝇分别平均放入3培养瓶中，置于25℃的恒温箱中培养9天，使果蝇的数目增加至100只左右，培养过程中应每隔三天观察一次，在第7天左右当观察有蛹出现时把亲本果蝇处理掉，观察培养基是否发霉、果蝇是否死亡等。若培养基发霉，应及时更换新培养基，以便实验顺利进行；若果蝇有死亡，应及时将尸体清除，防止尸体腐烂污染培养基。3、收集子一代果蝇当第7天将亲本处理掉后，看见有蛹出现，每天早上9:00，晚上7:00收集F1代。做2个新的培养基，将收集的F1代果蝇雌雄分开单独暂养。收集到所需数量即可开展下一步实验。4、果蝇的分瓶培养当收集到雌雄分别达到40只时，即可开展实验。灭菌9个培养瓶待用，在配置9个培养瓶所需要的培养基（见实验原理中培养基的制作，可多做一个培养瓶用以装剩下的亲本，以防实验失败备用）将雌雄果蝇麻醉好（见实验原理中果蝇的麻醉），在9个已经准备好的培养瓶上添上标签（实验类型，班级，时间等信息），在9个瓶中每瓶放入雌雄各4只果蝇，动作一定要迅速，防止麻醉后的果蝇苏醒后飞走。然后将9个培养瓶分别置于17℃、25℃和30℃的培养箱中培养七天左右，当看到有蛹和大量三龄幼虫，放飞亲代果蝇，继续培养子一代幼虫七天，每天晚上7:00数一次果蝇，将子一代果蝇麻醉并记录其数目。3、实验结果及分析1实验结果1、子一代果蝇数目记录表2、不同梯度的温度F1带数量及雌雄比例。温度雌雄1号瓶2号瓶3号瓶17℃雌性000雄性00017-25℃雌性212724雄性18222025℃雌性596070雄性62556030℃雌性554745雄性494244温度数目性别雌果蝇♀雄果蝇♂总和17℃00017℃提升25℃24204425℃635912230℃4945943、果蝇生活周期与温度的关系2结果分析①在三个温度中，25℃最适合果蝇的生长，子一代数目最多。低于或高于25℃，果蝇的生活周期都要变长，导致子一代数目减少，尤其17℃一组最明显。处于17℃的培养箱中的亲代果蝇，在培养时间为一个星期时，产生的幼虫极少。由于17℃的培养条件下卵到幼虫、幼虫到成虫的时间特别长，所以把亲代果蝇放飞后继续培养一个星期，只有21只蛹，没有成蝇的出现。见实验结果，我们可以看出17℃两周后还没出结果，而加温到25℃2天后即可出果蝇。②温度为17℃一组的培养基，在多次培养过程中都不同程度的长霉。查询相关资料后得知,当环境温度不适应果蝇生长时（温度低于18℃），培养基接种后的7天内特别容易长霉。而实验时所用的培养箱的温度大多数时间为17℃，所以多次出现长霉现象。且该培养箱中的多数培养瓶都长霉，对于实验结果存在一定影响。③子一代果蝇中，雌果蝇数目略多于雄果蝇，但幅度不是太大，雌雄性别比基本符合1:1，符合孟德尔比数，说明性别和其他性状一样受遗传物质的控制。④通过上述2个图可以看出，同一温度不同号数的瓶中的数量相差不大，差异不显著。温度周期果蝇17℃25℃30℃卵→幼虫10天6天5幼虫→成虫没计算4天4