植株磷素含量测定

植物体内全氮、磷、钾的测定一、实验原理作物体中的氮、磷、钾通过硫酸和H2O2消化，使有机氮化物转化成铵态氮，各种形态磷化物转化成磷酸，N、P、K均转变成可测的离子态（氮转化为NH4+，磷转化为H3PO4，钾为K+）。然后采用相应的方法分别测定。磷的测定原理（钒钼黄比色法）：在酸性条件下，溶液中的磷酸根与偏钒酸盐和钼酸盐作用形成黄色的钒钼酸盐。黄色深浅与溶液中磷浓度呈正比。此法要求酸度0.04—1.6N（以0.5—1.0N最好）；测磷浓度范围0—20mg/kg，比色波长460—490nm，磷浓度低时选用较短的波长，反之可选较长的波长。钾的测定原理（火焰光度法）：含钾溶液雾化后与可燃气体（如：汽化的汽油等）混合燃烧，其中的钾离子（基态）接受能量后，外层电子发生能级跃迁，呈激发态，由激发态变成基态过程中发射出特定波长的光线（称特征谱线）。单色器或滤光片将其分离出来，由光电池或光电管将特征谱线具有的光能转变为电流。用检流计测出光电流的强度。光电流大小与溶液中钾的浓度呈正比，通过与标准溶液光电流强度的比较求出待测液中钾的浓度。二、仪器与试剂仪器：分析天平（0.0001）、分光光度计、容量瓶（50ml）移液管（5、10、20ml）测P、K试剂：1．钒钼酸试剂：25.0克钼酸铵〔（NH4）2Mo7O2•4H2O〕溶于400ml水中，另取1.25克偏钒酸铵（NH4VO3）溶于300ml沸水中，冷却后加入250ml浓HNO3，冷却后，将钼酸铵溶液慢慢地混入偏钒酸铵溶液中，边混边搅拌，用水稀释至1升。2．2，4—二硝基酚指示剂：0.25克2，4—二硝基酚溶于100ml乙醇中。3．磷标准液：准确称取KH2PO4（1100C烘两小时）2.1968g溶于水，定容至1000ml，此为含磷500mg/L的磷标准液。取上液准确稀释10倍得到磷为50mg/L标准液，用于制作标准曲线。三、测定步骤植物样品的消化：称取磨细干样品0.1—0.2克(精确到0.0001克)放入100毫升消煮管内,加浓H2SO45毫升,使样品和浓H2SO4混匀，放入消化炉上加热，文火微沸5分钟，取出消煮管，冷却，加30%H2O25滴，温度升至200度再煮，30分钟后取下冷却再加30%H2O25滴，温度升至300度继续消煮（不能超过320度），至消化液清亮透明为止。如消化液未清亮，再加2滴H2O2煮沸5分钟，并除去多余H2O2。消煮完毕后，取出消煮管冷却，用少量蒸馏水，少量多次地将全部消化液洗入50毫升容量瓶内，冷却后，定容，同时作二个空白。此为待测液。磷的测定：吸取待测液20ml，放入50ml容量瓶中，加2，4—二硝酚指示剂2滴，用6NNaOH中和至刚现淡黄色，准确加入钒钼酸铵试剂10ml，摇匀用水定容，摇匀15分钟后比色，波长450nm，以空白液调节消光度为零。标准曲线绘制：先取7只50毫升容量瓶，用50mg/L磷标准溶液配制工作曲作。按下表吸取标准液，定容到50毫升容量瓶中，按上述步骤显色，即得0、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、15.0mg/LP的标准色阶曲线，然后进行比色。瓶号123456750mg/L磷标准液（ml）01.02.55.07.510.015.0磷浓度（mg/L）01.02.55.07.510.015.0式中：待测液P浓度mg/l：从标准曲线上查得磷浓度mg/l显色液体积：50ml分取倍数：消煮液体积/吸取消煮液体积W：植株样品烘干重（mg）106：由mg/l换算成g