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1三种中药对鸡球虫刺激鸡淋巴细胞分泌功能的影响学生：XXXX指导老师：XXXX摘要：目的观察商陆、白头翁和常山提取液对鸡淋巴细胞分泌的影响。方法取鸡脾、外周血淋巴细胞经子孢子刺激12h后随机分对照组、商陆组、白头翁和常山组，37℃培养12h，通过酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测上清液中干扰素-γ、白介素-2和一氧化氮合成酶的含量。结果在脾中：三种中药均对iNOS的分泌有很好的促进作用，且浓度越高效果越佳；干扰素除中浓度常山上升显著，高浓度下的商陆的无明显变化；三种药在各个浓度下对白介素-2的分泌影响并不显著，但在低浓度下常山对脾脏淋巴细胞分泌促进极显著。在外周血中：中剂量对iNOS的分泌为最好；对干扰素来说中浓度常山和高浓度商陆无明显影响而其他药物均有显著或及其显著的的抑制效果；中浓度下商陆白头翁促进效果显著外，三种药在各个浓度下对白介素-2的分泌影响并不显著。结论三种中药均对iNOS的分泌有很好的促进作用，且浓度越高效果越佳，在外周血中则以中剂量为最好；脾脏：低浓度下常山对促进白介素-2分泌；外周血：中浓度下商陆白头翁促进白介素-2分泌，其他均抑制；中低浓度商陆、白头翁，高浓度常山对脾淋巴细胞IFN-γ异常升高有缓释作用；中浓度三种药鸡高浓度白头翁、常山对外周血淋巴细胞IFN-γ异常降低有缓释作用。关键词：中药；细胞因子；子孢子ThreekindsofChineseherbalmedicineonchickenimmunecellsofchickencoccidiosisafterstimulationsecretionStudent:ChenBoHanInstructor:ShenHongAbstract：Objective:Observethepokeweed,Chinesebulbulanddichroaextractonchickenlymphocytesecretion.Method:Takechickenspleen,peripheralbloodlymphocytesthroughsporozoitestimulusafter12hrandompointsinthecontrolgroup,shanglu,Chinesebulbulanddichroagroup,37℃for12h,throughexperimentenzyme-linkedimmunosorbent(ELISA)respectivelytodetectthatthesupernatantfluidinterferongamma,interleukin2andthecontentofnitricoxidesynthase.Conclusion:Inspleen:threekindsoftraditionalChinesemedicine(TCM)onthesecretionofiNOShasaverygoodrole,andthehighertheconcentrationoftheeffectisbetter;Interferondichroarisesignificantly,inadditiontotheconcentrationofhighconcentrationsofpokeweedhasnoobviouschange;Threekindsofdrugsinvariousconcentrations,thereisnosignificanteffectonthesecretionofinterleukin-2,butinlowconcentrationsdichroaonspleenlymphocytesecretionpromotesignificantly.Inperipheralblood:forthebestdoseofiNOS2secretion;Dichroaforinterferoninconcentrationandhighconcentrationdoesnotaffectthepokeweedandweresignificantlyorotherdrugs,anditssignificantinhibitoryeffect;ConcentrationsinthepokeweedChinesebulbulpromotingeffectisremarkable,threekindsofdrugsinvariousconcentrations,thereisnosignificanteffectonthesecretionofinterleukin-2.Conclusion:ThreekindsoftraditionalChinesemedicine(TCM)onthesecretionofiNOShasaverygoodrole,andthehighertheconcentrationoftheeffectisbetter,adheredtothebestofdoseinperipheralblood;Thespleen:lowconcentrationsdichroatopromotethesecretionofinterleukin-2;Concentrationsinperipheralblood:pokeweedChinesebulbulpromotethesecretionofinterleukin-2,otherallinhibition;Lowconcentrationpokeweed,Chinesebulbul,highconcentrationofdichroaIFN-gammaanomaliesofspleenlymphocytesrisehasslow-releaseeffect;ConcentrationofthreekindsofmedicinechickenhighconcentrationofChinesebulbul,dichroaIFN-gammaanomaliesonperipheralbloodlymphocytesreducehavesustained-releaseeffect.Keyword:TraditionalChinesemedicine;cytokine;subspore目录1.引言………………………………………………………………………………………………41.1鸡球虫病概述…………………………………………………………………………………41.2淋巴细胞分泌功能……………………………………………………………………………41．2.1细胞因子的基本功能………………………………………………………………………41.2.1.1干扰素……………………………………………………………………………………41.2.1.2白介素……………………………………………………………………………………41.2.2化学因子一氧化氮合酶……………………………………………………………………51.3鸡球虫病的防治………………………………………………………………………………51.3．1中药商陆、白头翁、常山…………………………………………………………………51.3．1.1商陆………………………………………………………………………………………51.3．1.2白头翁……………………………………………………………………………………61.3．1.3常山………………………………………………………………………………………61.3.2中药对免疫功能的影响……………………………………………………………………62材料与方法………………………………………………………………………………………732.1材料……………………………………………………………………………………………72.1.1实验动物……………………………………………………………………………………72.1.2主要试剂……………………………………………………………………………………72.1.3主要仪器和耗材……………………………………………………………………………72.2方法……………………………………………………………………………………………72.2.1子孢子的制备………………………………………………………………………………72.2.2实验分组……………………………………………………………………………………82.2.3细胞因子的制备……………………………………………………………………………82.2.3.1外周血淋巴细胞的提取…………………………………………………………………82.2.3.2脾淋巴细胞细胞的制备…………………………………………………………………82.2.3.3实验前预处理……………………………………………………………………………82.2.4.1ELISA法检测iNOS含量测定……………………………………………………………82.2.4.2ELISA法检测IFN含量测定………………………………………………………………82.2.4.3ELISA法检测蛋白介素-2的含量测定…………………………………………………93.结果………………………………………………………………………………………………93.1中药对化学因子iNOS的分泌影响……………………………………………………………93.2中药对细胞因子IFN-γ的分泌影响…………………………………………………………103.3中药对细胞因子蛋白介素-2的分泌影响…………………………………………………104讨论……………………………………………………………………………………………10参考文献…………………………………………………………………………………………114第一部分文献综述1.1鸡球虫病概述[1]鸡球虫病是一种由一种或多种球虫的子孢子感染引起的急性流行性寄生虫病常见且危害严重，这种病会给生鸡的养殖带来极大的损失，一般以幼龄雏鸡和青年鸡为多发，而且此病的死亡率高达八成，即使在治愈之后仍会出现发育迟缓、增重减慢、产蛋量下降等诸多不良影响；不同的球虫，寄生部位也不一样，致病力也不相同，根据感染种类及成度的不同，症状可出现：肠壁增厚和肠道出血等病变；肠道点状出血和卡他性炎症；肠道的浆膜和粘膜上出现单个的、包含卵囊的斑块和严重感染时出现的散在或集中的斑点。[1]1.2淋巴细胞分泌功能1．2.1细胞因子的基本功能细胞因子是淋巴细胞受到抗原或抗原性物质刺激后释放出的一种用于调节和改善免疫系统及其应答的可溶性小分子多肽。淋巴细胞通过合成和分泌分别作用于自身和周边组织或通过体液传输作用于其他细胞来参与免疫应答与调节固有免疫；同时对其他细胞也有很大作用，例如促进造血功能等各种生命技能活性化、抑制毒性物质生成和部分细胞的增值等等；这些体现出了其功能多样、影响广泛、协同效果、拮抗效果等繁多复杂的作用虽然现在对细胞因子的了解知之甚少，但它的作用已经在治疗肿瘤、感染、炎症、造血功能障碍等各个方面起到了巨大的贡献，具有非常广阔的应用前景。1.2.1.1干扰素干扰素（IFN-γ）是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子一般分为三类，白细胞型（IFN-α）、成纤维细胞型（IFN–β），淋巴细胞型（IFN–γ），它并不直接杀伤或抑制病毒，但能通过细胞表面受体传递信息使细胞开始生产有抵抗、抑制甚至杀伤病毒作用的蛋白，从而扰乱病毒的复制；还可提高自然杀伤细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞的活性，从而起到免疫调节作用。[2]目前研究发现干扰素在防治寄生虫起到的作用在于抑制寄生虫在某一阶段或几个阶段的成长制造出免疫系统清除寄生虫的时间和增强淋巴细胞活性以杀死寄生虫这两方面1.2.1.2白介素白细胞介素，是一种在白细胞或免疫细胞之间相互作用的淋巴因子，它和血细胞生长因子相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素能够以传递信息，来调节免疫细胞，同时还能诱导T、B细胞激活、分化与免疫表达和增强炎症反应。51.2.2化学因子一氧化氮合酶产生