机能实验报告2

Ach对离体家兔小肠运动作用摘要：目的：观察乙酰胆碱对离体家兔小肠肠肌的影响和机制。方法：将离体小肠固定在离体小肠灌流装置里，在保证各影响因素不相互干扰的情况下,分别给予家兔离体肠肌标本生理盐水（Nacl）、Ach、阿托品、阿托品+乙酰胆碱刺激，完成每次刺激并出现明显现象后用38℃的台氏液冲洗肠肌标本，观察其收缩活动的特点并记录。结果：结果显示当滴加生理盐水（Nacl）刺激离体肠肌时，张力曲线没什么变化；当用乙酰胆碱刺激离体肠肌时，张力曲线则明显上升，且频率加快；当滴加阿托品刺激时，张力曲线明显下降，且频率减慢；当滴加乙酰胆碱加上阿托品刺激时，张力曲线变化较不规则。结论：乙酰胆碱（Ach）对离体家兔肠肌有增强其运动的作用，且作用于M受体。中文关键词：离体家兔小肠肠肌；乙酰胆碱；张力曲线Abstract：Objective:toobservetheacetylcholineontheinfluenceandmechanismofintestinalmuscleofrabbitsmallintestineinvitro.Methods:invitrosmallintestineinvitrointestinalperfusiondevicefixed,inguaranteeundertheconditionofeachinfluencefactordoesnotinterferewitheachother,invitrointestinalmusclespecimensweregiventherabbitsaline(Nacl),Ach,atropine,atropine+acetylcholinestimulation,completewith38℃aftereachstimulusandasignificantphenomenonofTaiwan'sfluidcolonicsmusclespecimensandobservethecharacteristicsofitscontractionactivitiesandrecord.Results:theresultsshowedthatwhenaddsaline(Nacl)stimulationinvitrointestinalmuscle,nothingchangetensioncurve;Whenusingtheacetylcholinestimulationinvitrointestinalmuscle,tensioncurvesareobviousrise,andthefrequencytospeedup;Whenaddatropinestimulation,tensioncurvedecreasedobviously,andslowfrequency;Whenaddtheacetylcholineandatropineon,tensioncurveisirregular.Conclusion:acetylcholine(Ach)oninvitrorabbitintestinalmusclehasenhancedtheroleofthemovement,andtheeffectsonMreceptor.[Keywords]：Isolatedrabbitintestinalmuscle;Acetylcholine；Tensioncurve.引言：消化道平滑肌与骨骼肌、心肌一样，具有肌肉组织共有的特性，如兴奋性、传导性和收缩性等。但消化道平滑肌兴奋性较低，收缩缓慢，富有伸展性，具有紧张性、自动节律性，对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等特点。给予离体肠肌以接近与在体情况的适宜环境，消化道平滑肌仍可保持良好的生理特性。Ach能激动M受体，而阿托品能阻断M受体。1.材料和方法1,1材料:家兔、HSS-1（B）型恒温浴槽、台氏溶液、生理盐水、Ach、阿托品、通气机、超级恒温器、张力换能器、生物信号采集处理系统；1.2方法：（1）实验装置准备和仪器参数设置:把台式液在恒温器中加热并保持到38℃左右，然后在麦氏浴槽中加入一定量的38℃左右的台式液。通气管接95%O2+5%CO2混合气体。用螺丝夹调节气体管道的气体流量，调节至浴槽中气体一个个逸出为止。换能器输出线接微机生物信号处理系统，设置好相关仪器参数；（2）离体家兔十二指肠标本制作:取家兔一只，用木槌击其头部至晕，立即剖开腹腔，找到十二指肠，取出十二指肠，置于冰冷的氧饱和的台氏液培养皿中，沿肠壁除去肠系膜，用5ml注射器取台氏液将肠内容物冲洗干净，然后将十二指肠剪成1-2cm数小段，换以新鲜，通入95%氧气和5%二氧化碳的混合气体的台氏液备用。把十二指肠管置于有台氏液的培养皿中，然后穿线结扎2cmz左右肠肌的两端，然后把通混合气体的机制放在浴槽中一会；（3）标本固定：肠管一端连线系于浴槽固定钩上，然后放入38℃HSS-1（B）型恒温浴槽中，再将肠管另一端系结在张力换能器的悬梁壁上，调节肌张力1.87g，在其中加入20ml的38℃的台氏液；（4）实验观察：离体肠管在浴槽中稳定适当时间后，记录一段正常张力曲线。然后滴加0.2ml的生理盐水，观察并记录其曲线张力，反应稳定换液冲洗，以此方法依次做如表1.的添加实验；（5）数据的记录：将实验所得的一组曲线进行选择，将曲线变化明显且能够较好反应实验结果的曲线进行编辑，并记录收缩频率、幅度等值，做成文档保存并进行拷贝。2.结果:在正常情况下，离体肠肌收缩的幅度、频率、张力、时间及间隔都相对稳定，波形没有明显的变化;加入生理盐水后，离体肠肌张力曲线没有什么变化;加入Ach后，离体肠肌张力曲线明显上升，收缩幅度减小，频率加快;加入阿托品后，离体肠肌张力曲线下降，振幅减小，频率减慢;加入乙酰胆碱和阿托品混合液后，离体肠肌张力曲线变化不规则。2.1生理盐水对离体家兔肠肌运动的影响2.2乙酰胆碱对离体家兔肠肌运动的影响2.3阿托品对离体家兔肠肌运动的影响2.4阿托品5个波后加乙酰胆碱对离体家兔肠肌运动的影响表1.乙酰胆碱对离体家兔小肠运动作用的原始数据记录影响因素剂量（ml)对照处理后收缩幅度（g）收缩频率（次数/每分钟）紧张性收缩是否加强或减弱（舒张最小值是否改变）收缩节律是否规则收缩幅度（g）收缩频率（次数/每分钟）紧张性收缩是否加强或减弱（舒张最小值是否改变）收缩节律是否规则0.9%NaCl0.20.19527否是0.18329否是1:100000乙酰胆碱0.20.23529否是0.67834加强否0.5mg/1ml阿托品0.20.71433否是0.36631减弱否先加0.5mg/1ml阿托品0.1ml+5个波形后再加入1:100000乙酰胆碱0.1ml0.20.5536否是0.45834先减弱后不变否3.讨论3.1在恒温通气的情况下，离体小肠平滑肌能自发地有节律地进行收缩，其收缩的幅度、频率、张力、时间及间隔都相对稳定，波形没有明显的变化。在此条件下，肠段生活的环境与在体内的环境相似，所以它的表现正常；3.2乙酰胆碱（Ach）对离体肠运动的影响：Ach是一种神经递质，能特异性的作用于各类胆碱能受体。Ach可明显兴奋胃肠道平滑肌，使其收缩幅度、张力、蠕动增加。其作用机制是：Ach作用于十二指肠M受体，使平滑肌Ca2+通道开放，Ca2+内流，Ca2+胞浆浓度增加，平滑肌收缩加快加强。表现为收缩力变大，频率增强；3.3加入阿托品，曲线快速下降，收缩频率变慢，幅度减小，离体小肠活动减弱。肠道主要受副交感神经支配，小肠有一个复杂的壁内神经丛，它的终末神经元属于胆碱能，主要与运动有关，可被阿托品阻断，从而使运动受到抑制。阿托品对胆碱受体都有高度亲和力，都可以和受体产生可逆性结合，产生竞争性拮抗作用，阿托品与受体结合后，对节后胆碱能神经支配的效应细胞上的Ｍ受体有阻断作用，所以平滑肌收缩频率和收缩张力都减小。M-胆碱受体拮抗剂，能阻断节后胆碱能神经所支配的效应器细胞上的M受体，故可对坑Ach及拟胆碱药的M样作用。3.4因为阿托品阻碍了Ach与M受体的作用，导致肠肌收缩的变化不规律。在实验的过程中，在滴加Ach和阿托品混合液时，离体肠肌的张力曲线没有明显的变化且不规律，有可能是因为加入的Ach和阿托品滴加顺序问题，使得两种液体没有很好的混合。4.结论：一定浓度的Ach可以促进肠肌的运动，而且促进的作用是作用于M受体。5.参考文献5.1[1]陆源、林国华、杨午鸣.机能学实验教程.第2版.北京科学出版社.2010.160～1625.2[2]张志雄.生理学.第1版.上海.科学技术出版社，2009.105～111【注】：因电脑死机导致小组实验操作数据丢失导致实验失败，故小组各自分散进入别的小组进行实验操作。本实验报告数据来自于第八组。附加实验.：表2.各种因素对离体家兔小肠运动作用的原始数据记录影响因素剂量（ml)对照处理后收缩幅度（g）收缩频率（次数/每分钟）紧张性收缩是否加强或减弱（舒张最小值是否改变）收缩节律是否规则收缩幅度（g）收缩频率（次数/每分钟）紧张性收缩是否加强或减弱（舒张最小值是否改变）收缩节律是否规则0.9%NaCl加入0.20.22518否是0.222518否是1:10000肾上腺素加入0.20.22518否是-0.03718减弱否1mol/L盐酸加入0.20.22518否是0.00019减弱否1mol/L氢氧化钠加入0.20.22518否是0.073/加强否室温台氏液（注意停止恒温泵）全部换成室温等量台氏液0.22518否是0.11918减弱否缺空气（停止空气泵）37℃~38℃的等量台氏液0.22518否是0.11015先加强后减弱否1.从收缩的幅度越来越小可以看出细胞的兴奋性越来越小，也可能是台氏液冲洗肠肌标本不充分，导致药品液的混合，从而刺激作用不明显；2.适量浓度的肾上腺素和盐酸有抑制肠肌细胞兴奋的作用，适量浓度的氢氧化钠有促进其兴奋的作用。