微生物不确定度评定-lu

微生物不确定度评定辽宁出入境检验检疫局卢行安2011-7-282微生物不确定度用途CNAS要求客户要求非标方法要求在限量附近时质量控制方法的关键控制点2011-7-283内容微生物不确定度用途微生物不确定度适用范围和微生物不确定度评定的有关政策要求国内外食品微生物不确定度评定的情况食品微生物不确定度评定考虑的主要分量2011-7-284食品微生物不确定度评定范围定量检测MPN法不确定度的定义不能直接用于定性检测结果2011-7-285政策要求CNAS测量不确定度的政策–CNAS注意到测量不确定度概念应用的时间不长。因此CNAS将按照“目标明确、重要先行、循序渐进”的原则，逐步展开测量不确定度的评定和应用。–检测实验室应有能力对每一项有数值要求的测量结果进行测量不确定度评定。–检测实验室必须建立测量不确定度的评定程序。–由于某些检测方法的性质，决定了无法从计量学和统计学角度对测量不确定度进行有效而严格的评定，这时至少应通过分析方法，列出各主要的不确定度分量，并作出合理的评定。2011-7-286APLAC在测试领域有关测量不确定度的政策－如果测试结果为非数字结果（如合格/不合格，阳性/阴性或基于视觉或触觉或其他定性检测），则不需对不确定度或其它变量进行评估，但鼓励实验室去了解测试结果可能产生的所有变量。–在对微生物测量不确定度评定方面，微生物测试有四种主要类型：常规定量测试、MPN法、定性测试和专家测试如医药测试等。各种不确定度的评定方法是用于常规定量测试的。2011-7-287APLAC在测试领域有关测量不确定度的政策–泊松分布法和可信区间方法可能明显低估了不确定度，因为它没有将不确定度的所有贡献量都计算在内。微生物在液体中的分布可以使用泊松分布描述，但测试方法中其它不确定组分不包括在内。一些被确定的组分如稀释倍数和平板读数的一致性就不能用泊松分布来描述。–在EURACHEMGUIDE中介绍的一些方法可能也适用于微生物不确定度的评定。按照ISO5725测得的“中间精密度”，认为包含了大部分但非全部的主要不确定度分量。在这个方法中的不确定度的贡献量不包括诸如不同批次培养基的性能、培养箱条件的差异等，可以通过其他统计手段检测到的因素。2011-7-288APLAC在测试领域有关测量不确定度的政策–平板测试的结果不是正态分布属于偏态分布。这些数据首先要转换成对数，使分布接近正态分布。–在测试结果小于10cfu的情况下，可能接近于正态分布，结果可能不需要对数转换，在这种特殊范围内，将需要精密度的估计。实验室从事单次分析，此时可以采用泊松分布法评估不确定度。–与方法偏差相关的任何不确定度和定量微生物测试无关，因为这种测试是经验测试，其结果依赖于培养基、培养时间和特定温度。2011-7-289APLAC在测试领域有关测量不确定度的政策–在MPN分析中传统做法是通过MCCRADY表来获得测试结果和95%的置信率。建立在统计和概率上的数据不用考虑不确定度的所有贡献。鼓励实验室识别不寻常的阳性管组合并拒绝这样的结果。如何能有效的操作，在这种情况下从MPN表中引用的置信率进行不确定度评估是合理的。2011-7-2810EURACHEM/EA有关测量不确定度的政策–针对测量不确定度评定，微生物检测属于非严格性、非度量学和非统计学一类。因此单独采用重复性和再现性数据来评定不确定度是合适的方法，但是理想上还应考虑偏离（如来自能力验证的结果）2011-7-2811EURACHEM/EA有关测量不确定度的政策–应能识别出不确定度的各个分量，并可以它们进行控制，从而可以评价对对结果变动的贡献。一些分量（如吸液、称重、稀释的影响）可以比较很容易被测出，并经过计算得出，这些分量对于总的不确定度可以忽略不计。其他组成部分（如样品的稳定性和样品的制备）既不能直接测量出来也不能以统计学的方式进行评价，但他们的重要性也值得考虑。2011-7-2812EURACHEM/EA有关测量不确定度的政策–认可的微生物检测实验室在采样时最好能了解微生物在样品基质中的分布情况。但是，在不确定度评定时，不推荐把这种分量计算在内，除非委托人有要求。主要是因为在样品基质中微生物分布所造成的不确定度并不属于实验室工作范畴之内，而且每个个体样品也可能不一样，同时检测方法考虑到样品的不均匀性而规定了样品的取样量。2011-7-2813EURACHEM/EA有关测量不确定度的政策–不确定度的定义不能直接用于定性检测结果，比如那些检测有或无的试验和鉴别属性的试验。不过个别变异的来源如试剂性能的一致等都应该被识别并被很好的控制。另外，当检出限是该方法是否适用的指标时，使用接种量来决定检测限，要对接种量的不确定度进行计算和评定。实验室也应该清楚他们进行的定性实验中的假阳性和假阴性结果发生的几率。2011-7-2814国内外食品微生物不确定度评定方法新西兰实验室认可组织（原TELARC，现称IANZ）,于1994年在国际实验室认可组织（ILAC）大会所发表的微生物测量不确定度评定（EstimationofUncertaintyofMeasurementinMicrobiologicalAnalysis.）NMKL（2002）MeasurementofuncertaintyinmicrobiologicalexaminationoffoodsSeppoI.NiemeläUNCERTAINTYOFQUANTITATIVEDETERMINATIONSDERIVEDCULTIVATIONOFMICROORGANISMS.ADVISORYCOMMISSIONFORMETROLOGYHelsinki2003Finland.2011-7-2815ISO/TS19036（2006）GuidelinesfortheestimationofmeasurementuncertaintyforquantitativedeterminationsUncertaintyMeasurementonQuantitativeExaminationDerivedbyPetrifilmTMECplatemethodonEscherichiacoliinMincedMeatKokCheongPat2011-7-2816微生物测试的主要影响因素取样样品量样品种类目标微生物在样品中的分布样品中含有的微生物数量水平样品稳定性倍比稀释读数2011-7-2817取样偏差第二次取样/第一稀释度剩余随机误差偏差基质实验室样品取样结果2011-7-2818样品量样品重量的不确定评定可以通过不确定传播的方式来获得，既称量的天平、量筒等。多数认为样品的重量因素不是主要的结果不确定度的来源。2011-7-2819样品种类由于样品的种类不同，即基质不同，同一方法的重复性和再现性的参数（标准偏差等）也不一样。ISO/PDTS19036数据显示：菌落总数水方法重复性标准偏差（Sr）=0.09方法再现性标准偏差（SR）=0.10牛奶Sr=0.06SR=0.12奶粉Sr=0.04SR=0.05即食加工的肉Sr=0.17SR=0.33鱼Sr=0.29SR=0.51。根据AOAC990.12PETRIFILM测试片检测菌落总数方法的数据，面粉Sr=0.225SR=0.246调味料Sr=0.274SR=0.303蔬菜Sr=0.310SR=0.454虾Sr=0.540SR=0.615。2011-7-2820样品种类以上数据可以看出样品的种类对结果的不确定度的贡献不同，可能由于–样品中微生物的分布不同–样品混匀的难易程度不同等因素导致的不确定度结果的不同；因而在对测试结果的不确定度评定时应根据不同的样品种类来进行评定。2011-7-2821微生物在样品中的分布2011-7-2822样品中微生物的含量（数量）大部分测量结果的不确定度评定方法不适用于微生物含量较低的情况，因为当微生物含量较低时，接近方法的检出限，准确测量比较困难，样品中微生物的分布也是未知，测试结果的重复性和再现性很难测量，其测量不确定度没有简单的统一方法来评定。2011-7-2823样品稳定性样品的相对稳定是微生物测量不确定度评定的基础，只有稳定的样品才可以获得方法重复性和再现性的一些参数，从而对结果的不确定度进行评定。2011-7-2824倍比稀释第一个稀释度菌落总数100CFU，第二个稀释度菌落总数17CFU，采用卡方(X2)检验:19.4)(101010;)(221212212212122112CCCCXVVCCVVCVVCX2011-7-2825倍比稀释假定样品中的微生物数量呈泊松分布，对不同的两个连续的稀释倍数的结果采用卡方检验，结果卡方值大于4，表明不同稀释倍数间结果差异较大。NMKLrepeng201201