微生物与免疫实验指导

动物微生物与免疫课程实验指导怀化职业技术学院动物科技系王湘2016年5月前言动物微生物与免疫是畜牧兽医、兽医、兽药技术、动物防疫检疫专业的一门重要的专业基础课，是为动物畜禽传染病、兽医卫生检验、兽医临床基础、家畜内科学、家畜外科学、家畜寄生虫病等课程提供必要的理论知识和操作技能。在各相关专业中占有重要的地位。为了提高教学水平，反映出本学科更具科学性、先进性和实用性的实验内容，根据教学大纲的要求和课程设置，同时根据本校教学实验条件，在参阅中外相关文献，学习兄弟院校的教学经验和资料的基础上，编写了本实验指导教材。本实验指导旨在理论与实际相结合，使学生将理性知识与感性认识有机地结合，将书本知识用于实验，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识和学生分析问题和解决问题的能力。目录微生物与免疫实验守则................................................................................................1微生物实验室常用仪器的使用与保养........................................................................3微生物实验基本操作技术............................................................................................7实验一显微镜油镜的使用及细菌形态的观察..................................................11实验二细菌标本片的制备及染色......................................................................13实验三常用培养基的制备..................................................................................15实验四细菌的分离培养及培养形状的观察......................................................17实验五细菌的生化试验......................................................................................21实验六细菌的药物敏感试验（纸片法）技术..................................................24实验七外界环境微生物检查..............................................................................26实验八饲料中微生物的检查..............................................................................27实验九实验动物接种技术..................................................................................29实验十病毒鸡胚接种技术..................................................................................31实验十一病毒的血凝和血凝抑制试验..................................................................33实验十二凝集试验..................................................................................................35实验十三沉淀试验法..............................................................................................37实验十四酶联免疫吸附试验..................................................................................38实验十五抗猪瘟血清的制备..................................................................................40实验十六真菌的检验技术......................................................................................411微生物与免疫实验守则一、实验指导说明1、性质与作用：动物微生物是高等农业职业院校畜牧兽医专业的一门岗位素质课程。对应岗位是：动物疫病诊断、检疫、检测技术等实训室技术岗位。作用是：研究微生物与畜禽的关系，并利用微生物学与免疫学的知识和技能来诊断、防治畜禽的疾病与人畜共患疾病，让学生具备畜牧兽医行业高等技术应用型专门人才所必须的畜禽疾病诊断、检测、预防等专业知识和熟练的职业专门技术能力，培养学生具备相应职业关键技术能力和职业道德。在教学过程中，使学生要掌握动物微生物与免疫所必须的专项实践技能和综合职业能力，基本掌握细菌类疾病、病毒类疾病、其他微生物实训室检验技术等。同时，在教学中对学生职业道德进行影响，注意敬业精神、吃苦耐劳、尽心钻研等方面的教育影响，并形成良好职业道德和敬业精神。2、课程内涵：本课程的内涵是通过过程性的训练及考核，通过形成性联系及渐进式教学，使学生不但掌握专业知识而且能够有效把握技能的知识背景及相应的产业历史，为学生在系统掌握本课程专业技能操作的同时，初步具有应对复杂问题及进行有效迁移以及创造的能力。使学生掌握动物微生物课程所必须的专业理论知识，专业实践能力和综合职业能力，掌握主要动物的疾病实训室诊断技术，可以独立的开展动物疫病的实训室检验，具有较强的工作岗位适应能力、分析和解决实际问题的能力以及创新意识和职业道德意识。经过本课程的学习及培养后学生应具有认真负责、踏实肯干，严谨求实的工作态度及独立思考、自主创业的精神。二、实验进行程序与要求1、预习学生在课前应认真预习实验指导以及教材有关章节，必须对该次实验的目的要求、实验内容、基本原理和操作方法有一定的了解。2、讲解教师对该实验内容的安排及注意事项进行讲解，让学生有充分的时间按实验指导的要求进行独立操作与观察。3、独立操作与观察除个别实验分组进行外，一般由学生个人独立进行操作和观察。在实验中要按实验指导认真操作，仔细观察，作好记录。4、示教每次的实验都备有示教内容，其目的是帮助学生了解某些实验中的难点，扩大在实验课有限时间内获得更多感性知识的机会。5、作业实验报告必须强调科学性，实事求是地记录、分析、综合。在实验结束时呈2交。学生应认真阅读教师批改后的实验报告，不断提高实验质量。6、小结实验结束后，由师生共同小结本次实验的主要收获及今后应注意的问题。三、实验规则和注意事项1、实验人员必须穿戴工作衣帽、手套、口罩等防护措施，防止病原微生物感染。2、上实验课时必须携带实验指导、实验报告纸及绘图文具等，按规定座位入座。3、实验前，要认真检查所用仪器、药品是否完好、齐备，如有缺损应及时向教师报告，自己不得随意调换标本、仪器等。没有得到教师的允许，不能动用实验室其它非本次实验所用的仪器设备。4、实验时要遵守纪律。有问题时举手提问，严禁彼此谈笑喧哗，不准在实验室吃食和会客。5、实验时要遵守实验操作规程，严格按照教师的安排和实验指导的要求进行。使用显微镜检查非永久片时，要特别小心。防止染料或试剂沾污镜头和镜台，不要用高级显微镜观察非永久片。操作要正规，观察要认真仔细，及时完成实验报告。6、要爱护仪器、标本和器材设备，注意节约实验材料、药品和水电。如有损坏器材应立即报告，并主动登记、说明情况。凡是有化学药品的试剂和溶液瓶上，必须贴上标签，注明名称、成份、浓度、配制日期。7、实验结束后，应清理实验台面，所有液体废物、酸类、染料等，应倒在废物缸内，不能倒在水槽中。实验动物的尸体等应严格消毒后掩埋。认真清理好仪器、药品及其他用品，放回原处。值日生要负责清扫地面，收拾实验用品，处理垃圾，关好水、电、门窗后再离开。8、爱护实验用品，损坏的玻璃器皿等器材，应做好详细记录，人为因素损坏的应按相应规定赔偿。3微生物实验室常用仪器的使用与保养掌握常用仪器的使用是进行微生物实验的基础。在实验室中不按规定操作仪器，可能会造成很大的损失，直接影响到教学和科研的进展，严重时甚至可能造成人员伤亡。因此，有必要对某些常用仪器的使用方法和注意事项予以介绍。1、超净工作台超净工作台主要用于进行无菌操作，见图1。（1）使用方法①依次打开电源开关及工作开关，紫外灯照射20min，开启鼓风机运转10min，方可进行实验操作。②将实验需要的器材拜访在超净工作台台面上，灭过菌的材料如培养基放在左侧，工具放在右侧。③将紫外灯切换到照明灯（鼓风机保持运转），打开玻璃门（玻璃门开启幅度不能过高，以不超过下巴为宜），手臂进入操作台前先点燃酒精灯，再用75%的酒精棉球擦净工作面，并对手进行消毒。④操作时，应在中央无菌区域进行（尽量不要讲话），严格进行无菌操作。⑤操作完毕后熄灭酒精灯，清理工作台面。实验结束后，开启紫外灯照射台面15min后，关闭工作台开关及电源开关，将左右物品归并带走废弃物。（2）注意事项①超净工作台内严禁长时间存放物品。②紫外线对皮肤和视网膜由很强的刺激性，避免紫外线直射，单层玻璃即可有效阻挡紫外线。③操作过程应严格遵守无菌操作规范。④避免频繁开关紫外灯管和照明灯管，延长灯管使用寿命。⑤定期检查空气滤网等滤材，老化严重应更换。2、恒温培养箱电热恒温箱主要用于细菌的培养，见图2。（1）使用方法①先检查电源电压，与培养箱电压一致时可直接插上电源，如不一致，可使用变压器变压。②插上电源插头，开启电源开关，绿色指示灯明亮，表示电源接通。然后调节温度旋钮，选择所需要的温度，红色指示灯亮，表示电热丝已在发热，箱内升温。③当温度升至所需温度是，红、绿灯交替明亮即为所需恒温。将培养物放入箱内，关好箱门。④至设定培养时间后，取出培养物观察。（2）注意事项①温箱必须放置在干燥平稳处。②使用时，随时注意显示温度是否与所需温度相同。③除了取放培养物开启箱门外，尽量减少开启次数，以免影响恒温。④工作室内隔板放置试验材料不宜过重，底板为散热板，切勿放置其他物品。4图1超净工作台图2电热恒温培养箱3、电热干燥箱电热干燥箱主要用于玻璃器皿和金属制品等的干热灭菌。（1）使用方法①先检查电源电压，在接上电源。②将待灭菌物品放入干燥箱中。③将温度调至所需温度后，打开电源开关，当门边的保温指示灯亮时，表明箱内温度达到所需温度，维持一定时间后（通常160℃、2h）关闭电源。当干燥箱中的温度下降至60℃以下时方可取出灭菌的物品。④若仅需达到干烤的目的，可一直开启活塞通气孔，温度只需60℃即可。（2）注意事项①干燥箱中的物品不宜堆放太过拥挤，要留有一定的空隙，以利于热空气的流通，各部分均匀受热，灭菌彻底。②加热升温时应将鼓风机打开，使各部分受热均匀。③橡胶物品不能使用干燥箱进行灭菌。④灭菌完毕后不可马上打开干燥箱，以免箱内物品着火或者玻璃器皿炸裂，必须待箱内温度降至60℃以下后，才能打开干燥箱。⑤干燥过程中如遇箱内物品着火冒烟，应立即切断电源，关闭排气小孔，用湿毛巾堵塞箱门四周，杜绝空气进入，火则熄灭，待温度降至60℃以下时，方可拿出物品。4、高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅亦称为高压灭菌锅，主要用于不怕潮湿的物品