微生物实验答案整理

1.在进行高压蒸汽灭菌时，是否只要灭菌锅压力表到达所需的值时锅内就能获得所需的灭菌温度？为什么？不是。灭菌温度是通过水和水蒸汽的压力提高锅内温度实现的；当灭菌锅内的空气未排净或仅排出一半时，虽然压力表指示的数值与排尽空气时相同，但不能、满足水蒸汽—温度函数关系，所以锅内温度并未达到所需值。2.在手提式高压灭菌锅的盖上有哪些部件？它们各起什么作用？部件：排气阀、安全阀和压力表。作用：排气阀：点燃煤气灯，在水煮沸后，排出锅内空气以蒸汽代替，及灭菌后，压力降至表头零压后打开排气阀，消除锅体内外压力差。安全阀：正常情况下，当压力超值时会自动放汽而降压与避险。压力表：指示压力显示。3.高压蒸汽灭菌过的操作有哪几个步骤？每一步骤应注意哪些问题？步骤：加水、装料、加盖、排气、升压、保压、降压、取料和灭菌后处理。注意：加水：在放入灭菌料桶前，加水至与隔架圈同样高度为止。若锅体内无水或水量不够均会在灭菌时引起重大事故。装料：放置装有培养基的器皿时，防止其内液体倾倒或溢出。瓶塞不应贴靠料桶壁，以防锅体降压时产生的冷凝水沾湿棉塞，或渗透棉塞进入培养基等灭菌物品中。加盖：采用对角方式同时两两拧紧锅体与锅盖间的螺栓，使六只螺栓拧紧的锅盖各方受力均衡并使锅体完全密闭。在灭菌锅加热时应及时开启排气阀。排气：待空气排尽后，才可关闭排气阀继续加热。升压：确定锅内空气是否排尽，十分重要。排尽后即可关闭排气阀。保压：当锅内压力到达所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。降压：达到灭菌时间后，立即关闭热源，锅内压力降至表头零压后，在打开排气阀。否则锅内压力突然下降，使瓶装培养基或其他液体因压力瞬间下降而发生复沸腾，造成事故。取料：由于取料时，锅内温度及蒸汽很烫，故取料时一定要防止手及其他部位的皮肤烫伤。灭菌后处理：灭菌完毕，必须倒掉锅内剩余水并擦干，以免日久铝质装料通被腐蚀。4.革兰氏染色的原理是什么？该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫色。5.在革兰式染色试验中，为什么会出现假阳性和假阴性？如何避免？革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而误认为是革兰氏阴性菌。如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片之厚薄、脱色时玻片晃动的快慢及乙醇用量多少等因素影响，难以严格规定。一般可用已知革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌做练习，以掌握脱色时间。当要确证一个未知菌的革兰氏反应时，应同时做一张已知革兰氏阳性菌和阴性菌的混合涂片，以资对照。6.在微生物学实验中，常用于配制固体培养基的凝固剂是什么？它有哪些特性？如何使用？琼脂。特性：化学成分单一且无营养价值，不影响培养基的本身的营养物质配比和菌种生长；遇热可融化冷却即呈凝固态，且透明度高黏着力强耐加压灭菌能力强，利于实验操作；分解性罕见，不会影响实验结果；常用浓度1%~2%，经济节约。使用：在液体培养基中加入适量的琼脂（1%~2%）即可。7.当物镜由低倍转到油镜时，随着放大倍数的增加，视野的亮度是增加还是减弱？应如何调节？减弱。可以增加辅助光源的亮度来调整视野亮度。或调节聚光镜。8.血球计数板计数时，计数室内如有气泡会对结果产生怎样的影响？如何避免产生气泡？将影响菌悬液的随机分布而使计数产生误差。吸取菌悬液滴加在盖玻片与计数板的边缘缝隙处，让菌液沿盖玻片与计数板间的缝隙渗入计数室以避免产生气泡。9.在革兰式染色试验中，不经复染这一步，能否区别革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌？为什么？可以。因为脱色后G+是紫色的而G-就已经没有颜色了，这时，其实已经可以区分了，但是如果不经复染的话，镜检时看不清G-的细胞形态，但可以区分。10.简述从环境中分离具有水解淀粉酶活性的芽孢杆菌的主要步骤。1，样本采集：采集周围有花草的成颗粒状的离地表10cm左右的土壤2，目的菌种的富集：①取15g土壤加入250ml烧杯中，再加入40ml的无菌水振荡10min制成土壤混悬液，用无菌移液管吸取10ml土壤悬液加入富集培养基中，置于37℃的恒温培养箱中培养24h②在85~90℃水浴锅中加热10min，杀灭菌体使芽孢得到富集3，稀释涂布梯度稀释：取5支加入4ml无菌水的试管，在一号试管中加入上述菌液1ml混匀，此时菌液稀释10倍；取一号试管中菌液1ml加入二号试管中混匀，此时菌液稀释10^-2倍；其余试管依次类推涂布平板：用一支新的无菌枪头，由低浓度土壤稀释液中吸取100ml对号较均匀地倒入已标记好稀释浓度的选择培养基上（在此之前各试管要摇匀），用灼烧冷却后的无菌玻璃棒涂匀。每个浓度做1个平板。在37℃下恒温培养24h芽孢杆菌的菌落扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶。4，淀粉水解酶的鉴定待菌落长出之后，滴加碘液，在菌落周围有透明圈证明芽孢杆菌产淀粉酶。5，革兰氏染色，镜检芽孢杆菌经革兰氏染色后成紫色6，复筛：酶活力的测定用游标卡尺分别测量透明圈和菌落的直径。根据两者比值大小初步确定淀粉酶活性的高低。筛出酶活力最高的菌种。11.利用加压蒸汽对培养基进行灭菌时，有何不利影响？如何防止？灭菌可能某些不耐热的物质受到破坏，如使糖类形成氨基糖、焦糖。还可能使磷酸盐、碳酸盐与某些阳离子结合形成难溶性复合物而生成沉淀。生产上可以把糖类物质用连消的方法，可以减少有害物质生成。培养基中加入螯合剂，可以减少沉淀的生成。12.V.P试验的目的和原理分别是什么？目的：了解鉴别不同肠杆菌科各菌属的乙酰甲基甲醇试验原理，并掌握其操作方法。原理：某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧，氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。13.简述超净工作台在使用时主要的操作步骤。1，检查超净工作台操作环境如环境温度、空气质量、电源灯，登记使用信息；2，将实验需要的器材摆在工作台台面上，灭过菌的培养基等放在左侧，工具放在右侧；3，拉下玻璃挡板，开启紫外灯照射30min进行表面灭菌；4，30min后关闭紫外灯，打开风机调节至适当风量，打开照明灯；5，打开玻璃挡板，用75%酒精擦拭双手和台面；6，点燃酒精灯，操作过程严格遵循无菌操作规范；7，操作完成后将实验器材清理出无菌操作台，75%酒精擦拭台面，关闭照明、风机和挡板；8，开启紫外灯照射15min后关闭紫外灯