实验技术习题

1《分子生物学常用实验技术》课堂练习题参考答案学号：姓名：一、填空题。1.在用SDS分离DNA时，要注意SDS浓度，0.1%和1%的SDS作用是不同的，前者，后者。2.SDS是一种提取DNA时常用的阴离子去污剂，它可以溶解膜蛋白和脂肪，使细胞膜和核膜破裂，使核小体和核糖体解聚，释放出。它还可以使蛋白质变性沉淀，也能抑制。3.在分离DNA时，需要带手套操作，是因为。4.用酚-氯仿抽提DNA时，通常在氯仿或酚-氯仿中加入少许异戊醇，这是因为有机溶剂异戊醇可以。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白质相和下层有机溶剂相维持稳定。5.在分离DNA时，要用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸等，其目的是：。6.在DNA分离过程中，造成DNA分子断裂的因素很多，主要有：、和。7.在分离DNA时，常用酸变性、碱变性、热变性和来去除蛋白质。8.用乙醇沉淀DNA的原理是：。9.用乙醇沉淀DNA时，通常在DNA溶液中加入单价阳离子，如氯化钠和乙酸钠，其目的是。10.通常可在3种温度下保存DNA：4～5℃、-20℃和-70℃，其中以℃为好。11.浓缩DNA的方法通常有：包埋吸水法、蒸发法、膜过滤法和。12.碱裂解法和清亮裂解法是分离质粒的两种常用方法，二者的原理不同，前者是根据，后者是根据。13.在技术中，DNA限制性酶切片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素薄膜上，然后与放射性标记的DNA探针杂交。14.SSC是氯化钠和柠檬酸钠组成的试剂，其中前者作用是：，后者的作用是：。15.在southern杂交中，DNA转移的速度取决于、和。16.在重蒸酚中加入1%的8-羟基喹啉及少量β-巯基乙醇，不仅可以防止酚氧化，还可以抑制2活性以及。17.RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜（尼龙膜）上，同一放射性DNA探针杂交的技术称__。18.根据Northern杂交结果可以说明__。19.cDNA技术是进行真核基因克隆的一种通用方法，因为它可以用为模板。20.将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称为一个，源于同一批RNA制备物的克隆群则构建成了一个。21.受体细胞的感受态是的生理状态。22.感受态细胞是可以诱导的，诱导方法有、和等。23.人工感受态细胞的大肠杆菌在温度为℃时吸附DNA，在℃时摄入DNA。24.为了提高重组DNA分子对E.coli的转化效率，通常可采取和。25.环状质粒的转化效率很低，通常是线性双链DNA转化效率的。26.SalⅠ是识别6个核苷酸的酶，其识别切割的理论值是每个碱基就有一个切点，但在哺乳动物中大约300Kb个碱基才有一个切点。27.重组DNA技术常用的限制性内切核酸酶可识别某些特异碱基序列，具有结构。28.产生平末端的方法通常有：、和。29.在酶切反应管加完各种反应物后，要离心2秒，其目的是：和。30.连接酶是一类用于核酸分子连接形成的核酸合成酶，有DNA连接酶和RNA连接酶之分。31.为了防止载体DNA自身环化，可用脱去双链DNA的。32.用于克隆的DNA片段，在质量上要求：1）稳定性，保持其分子构型；2）低蛋白质含量；3）纯度要高，不含；4）不含可透析的小分子，如酒精等。33.构建基因组文库时连接方法主要是；而构建cDNA文库，可用或。34.克隆一个编码某种蛋白质的基因必须考虑其表达的三个基本条件：、和。3二、判断题。1.氯霉素扩增DNA时，加氯霉素的时间是重要的，因为加得太早，菌数不够，加人时间过迟，菌龄过老，容易自溶。（）2.在DNA贮存液中加一滴三氯甲烷，可防止真茵的污染。（）3.DNA、RNA在pH8.5的TAE缓冲夜中电泳时，由正极向负极移动。（）4.作为一个基因克隆的载体，主要由药物抗性基因、供插入外源DNA片段的多克隆位点和外源片段插入筛选标志这3大部分构成。（）5.用pUC质粒作克隆载体克隆DNA时，人们用显色法筛选重组质粒，即在有IPTG和X-gal的平板上，显示白色的菌落含有原始质粒，而显示蓝色的菌落含有重组质粒。（）6.在克隆载体pUC系列中，完整的lacZ基因提供了一个外源基因插入的筛选标记，蓝色的转化菌落通常表明克隆是失败的。（）7.在克隆载体pBSK质粒中，利用完整的lacZ基因作为筛选标记，白色的转化菌落表明重组质粒肯定插入外源片段。（）8.X-gal显色反应的基本原理是使载体与受体互补的失活。（）9.碱法和煮沸法分离质粒DNA的原理是不同的。（）10.根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。（）11.一旦有了一套已知序列的基因组克隆，通过从文库中获得覆盖目的突变基因所在基因组区的所有克隆，就可以进行染色体步移。（）12.核酸杂交的原理是根据分子间杂交。（）13.在Northern杂交中，为了防止RNA形成部分发夹结构，影响迁移率，所以要用变性缓冲液进行电泳。（）14.用限制性内切核酸酶BglⅡ（识别位点是A↓GATCT）酶切载体DNA，用BamHⅠ（识别位点是G↓GATCC）酶切供体DNA，可以直接通过粘性末端进行连接。（）15.不匹配的粘性末端可以通过部分填补或补平后进行连接。（）16.单克隆抗体是淋巴细胞和瘤细胞杂交后形成的单个杂交瘤细胞经无性繁殖而生特异性抗体。（）17.基因组学强调从基因组的整体而不是单个基因的角度把握生物体遗传变异的规律。（）18.利用足够数量的STS标签，可确定所有DNA大片段在染色体或基因组中的位置。（）19.clonecontig法的原理是首先用酸水解法把待测基因组降解为数10万碱基对以上的片段，再分别对各片段进行测序。（）20.靶标鸟枪法首先根据染色体上已知基因或遗传标签的位置来确定部分DNA片段的排列顺序，再逐步确定各片段在染色体上的相对位置。（）4三、单项选择题。1.乙醇沉淀DNA时，下列何种长度的核苷酸不能被沉淀？_______A、10bp；B、100bp；C、200bp；D、1000bp。2.用碱法分离质粒DNA的基本原理是：_______A、染色体DNA断裂成碎片；B、染色体DNA分子量大，不能释放；C、染色体DNA变性后来不及复性；D、染色体DNA未与蛋白质分开而沉淀。3.Southern杂交可检测_______：A、目的基因的表达丰度B、基因组中目的基因的存在C、蛋白质表达D、目的基因是否表达4.蛋白质双向电泳中，_______决定了SDS-蛋白质复合物在凝胶电泳中的迁移率。A、等电点B、相对分子量C、空间结构D、电荷量5.粘末端连接法，不仅操作简单，而且_______A、产生新切点；B、易于回收外源片段；C、载体不易环化；D、影响外源基因表达。6.下面哪一种不是产生限制性内切酶星号活性的主要原因：_______A、酶切反应体系中酶浓度过低；B、甘油含量过高；C、酶切反应体系中含有有机溶剂；D、含有非镁离子的二价阳离子。7.关于cDNA的最正确的提法是：()A、同mRNA互补的单链DNA；B、同mRNA互补的双链DNA；C、以mRNA为模板合成的双链DNA；D、以上都正确。8.在分离mRNA的溶液中，Mg2+离子的浓度不能低于0.5mmol/L，因为低了_______A、mRNA会降解；B、mRNA会沉淀；C、核搪体解体；D、mRNA会变性。9.关于Ⅱ类限制性内切酶的作用，下列不正确的是：_______A、识别序列长度一般为4-6bp；B、识别序列通常具有回文结构；C、识别和切割双链DNA分子；D、只能切割非甲基化序列。10.有关PCR的描述下列哪项不正确？_______A、是一种酶促反应；B、引物决定了扩增的特异性；C、扩增的对象是DNA序列；D、扩增的对象可以是氨基酸。11.PCR试验的特异性主要取决于：_______A、DNA聚合酶的种类；B、反应体系中模板DNA的量；C、引物序列的长度和结构；D、PCRbuffer中的镁离子浓度12.蓝白斑试验筛选时，加入IPTG的作用是：_______A、诱导ω肽的合成；B、作为酶作用的底物；C、诱导α肽的合成；D、作为显色反应指示剂。13.基因敲除（knockout）方法主要用来阐明：_______A、基因的结构；B、基因的调控；C、基因的表达；D、基因的功能。514._________利用单链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA，从而阻断体内靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。A、RNA干扰技术；B、原位杂交技术；C、RACE技术；D、点突变技术。四、名词解释。1.载体：2.限制性核酸内切酶：3.cDNA：互补DNA，指以mRNA为模板反转录得到的DNA。4.聚合酶链反应（polymerasechainreaction,PCR）：5.RT-PCR(reversetranscriptionPCR)：以mRNA为模板先逆转录合成cDNA，再以cDNA为模板进行聚合酶链式反应。6.Real-timePCR：7.cDNA文库（cDNAlibrary）：8.基因文库（genelibrary）：9.定点突变技术（site-directedmutagensis）：10.酵母单杂交系统（yeastone-hybridsystem）：提示：该系统目的：用于鉴定DNA和蛋白质之间的相互作用。11.酵母双杂交系统（yeasttwo-hybridsystem）：提示：该系统目的：鉴定反式作用因子之间的相互作用对真核基因转录调控的影响。12.凝胶阻滞试验（electrophorticmobilityshiftassay,EMSA;gelretardation）：13.RACE（RapidamplificationofcDNAEnd）技术：14.RNA干扰（RNAinterference，RNAi）：15.核酸杂交，southernblotting，Northernblotting，westernblotting16.转化17.DNA芯片18.基因组学19.功能基因组学20.比较基因组学（comparativegenomics）21.蛋白质组学22.转录谱（expressionprofiling）23.表达序列标签（expressedsequencetag,EST）6五、简答题：1.在分离DNA过程中，为什么苯酚和氯仿联合使用？即使不联合使用也要在苯酚抽提后用氯仿再抽提一次？提示：原因是酚和水有一定程度的互溶，所以单独使用酚抽提DNA，最终不能除去酚，残留的酚会使限制性核酸内切酶、Taq酶和连接酶变性，影响后续试验。氯仿也是蛋白质变性剂，它不与水互溶，但它与苯酚互溶。这样，两者联合使用，可让DNA溶液中没有残留酚。2.比较说明SDS-PAGE（SDS-聚丙烯胺凝胶电泳）与琼脂糖凝胶电泳的分离原理和特点。提示：SDS-PAGE：1）SDS作用；2）分子筛；3）主要用于蛋白质的定性分析、分离。琼脂糖凝胶电泳：1）凝胶的孔径；2）用于蛋白质和核酸电泳，双链DNA的电泳迁移率主要与其分子大小有关。3.简述PCR扩增的原理及过程。提示：PCR技术的基本原理：在模板、引物、4种dNTP和赖耐热DNA聚合酶存在的条件下，按照碱基互补配对的原则，特异扩增DNA区段。PCR的过程：变性--退火--延伸，三个基本步骤循环。4.什么是蓝白斑筛选？为什么蓝白斑筛选法也会有假阳性？提示：该法是利用组织化学的方法，通过插入失活来筛选重组体。原因是：β-半乳糖苷酶的N端不是必须的，对其修饰不会影响酶的活性或α肽的互补性。如果插入的外源片断引起α肽ORF的移码，或外源片断含有终止密码使得α肽不表达，就会形成白色斑。如果插入的片断不含终止密码、是3的倍数，仍然会形成蓝色斑。5.酵母单杂交的原理。很多真核转录调控因子有两个相互独立的结构域组成：DNA结合域（DNAbindingdomain,BD）和转录激活域(activationdomain,AD)。BD能和特定的基因的启动子区结合，但不能接获基因的转录。酵母单杂交是一种研究DNA和蛋白质互相作用的系统，运用基因重组技术将特定顺式作用元件构建到基本启动子上游，把报告基因连接到基本启动子下游。将待测转录因子cD