尼康显微镜操作规范

NikonTi-U荧光倒置显微镜操作规范操作前须知：使用荧光显微镜的荧光观察功能需提前填写预约记录，使用后填写使用记录。普通观察切片和细胞无需登记（只有荧光观察或荧光拍照才需要打开汞灯，明场、相差图像和观察细胞不需要打开汞灯）。填写预约记录是为避免频繁开、关汞灯，延长汞灯寿命，当操作者看到有人预约在自己后面时间不长时，可以不用关汞灯。（汞灯打开后40分钟后才能关：汞灯关闭后无论多急，40分钟后才能开）。彩色相机的开机:1.首先确认电源连接正常，打开外置灯箱电源控制器开关（2-2）；2.打开机身底座左侧白色（正方形）卤素灯开关（2-3），通过调节机身左侧开关下方的旋钮（3-1）控制灯泡亮度确认显微镜处于工作状态。把透射照明器中的“NCB11滤色片”和“D滤色片”（3-2）插入光路中以保证色彩真实。明场图像观察：1.先把显微镜的物镜转盘转到低倍物镜档位，把准备观察的切片（切片的方向应是盖玻片朝下）放到显微镜载物台上；2.聚光镜（5-1）的选择：（一）聚光镜对应空白挡位A（二）聚光镜孔径光栏：将聚光镜的孔径值设定在物镜数值孔径值的60%—80%之间即可3.通过目镜观察调节显微镜视野内的亮度，达到最佳位置图像最清晰；4.将显微镜机座右侧的分光旋钮旋到“L”（相机端口）的位置上，通过计算机进行图像采集保存。相差图像观察：1.先把显微镜的物镜转盘转到低倍物镜档位，把准备观察的样本放到显微镜载物台上；2.聚光镜（5-1）的选择：（一）聚光镜根据物镜选择对应的相差环（注：4倍物镜对应PHL，10倍、20倍物镜对应PH1，40倍物镜对应PH2）（二）可根据物镜倍数的提升结合镜下效果来调整聚光镜上的孔径光阑的数值3.通过目镜观察调节显微镜视野内的亮度，达到最佳位置图像最清晰。20,40倍物镜上有较正环，可配合使用获得清晰图像；4.将显微镜机座右侧的分光旋钮旋到“L”（相机端口）的位置上，通过计算机进行图像采集保存。荧光图像观察（黑白相机）：1.打开外置荧光电源控制器开关，使汞灯开始工作；2.通过明场的卤素灯照明状态下找到样本的焦点平面，关闭卤素灯开关或把聚光镜对准C暗档，选择相应的荧光滤色镜，荧光光闸推至“O”的状态；UV：紫外，Ex：330-380nm；Em：＞420nmG：红色，观察绿色荧光，Ex：515-565nm；Em：595-705nmB：蓝色，观察绿色荧光，Ex：465-495nm；Em：515-555nm3.通过目镜观察微调节显微镜视野内的清晰度并找寻最佳的位置；4.将显微镜机座右侧的分光旋钮旋到“R”（相机端口）的位置上，通过计算机进行图像采集保存。软件操作（如有问题，可问询吕明）：1.Aquire选项下选择相应的相机，彩色相机或黑白相机；2.单击右键，调出DS-QIMCSettings,AnnotationsandMeasurements等工具以调节分辨率、曝光时间等；3.为方便之后加标尺，选择相应的物镜放大倍数；4.背景颜色不正需做白平衡；5.黑白相机拍摄荧光照片可添加伪彩，并将不同颜色通道的图片merge到一起；6.细胞计数，圈定面积的大小以及设定长度的计算等。使用注意事项：1.关显微镜前需将光源调到最小；2.调节物镜时旋转物镜转换器而非直接旋转物镜；3.不要将灰尘、指纹等留在镜头上，镜头、滤色片上的灰尘将影响视场中的图像，如果镜头变脏，用擦镜纸蘸酒精轻拭；4.汞灯的开启时间最少要达到40分钟以上，关闭后再次开启中间的间隔时间应在40分钟以上（以便使灯箱充分散热）；5.显微镜上端的灯柱上滤光片的使用：“D”模板推进光路里，“ND”模板可以根据镜下亮度选择推进或拉出（其内置ND2和ND16两个减光片），“NCB11”模块是日光平衡片，是纠正卤素灯泡原始的颜色，是必须推进光路里的，“GIF”是绿色干涉片，是调整镜下视野为绿色背景的，可以自行选择；6.聚光镜前段的两个白色的旋钮是来调整控制科勒照明中心位置的，实验者不须使用；7.显微镜机身前端有一个1X/1.5X的光学变倍，中间变倍：1.5x，显微镜最大放大倍数（1.5×10×40=600倍）不管使用哪个档位，一定要推到位；8.采集系统开启顺序遵照先硬件后软件的原则，关机遵照先软件后硬件的原则。通过计算机进行图像采集时，打开相应的CCD开关，待开关上的绿色指示灯不再闪烁时再开软件；9.荧光控制器和显微镜荧光装置之间是通过光纤进行连接的，切勿将其弯折；10.及时填写预约和使用记录。