孢子分离方法

1.孢子分离法是利用食用菌的有性孢子或无性孢子，萌发成菌丝，获得细菌种的一种方法。按分离时挑取孢子的数目不同，又分为单孢子分离法和多孢子分离法两种。蘑菇、草菇等由于孢子没有性的区别，采用单孢子分离获得纯菌种，有结实能力，而其它食用菌如香菇、银耳、黑木耳等由于孢子有性别之分，单孢子分离得到的菌丝不能结实，所以，只在育种上采用，生产上很少采用。多孢子分离法，是把许多孢子接种于同一培养基上，让它们萌发，自然交配而获得纯种，操作简单易学，生产上经常采用。由于采集孢子的方法不同又分为如下几种：（1）采集器孢子弹射法采集孢子的装置可用玻璃钟罩或玻璃漏斗做成。蘑菇和香菇常用这种方法采集孢子。具体做法是：把玻璃钟罩或玻璃漏斗，放在一个垫有几层纱布的瓷盘上，内放培养皿和不锈钢支架（漏斗内也可倒挂铁丝代支架），上端通气孔用棉花塞住，然后用二层大纱布将整个装置包起来，高压灭菌后；移入无菌室备用。分离时把选好的种菇（八、九分成熟），切去菌柄基部送入无菌室，用0.1％～0.2％的升汞溶液或75％的酒精表面消毒1～2分钟后，放在无菌水中漂洗，除去表面药液，再用灭菌纱布揩手，插到不锈钢支架上或铁丝构上，静置1～2天，菌褶上的孢子大量散落到培养皿内，形成一层粉末状孢子印时，取下种菇，用灭菌的注射器，吸取3～5毫升无菌水，注入盛有孢子的培养皿中，轻轻搅动，便孢子均匀地悬浮于水上，再将注射器插上针头，吸取沉于底部的饱满孢子，注l～2滴悬液于试管斜面培养基，并使其均匀分布于培养基表面。或用接种针挑取少量的孢子直接在斜面培养基上划线。待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发快，生长良好的菌落，移接到新的斜面培养基上培养。（2）三角瓶约悬法银耳、黑木耳常用此法采集孢子。兹以银耳为例，介绍其具体做法如下：选朵大、雪白、无病虫害的新鲜银耳，作为种耳，经无菌水漂洗种耳数次后，用无菌吸水纸把种耳表面的水分吸干。再把种耳切成一小块，以入瓶后不会碰到瓶壁为度，挂在用火焰灭菌过的小金属丝钩（或不锈钢钩）上，迅速悬挂在三角瓶内，注意勿使种耳磁到培养基，以防杂菌污染。塞上棉塞，放在20～25℃条件下，经l～2天，就可看到培养基上形成一个雾状孢子印。此时，以无菌操作把悬挂瓶内的耳片取出，再塞上棉塞，移到20～25℃的室中培养，经2～3天，培养基表面就会出现许多乳白色糊状的白落，就是银耳的分生孢子。采用孢子分离，要注意控制培养的温度。因为食用菌孢子的弹射与培养的温度有密切关系，如双孢蘑菇孢子弹射最适温度是14～18℃，如培养在25℃条件下，孢子就很难弹出。一般食用菌孢子弹射的最适温度比菌丝体生长的最适温度为低，而与子实体发育的最适温度大致相同。如香菇孢子弹射的最适温度为12～18℃，银耳为20～24℃，黑木耳为20～26℃，平菇为13～20℃。此外，孢子采集还可采用菌褶涂抹法，适用于野外采种，方法简便，效果也好，即选成熟的种菇，用接种针直接插入褶片间，轻轻涂抹褶片表面尚未弹射的孢子，然后在试管培养基上接种。