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实验十邻二氮菲分光光度法测定铁一、实验目的1.了解分光光度计的结构和使用方法;2.掌握用吸光光度法测定铁的原理和方法。二、实验原理在可见光区进行吸光光度测量,如果被测组分本身很浅,或者无色,那么就要用显色剂与其反应,生成有色化合物,然后进行测量。用光度法测定铁,显色剂种类较多,邻二氮菲光度法测铁,由于灵敏度较高,稳定性较好,干扰容易消除,因而目前普遍采用的一种测定方法。在pH为2~9的溶液中,邻二氮菲与Fe2+反应生成稳定的橙红色络合物:Fe2++3NNNN3Fe2+在pH=2~9范围内,该反应能够迅速完成,生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰,摩尔吸收系数为1.1×104,反应十分灵敏,Fe2+浓度与吸光度符合光吸收定律,适合于微量铁的测定。实验中,采用pH=4.5-5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度;采用盐酸羟胺还原标准储备液及样品溶液中的Fe3+并防止测定过程中Fe2+被空气氧化。三、试剂和仪器试剂:1.00×10-3ug/mL的铁标液、1mol/L的NaAc溶液、100g/L的盐酸羟胺溶液、1mol/L的NaAc溶液。仪器:50mL容量瓶、2.00mL、10mL、25.00mL吸量管、通用滴定管、玻璃比色皿、分光光度计四、实验过程1、吸收曲线的绘制用吸量管吸取10mL1.00×10-3ug/mL的铁标准溶液于50mL容量瓶中,加入1ml100g/L的盐酸羟胺溶液,摇匀,再加入2mL1.5g/L邻二氮菲溶液、5mL1mol/L的NaAc溶液,以蒸馏水稀释至刻度,摇匀。放置十分钟。在可见光分光光度计上,用1cm的比色皿,以蒸馏水为参比溶液,从450nm至550nm每改变10nm测定一次吸光度。绘制A~λ吸收曲线。找出最大吸收波长。2、标准曲线的绘制标准溶液及样品溶液的配制:编号0123456(补血盐)10μg/mL标准铁溶液0.00ml2.00ml4.00ml6.00ml8.00ml10.00ml5.00mL100g/L盐酸羟胺溶液1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.5g/L邻二氮菲溶液2.00ml2.00ml2.00ml2.00ml2.00ml2.00ml2.00mlNaAC缓冲溶液5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml说明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度并摇匀。放置10min.在选定最大吸收波长处,用1cm比色皿,以0号溶液作为参比溶液,分别测定1至5号溶液的吸光度,绘制标准曲线。并在最大吸收波长处测定未知样品的吸光度,根据吸光度找出相应的铁含量。五、实验数据和结果表1吸收曲线的绘制(蒸馏水作参比)波长λ/nm吸光度/A4500.0654600.0714700.0774800.0794900.0815000.0845020.0855040.0865060.0875080.0875100.0875120.0875140.0865160.0855180.0835200.0805300.0645400.0435500.0264404604805005205405600.020.030.040.050.060.070.080.09Aλ图1吸收曲线表1吸收曲线的绘制(试剂空白作参比)波长λ/nm吸光度/A4500.0634600.0684700.0744800.0764900.0785000.0815020.0825040.0835060.0835080.0845100.0845120.0835140.0825160.0815180.0805200.0765300.0605400.0405500.0234404604805005205405600.020.030.040.050.060.070.080.09Aλ图2吸收曲线从吸收曲线图1可以看出邻二氮菲-亚铁配合物在波长510nm处吸光度最大,因此测定铁时宜用波长为510nm。表2标准曲线的绘制及铁含量测定编号12345补血盐铁的浓度/μg·mL-10.40.81.21.62.01.575吸光度/A0.0790.1620.2450.3220.4040.3170.20.40.60.81.01.21.41.61.82.02.20.050.100.150.200.250.300.350.400.45ACFe3+/μg/LR=0.99991A=-6E-4+0.2025CFe3+图3标准曲线从该曲线的线性方程可以算出未知液中铁的含量为1.575μg·mL-1,0.5002g补血盐含铁量为78.75μg,即补血盐中铁的质量分数为0.016%。六实验指导要点1.比色皿在换装不同浓度的溶液时,必须用待测的溶液润洗至少三次。2.比色皿放入分光光度计样品室钱,必须用吸收纸将表面擦拭干净。3.在换用不同波长测吸光度时必须重新调节透射比为100%。4.主要试剂使用说明100g·L-1盐酸羟胺溶液:保证将溶液中的三价铁离子全部还原成二价的铁离子。1.5g·L-1邻二氮菲溶液:进行显色,在pH2~9的溶液中,邻二氮菲和Fe2+可以生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen)32+,然后用分光光度法测量溶液中铁的含量。1mol·L-1乙酸钠溶液:一是缓冲溶液的作用,保证溶液在合适的酸度范围内,使二价铁粒子不被氧化成三价。二是保证邻二氮菲可以和Fe2+生成稳定的橙红色络合物。
本文标题:实验10邻二氮菲分光光度法测铁
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