实验五蛋黄中卵磷脂的提取及鉴定

实验五蛋黄中卵磷脂的提取及鉴定【实验目的】1．掌握从动物中提取有效成分的一般原理和方法。2．熟悉从蛋黄中提取卵磷脂的操作。3．了解卵磷脂水解后的产物，巩固对卵磷脂组成结构的认识。【实验原理】蛋黄过滤残渣（蛋白质、脑磷脂）乙醇溶液蛋白质卵磷脂脑磷脂脂肪脂肪卵磷脂油状物蒸去乙醇乙醇提取氯仿溶液脂肪卵磷脂卵磷脂脂肪丙酮油状物氯仿【实验步骤】1．卵磷脂的提取（1）取1个熟的鸡蛋黄，置于研钵中研细，加入15mL95％乙醇溶液，研磨，搅拌均匀。减压过滤，收集滤液。将漏斗的残渣移入研钵内，加15mL95％乙醇溶液，研磨，过滤(滤液应完全透明)，将两次滤液合并于蒸发皿内。（2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇，至干，得到黄色油状物。（3）冷却后，加入2mL～3mL氯仿，搅拌使油状物溶解。（4）在搅拌下慢慢加入10mL～15mL丙酮，即有卵磷脂析出，搅动使其成团粘附于玻棒上，溶液倒入回收瓶内。2．卵磺脂的水解及其组成鉴定（1）卵磺脂的水解取一支干净试管，加入提取的卵磷脂和5mL10％氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热10min，并用玻棒搅拌，使卵磷脂水解。冷却后，在玻璃漏斗中用棉花过滤，得滤液（供以下检查用）。（2）脂肪酸的检查取棉花上沉淀少许，加5mL水，搅拌，有无泡沫生成？过滤，得滤液，以浓硝酸酸化后加入数滴10％醋酸铅溶液，观察有何现象?（3）甘油的检查取小试管一支，加入1滴5％硫酸铜溶液，2滴10％氢氧化钠溶液，振摇，有氢氧化铜沉淀生成。加入水解液，沉淀溶解后，得深蓝色甘油铜溶液。（4）胆碱的检查取1mL滤液，滴加浓硫酸中和(以蓝色石蕊试纸检查)，加克劳特试剂1滴，有砖红色沉淀生成。（5）磷酸的检查取一支干净试管，加入10滴滤液和5滴95%乙醇溶液，用硝酸酸化，加1mL钼酸铵试剂，观察有何现象产生？最后直接用火加热5min～10min，观察有无黄色磷钼酸铵沉淀生成？注意事项乙醇、氯仿、丙酮用量一定要控制好思考题加丙酮之前为何要加少量的氯仿？