大孔树脂在两性霉素B原料药纯化工艺中的应用研究

大孔树脂在两性霉素B原料药纯化工艺中的应用研究摘要通过考察多种型号树脂对两性霉素B原料药中杂质的吸附效果，筛选出几种对两性霉素B原料药中杂质有选择吸附性的树脂，然后时这几种树脂的吸附条件进行研究，确定了30倍树脂和500mm：601Tlrn柱径比的最佳吸附条件。最后，利用不同极性树脂对两性霉素B原料药中杂质的吸附效果的差异性，研究不同树脂混合的最佳比例，结果发现在树脂M一1：M一2为3．6：6．4时，两性霉素B原料药中总杂质和最大单一杂质量下降最明显。关键词两性霉素B大孔树脂吸附两性霉素B为多烯类抗真菌药物，临床上用于治疗深部真菌引起的内脏或全身感染。随着医疗水平的提高，器官移植和肿瘤切除等重大手术越来越普遍，真菌深部感染的发生率也随之上升。武汉东康源科技有限公司是专业生产两性霉素B原料药及其制剂注射用两性霉素B和注射用两性霉素B脂质体的企业，其中注射用两性霉素B脂质体是国内独家生产品种。为进一步提升产品质量，本研究利用不同极性的树脂n对两性霉素B原料药中杂质的选择吸附性对两性霉素B进行纯化，有效降低了两性霉素B原料药中的相关物质含量，同时提高了产品收率。1.材料和仪器各型号大孔树脂口；两性霉素B原料药(武汉东康源科技有限公司生产)；600mm×50mll'l层析柱；高效液相色谱仪(Agilent1100)；YZ156恒流泵；磁力搅拌器；恒温水浴锅；N，N．二甲基甲酰胺、乙醇、甲醇、丙酮等(均为工业级试剂)。2.实验与结果2．1单个树脂筛选根据两性霉素B的性质及生产需要进行用于杂质吸附的单个树脂型号筛选研究：先对文献报道杂质吸附效果好的树脂进行静态筛选，然后用通用方法对初步筛选出的20余种树脂进行预处理并用常用树脂柱参数进行过柱实验(表1)，确定了对两性霉素B原料药中不同杂质吸附效果好的几种树脂型号。从表1可以看出，经过M．1或M一2树脂吸附后的两性霉素B原料药中的总杂质含量均降低了约2％，最大单一杂质含量也明显下降。因此，用大孔树脂吸附两性霉素B原料药中的杂质可行且效果显著。2．2最佳柱径比及树脂倍数确定2．2．1柱径比筛选选择柱径比分别为500mm：201TUTI、500mnq：30mm、500mlTl：40rnnl、500mm：50mm、5001TnTI：60mm和500mm：70mm的M．2树脂柱，在同等树脂倍数、上样温度、pH和过滤速率条件下动态过柱，考察经树脂吸附后的两性霉素B原料药中的总杂质含量下降的百分数，最终择优选择的最佳柱径比为500mm：60mm(表2)。2．2．2树脂倍数筛选同等条件下，分别单独在吸附效果较好的M一2树脂柱中加入10、20、30和40倍产品量的大孔树脂，根据杂质下降的实验结果选定吸附效果最佳的树脂倍数，然后用更小的等分法进行同等条件下的实验，实验结果见表3和表4从实验数据可以看出，30倍产品量的树脂为最佳杂质吸附树脂倍数。继续用30倍产品量的树脂进行4组重现性杂质吸附实验，实验结果见表5。通过数据对比可以看出，30倍产品量的最佳树脂倍数和500mm：60mm的最佳柱径比的确定能进一步优14化树脂对两性霉素B原料药中的杂质吸附效果。2．3混合树脂组合及其比例的筛选各种实验结果都表明，树脂对两性杂质的吸附效果明显，但不同型号的树脂吸附的杂质种类不尽相同。因此，利用不同型号树脂对两性霉素B原料药中杂质的选择吸附性，用蠕动泵控制树脂柱中溶液的添加速率，在30倍产品量的混合树脂和500mm：60rnn'l的柱径比条件下进行混合树脂对两性霉素B原料药中杂质的吸附实验，结果发现混合树脂M．1+M．2、M．3+M．4、M一5+M一6的吸附效果较好(表6)。从表6可以看出，M．1+M．2树脂组合的吸附效果最佳，故在30倍产品量的混合树脂和500mm-60rnlTl的柱径比条件下进一步研究M．1和M．2两种树脂在以不同比例混合时对两性霉素B原料药中杂质的吸附效果。实验结果(表7)表明，在各吸附条件基本恒定的情况下，当树脂混合比例为M．1：M．2为4i6时，其吸附两性霉素B原料药中杂质的效果较优。继续在M．1：M．2为4：6的比例周围进行细等分比例实验，研究吸附两性霉素B原料药中杂质效果最优的M-1和M．2两种树脂的混合比。实验结果(表8菱明，在M-1：M一2为3．6：6．4时，混合树脂对两性霉素B原料药中杂质的吸附效果最好，总杂质含量下降3．30％、最大单一杂质含量下降0．82％，较其它比例的混合树脂的杂质吸附效果都更显著。3结语本研究依据不同极性的大孔树脂的选择吸附性，探讨了其在两性霉素B原料药纯化工艺中的应用效果。经深入研究不同极性树脂对两性霉素B原料药中杂质的特异性吸附作用，将不同型号的树脂按最佳比例混合，以便有针对性、有选择性地吸附两性霉素B原料药中的杂质。本研究方法可显著降低两性霉素B原料药中的相关物质、进一步提高两性霉素B原料药的质量，同时也能避免常规大孔树脂应用中存在的吸附周期长、中间过程控制麻烦、洗脱难和树脂重利用率低等问题。