大蒜素对肉鸡生产性能及消化道酶活性的影响

1大蒜素对肉鸡生产性能及消化道酶活性的影响摘要:选取1日龄135羽AA鸡,随机分成3组,每组3个重复,每个重复15只鸡。第一组为对照组，饲喂基础日粮；第二组为抗生素组，在基础日粮中添加50mg/kg洛克沙胂和750mg/kg10%金霉素；第三组为试验组，在基础日粮中添加160mg/kg大蒜素。分别于21，42日龄测定肉鸡十二指肠内容物淀粉酶、脂肪酶、总蛋白酶的活力，并且计算肉鸡的日增重，料重比等生产性能。试验结果表明：在21日龄和42日龄时，大蒜素组的平均体重和平均日增重均高于对照组，料重比均低于对照组，并且低于抗生素组；在21日龄和42日龄时，大蒜素组淀粉酶活力较对照组提高了122.87%和68.07%，脂肪酶活力较对照组提高了89.99%和50.00%，总蛋白酶活力提高了10.29%和1.70%，这说明大蒜素对提高肉鸡生产性能有显著的作用，同时大蒜素具有显著提高十二指肠内容物的脂肪酶和淀粉酶的活力，对总蛋白酶活力影响较小。关键词：肉鸡;大蒜素;生产性能;淀粉酶;脂肪酶;总蛋白酶自从20世纪中叶抗生素在饲料中广泛使用以来，使很多传染病的死亡率有了大幅度的下降，为临床治疗开辟了一条新的途径，对畜牧业的发展起到了巨大的推动作用，但其负面效应也日趋明显，如：抗生素的大量使用会使畜禽产生抗药性和耐药性，以及抗生素在畜禽体内的残留直接威胁人类的健康[1]。因此开发天然无害的植物和矿物类且具有抗生素作用的添加剂已经成为热点。大蒜素作为一种中草药添加剂，因为其含有各种营养物质,微量元素和维生素,并且使用时不存在中毒问题,对于动物保健和提高生产性能有显著的作用因而倍受人们的关注。大蒜素是对多年生宿根草本百合科植物大蒜（alliumsativum）中主要成分的总称,是大蒜的提取液或合成物,是一种广谱抗菌药[1],大蒜素的分子式为C6H10S3,具有强烈的刺激味和蒜所特有的辛辣味,对动物有明显的诱食作用[2],在体内有杀菌消炎,降血压,降血脂,抑制血小板积聚,减少冠状动脉硬化,抑制体内N-亚硝胺合成,防癌,治癌,抗病毒等多种功能。大蒜素用于医药对呼吸道,消化道,脑膜炎,肠道疾病有效率达80%-95%。大蒜素还用于兽药,农药,食品添加剂等,在畜禽、水产和一些特种养殖动物中作为杀菌剂,调解剂,解毒剂,调味剂,动物保健增产剂及产品改善剂等被广泛的使用2并且效果显著。莫棣华、袁志柱[3]等试验结果表明在试验鸡添加大蒜素，可显著提高肉鸡日增重，降低料重比，改善鸡肉风味；贾卫斌王文斌等[4]在鲫鱼饵料中添加大蒜素，可提高鲫鱼的日增重和饲料报酬；任培桃[5]在生长肥育猪饲料中添加5%大蒜素能增强猪的食欲，提高增重5%以上。大量试验证明了大蒜素有提高畜禽生产性能的作用，但到目前为止关于大蒜素的作用机理的研究报道却很少，本是试验就是对大蒜素作为饲料添加剂替代抗生素对肉鸡生产能提高的验证，以及通过大蒜素对不同日龄肉鸡消化道酶活性影响的研究来初步探讨大蒜素的作用机理。1材料与方法1．1材料1．1．1试验动物健康的1日龄AA肉仔鸡，购于江苏新沂远大畜禽有限公司。1.1.2试验地点饲养试验地点：安徽科技学院畜牧科技园试验室工作地点：安徽科技学院分析测试中心1．1．3药品、试剂和仪器1.大蒜素(25%）：山东济南大华畜牧发展有限公司生产2.洛克沙胂(98.5%):浙江福原兽药有限公司3.金霉素(10%):内蒙古金河兽药厂4.淀粉酶测试盒：上海科欣生物技术研究所生产5.脂肪酶测试盒：南京建成生物工程研究所生产6.钨酸钠:广东汕头西拢化工厂生产7.钼酸钠:SHANGHAICHEMICALREGENTCO.LTD.生产8.磷酸:上海建成试剂厂生产9.盐酸:上海东懿化学试剂公司生产10.硫酸锂:中国医药(集团)化学试剂公司生产11.溴水:中国医药(集团)化学试剂公司生产12.酪氨酸:中国医药(集团)化学试剂公司生产13.酪蛋白:上警后天山化工厂生产14.三氯乙酸:上海凌峰化学试剂有限公司315.碳酸钠:宜兴市第二化学试剂厂生产16.电子分析天平:上海精密科学仪器有限公司生产17.快速混匀器:江苏省金坛市金成国胜实验仪器厂生产18.高速电动匀浆器:江苏省金坛市金成国胜实验仪器厂生产19.高速冷冻离心机:上海安亭科学仪器厂生产20.超低温冰柜:日本三洋生产21.恒温水浴锅:.江苏省金坛市金成国胜实验仪器厂生产22.754紫外可见光光度计:上海精密科学仪器有限公司生产23.石英自动双重纯水蒸馏器:江苏省金坛市金成国胜实验仪器厂生产1.2方法1.2.1试验方案135羽1日龄AA鸡随机分成3组,每组3个重复,每个重复15羽鸡。对照组1，饲喂基础日粮；对照组2，饲喂基础日粮+50mg/kg洛克沙胂+750mg/kg10%的金霉素；试验组，按每千克饲料中添加160毫克的大蒜素。饲喂6周。基础日粮的配方及成分见表1。表1基础日粮配方及营养水平日粮组成（%）0-3周3-6周营养水平0-3周3-6周玉米（%）59.8864.87ME（MJ/㎏）12.1812.39豆饼（%）34.0030.40CP（%）21.7018.80进口鱼粉（%）3.001.50Ca（%）0.960.90磷酸氢钙（%）1.401.65P（%）0.700.64石粉（%）1.201.10Lys（%）1.100.94蛋氨酸（%）0.110.04Met（%）0.450.36肉鸡多维（%）0.030.03食盐（%）0.280.31微量元素（%）0.100.10食盐（%）0.280.311.2.2饲养管理方法将135羽1日龄AA实验肉仔鸡按照分栏饲养于三间密闭式鸡舍中，采用厚垫料平面饲养，自由饮水，自由采食，鸡舍内的温度在1日龄的时候在34℃，以后每周逐渐降低1-2℃，饲养期间按常规程序进行新城疫，法式囊，传支4病的免疫接种以及鸡舍内外的消毒工作。1.2.3样品的采集分别在20日龄，41日龄晚18：00停食。待空腹12小时后于次日早晨6：00，从每个重复组随机取两只鸡（雌雄各一只），称重后屠宰（采用心脏采血处死），取出小肠。前部从肌胃与十二指肠结合部位剪断，后部至回肠头部剪断，用镊子将其内容物挤入封口袋中，于-50℃超低温冰柜中储存。以备试验处理。1.2.4样品的处理准确称取十二指肠内容物1g，按W/V=5，加4℃预冷双蒸水，快速匀浆30S（保持低温环境，防止酶失活），匀浆液在16000转/分，0-4℃条件下离心15分钟，并且离心两次，将上清液，然后再等分于三个青霉素瓶中于-50℃超低温冰柜中保存，待测。1.3测定指标及测定方法1.3.1肉鸡生产性能的测定试验鸡按重复逐日记录耗料量，分别于21，42日龄逐只称重，然后计算日增重，料重比。1.3.2肉鸡消化道酶活性的测定1.3.2.1十二指肠内容物中的淀粉酶活力的测定测定前将底物缓冲液在37℃预温5分钟，然后按下表顺序加入试剂。步骤空白管测定管37℃底物缓冲液(ml)1.01.0肠匀浆液(ml)/0.02立即混匀,37℃水浴7.5分钟碘应用液(ml)1.01.0蒸馏水(ml)6.06.0然后将空白管和测定管利用紫外可见光度计测定光密度。1.3.2.2十二指肠内容物中的脂肪酶活力的测定试验步骤:(1)将分光光度计于420nm处以Trise缓冲液[6]调零。(2)在待测试管中加入4ml底物缓冲液,编号并放入37℃预温5分钟5(3)往相应编号已装有底物缓冲液的试管加入0.05ml肠内容物匀浆上清液,迅速用冰箱保鲜薄膜盖住管口,再用拇指摁住,立即颠倒混合5次(切勿用力振荡)。(4)迅速倒入比色皿中，在分光光度计于420nm处比色，读取吸光度值（A1值）。(5)将此比色液倒入原试管中置于37℃准确水浴中10分钟,再按照上面相同的方法比色,读取吸光度值(A2值)。(6)求出两次吸光度差值(△A=A1-A2)1.3.2.3十二指肠内容物中总蛋白酶活力的测定Ⅰ.酪氨酸标准曲线的绘制。精确称取烘干的酪氨酸50mg，加入少量的0.2mol/L的盐酸溶液溶解，定容至100ml。分别配置0、20、40、60、80u/ml的酪氨酸溶液，各取不同浓度的酪氨酸1ml，分别加入0.5%酪蛋白2ml，于37℃水浴中反应，然后加入10%三氯乙酸3ml，离心取上清液1ml，加入0.55mol/L碳酸钠5ml，再加入福林-酚试剂（制备方法[6]）1ml，于37℃水浴中显色15分钟，在680nm波长下比色，测光密度值（OD），以光密度值为纵坐标，酪氨酸浓度为横坐标，绘制标准曲线图。Ⅱ.用肠道内容物匀浆上清液来替代上述的酪氨酸，测定样品的吸光度。1.4数据计算原理1.4.1肉鸡生产性能的计算日增重=（试验末平均体重-初期平均体重）/试验天数平均日采食量=食入饲料总重/试验天数料重比=平均日采食量/日增重1.4.2淀粉酶活力的计算淀粉酶活力(u/g食糜)=(空白管光密度-测定管光密度)×800/(空白管光密度×肠内容物重)1.4.3脂肪酶活力的计算脂肪酶活力(u/L)=(A1-A2)×因数/10求因数的方法:取底物缓冲液4ml加0.9%氯化钠50µl,420nm比色,读取吸光度AS值,此AS值相当于标准管(454µmol/L)的浓度的吸光度值,得出因数=36320/AS。61.4.5蛋白酶活力的计算用样品的吸光度在赖氨酸标准曲线上查出相应的酪氨酸的浓度。我们以37℃，30分钟水解蛋白产生1µg酪氨酸的酶量为1个酶活力。2结果分析数据均以平均数±标准误（x±Se）表示,采用OFFICE软件包中的Excel2000软件对试验组间数据进行单因数方差分析和描述性统计2.1大蒜素对肉鸡的生长性能的影响表2大蒜素对肉鸡生长性能的影响项目对照组抗生素组大蒜素组只数45454521日龄平均重(g)544.02±10.99535.14±3.82546.74±4.9742日龄平均重（g）1757.00±13.501863.70±33.741810.99±75.20-3周平均日增重（g）23.62±0.8023.38±0.1823.86±0.524-6周平均日增重（g）40.84±0.3243.32±0.8042.05±1.790-3周料重比1.54±0.011.53±0.011.535±0.044-6周平均料重比2.55±0.222.44±0.112.37±0.04以上数据采用Excel2000单因素方差分析得出P0.05，差异均不显著。通过上表中的数据得出如下的结果：分析：通过表2和图1，图2，图3，我们可以直观的看出大蒜素对肉鸡的生产性能有一定的促进作用，在21，42日龄时大蒜素组的肉鸡平均体重和平均日增重均高于对照组，但抗生素组在21日龄时的平均体重和平均日增重020040060080010001200140016001800200021日龄42日龄图1大蒜素对肉鸡体重的影响平均体重（g）对照组抗生素组大蒜素组00.511.522.5321日龄42日龄图3大蒜素对肉鸡料重比的影响料重比对照组抗生素组大蒜素组0510152025303540455021日龄42日龄图2大蒜素对肉鸡日增重的影响日增重(g)对照组抗生素组大蒜素组7均低于对照组，在42日龄时大蒜素组对肉鸡的增重效果没有抗生素好；大蒜素组和抗生素组的料重比均比对照组低，且在21日龄时三组的料重比相差不大，但到42日龄时，大蒜素组肉鸡的料重比明显低于抗生素组和对照组肉鸡料重比，以上结论说明大蒜素可以替代抗生素添加到肉鸡基础日粮中。2.2大蒜素对肠道淀粉酶活性的影响表3大蒜素对肠道淀粉酶活性的影响肠道淀粉酶(u/g食糜)组别只数21日龄42日龄对照组61325.17±114.52a2671.10±278.94a抗生素组61894.49±124.98a4175.37±597.06ac大蒜素组62953.45±138.40c4489.43±268.00c注:相邻字母表示P0.05,非相邻字母表示P0.01,相同字母表示P0.05将对照组，抗生素组，大蒜素组分别在21，42日龄的肠道淀粉酶活力的数据利用EXCEL绘制折线图如下：分析:从表3和图4我们可以看出与对照组相比较,添加