双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊对高脂饮食所致大鼠非酒精性脂肪肝的疗效及机制探讨改

1文章编号：1005-376X(2013)07-0000-06【论著】双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊对高脂饮食所致大鼠非酒精性脂肪肝的疗效及机制探讨冯丽英,沈颖娟,于书雷(河北医科大学第二医院消化内科,河北石家庄050000)【摘要】目的观察微生态制剂贝飞达（双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊）治疗高脂饮食所致大鼠非酒精性脂肪肝的疗效并探讨其可能的作用机制。方法雄性SD大鼠32只，适应性饲养1周后，随机分为3组，正常组：12只给予普通饲料喂养；模型组：12只，贝飞达治疗组：8只，均给予高脂饲料喂养；于喂养12周末正常组及模型组各处死4只，经肝组织HE染色确定造模成功后，贝飞达治疗组给予贝飞达[0.113g/(kg·d)]灌胃,于16周末全部处死。检测大鼠血清AST、ALT、TC、TG、LDL、HDL、血清内毒素水平，观察其肝组织学变化。结果模型组于高脂饲料喂养12周末出现脂肪肝，与正常组比较，模型组大鼠血清AST、ALT、TG、TC、LDL、HDL及血清内毒素水平均明显升高（P0.01）。贝飞达治疗组大鼠各项指标较模型组均有显著改善，肝脏脂肪变性程度减轻。结论微生态制剂贝飞达可能通过改善肠道菌群紊乱，减轻内毒素血症，从而调节肝脏脂质代谢紊乱，对非酒精性单纯性脂肪肝起到治疗作用。【关键词】贝飞达;非酒精性脂肪性肝病；肠源性内毒素血症【中图分类号】R378.992【文献标识码】AToexploretheeffectandmechanismsofBeifeidaonnonalcoholicfattyliverdiseaseratmodelFENGLi-ying,SHENGYing-juan,YUShu-lei(DepartmentofinternalMedicine,TheSecondHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050000,HebeiProvince,China)【Abstract】ObjectiveToexplorethetherapeuticeffectandmechanismsofmicrobialpharmaceutics″Bifid.TripleViableCapaulesDissolvingatIntestines″inthenonalcoholicfattyliverdisease(NAFLD)inratsfedbyhigh-fatdiets.Methods32maleSpragueDawleyratswererandomlyassignedinto3groupsafterfedwithnormaldietfor1week.Thecontrolgroup(n=12)wasfedwithnormaldiets.Themodelgroup(n=12)andthetherapygroup(n=8)werefedwithhigh-fatdiets(consistingof88%normaldiet+10%lard+1%cholesterol+5%eggyolkpowder).4Ratsincontrolandmodelgroupswerekilledat12weeks,andpathologywasobservedbyHEstaintomakesurethemodelwassuccessed.Whilstthetherapygroupwastreatedwithmicrobialpharmaceuticalswhichnamedas″Bifid.TripleViableCapaulesDissolvingatIntestines″[0.113g/(kg·d)].Alltheratswereexecutedattheendof16weeks.Bloodsampleswerecollectedfordetectionofserumaspartatetransaminase(AST),alanineaminotransferase(ALT),totalcholesterol(TC),thermogravimetry(TG),lowdensitylipoprotein(LDL),highdensitylipoprotein(HDL)andendotoxin.ThehistologicalchangesoflivertissueswereobservedbyHEstain.ResultsNonalcoholicfattyliverdiseaseformedinthemodelratsattheendof12weeks.Compardewithnormalcontrolgroup,thelevelsofAST,ALT,TC,TG,LDL,HDLandendotoxinintheserumincreasedinthemodelgroup(P0.01).Theaboveindexesinthetherapygroupwereimprovedobviously.ConclusionMicrobialpharmaceutical″Bifid.TripleViableCapaulesDissolvingatIntestines″bytheactionofregulatinggutmicrobiota,lightingendotoxinandregulatinglipidmetabolismtreatmentnonalcoholicfattyliverdisease(NAFLD).【Keywords】Beifeida;Nonalcoholicfattyliverdisease；Intestinalendotoxemia随着人们生活水平的不断提高，非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD)的发病率日益增高。但其目前尚无确切的有效治疗药物。研究发现NAFLD患者伴有小肠细菌过度生长(SIBO)[1,2]，SIBO可以影响体内脂质代谢，增加肝脏脂质沉积，对非酒精性脂肪肝的发生发展起到主要作用[3]。本研究通过高脂饮食建立非酒精性脂肪肝大鼠模型，检测其血清内毒素水平，并应用微生态制剂贝飞达对其进行干预，以探讨贝飞达对大鼠非酒精性脂肪肝的疗效及其作用机制。1材料与方法1.1材料雄性SD大鼠32只，体重180～200g(由河北医科大学实验动物中心提供，合格证号1104150)。微生态制剂贝飞达由山西省晋城海斯制药有限公司提供。胆固醇由南京新百药业有限公司提供。猪油及蛋黄粉购自广州金益食品有限公司。鲎试剂盒由湛江安度斯生物有限公司提供。全自动生化仪购自德国Bayer公司，由河北医科大学第二医院生化实验室提供。1.2实验动物及分组实验大鼠随机分为正常对照组12只，模型组12只，贝飞达治疗组8只，除正常对照组给2予普通饲料外，其余各组均给予高脂饲料（88%普通饲料+10%猪油+1%胆固醇+5%蛋黄粉），各组大鼠自由进食水，分笼（每笼4只）饲养于(25±2)℃、明暗各12h的动物实验室内。喂饲12周取正常组和模型组各4只处死，行肝组织HE染色确定大鼠非酒精性脂肪肝模型成功后，治疗组给予双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊0.113g/（kg·d）灌胃，正常对照组及模型组给予等容量蒸馏水灌胃。______【收稿日期】2013-04-23【作者简介】冯丽英(1959-),女,主任医师,从事脂肪性肝病和病毒性肝炎研究,Email:[e-mail]1.3方法治疗4周后统一处死大鼠，处死前一晚禁食，不禁水。各组动物经4%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后处死，无菌无热源件下于下腔静脉取血5mL，在3000r/min离心15min分离血清用于：（1）鲎试剂法测定血清内毒素水平；（2）采用全自动生活分析仪测定血清谷丙转氨酶(AST)，谷草转氨酶(ALT)，总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白(HDL)，低密度脂蛋白(LDL)。采血后处死动物，迅速取出肝脏，取肝左叶用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，HE染色用以观察肝组织病理变化。1.4统计学方法实验所有结果均用均数±标准差（x±s）表示，通过SPSS13.0统计软件,采用单因素方差分析（one-wayANOVA）对各组均数进行显著性检验,相关性采用直线相关分析,P＜0.05为差异有统计学意义。相关系数r值界于－1～+1，r为正表示正相关，r为负表示负相关。2结果2.1大鼠体质指标变化正常对照组大鼠精神充沛，灵活好动，皮毛整洁有光泽，体重逐渐增加；而高脂组最初较正常组体重明显增加，8周后体重较前增长缓慢，精神萎靡，性情温顺，且喜卧懒动，皮毛凌乱，光泽度差，大便稀松。2.2血清生化指标及内毒素水平变化与正常组比较，模型组大鼠体重，肝湿重，Lee′s指数均明显增高（P0.01）；与模型组比较，贝飞达治疗组大鼠体重，肝湿重，Lee′s指数均明显下降（P0.01）（见表1）。与正常组比较，模型组大鼠各生化指标均明显增高（P0.01）；与模型组比较，贝飞达治疗组中ALT、LDL水平明显下降（P0.01）,AST、TG、TC和HDL水平亦较模型组下降(P0.05)（见表2，表3）。与正常组比较，模型组大鼠血清内毒素水平明显增高(P0.01);与模型组比较，贝飞达治疗组大鼠血清内毒素水平明显下降(P0.01)（见表3）。表1各组大鼠体质变化分组鼠数（只）体重（g）肝湿重（g）Lee′s指数（%）模型组8570.85±13.41a19.81±2.47a0.035±0.005a治疗组8524.31±7.22b15.36±1.23b0.029±0.002b正常组8507.43±11.6512.91±0.780.025±0.002注:与正常组比较,aP0.01;与模型组比较,bP0.01。表2各组大鼠血脂变化分组TG(mmol/L)TC(mmol/L)HDL(mmol/L)LDL(mmol/L)模型组0.60±0.08a1.20±0.18a0.65±0.06a0.35±0.06a治疗组0.50±0.09b1.02±0.17b0.73±0.06b0.18±0.15c正常组0.31±0.080.68±0.160.82±0.080.21±0.05注:与正常组比较,aP0.01;与模型组比较,bP0.05,cP0.01。表3各组大鼠肝功能及血清内毒素水平变化分组ALT(U/L)AST(U/L)内毒素(EU/mL)模型组71±8.73a204.88±18.22a0.238±0.015a治疗组45.88±15.10b183.00±18.47c0.171±0.020b正常组41±7.43157.88±17.600.118±0.010注:与正常组比较aP0.01;与模型组比较aP0.01,cP0.05。2.3血清内毒素水平与各生化指标的相关性分析内毒素水平与ALT、AST、TC、TG和LDL水平均成正相关，相关系数分别为0.802、0.746、0.757、0.801和0.916，均P0.01；内毒素水平与HDL水平成负相关，相关系数为3－0.660，P0.01。2.4肝组织病理学变化肉眼可见：正常组大鼠肝脏为鲜红色，边缘锐利，表面光滑；模型组肝脏体积明显增大，颜色呈土黄色，质软，与周围组织有粘连，切面油腻；贝飞达组肝脏接近正常，表面呈浅黄色，油腻状减轻。光镜下观察：正常组大鼠肝小叶结构完整，中央静脉周围有放射状排列的肝细胞索，窦间隙均匀、清晰，汇管区清晰可辨，无明显炎细胞浸润；模型组肝细胞均呈弥漫性大泡或小泡脂肪变性，以小泡变性为主，肝细胞脂肪变性面积达到2/3以上，脂变肝细胞以中央静脉周围最为明显，极度肿胀呈圆形，体积较正常明显增加，胞浆内充满大量脂肪空泡，界限不清，肝窦狭窄；贝飞达组脂肪变程度较模型组明显减轻。正常组HE×400模型组HE×400治疗组HE×400图1肝组织病理学变化3讨论近年研究证实，肠道菌群紊乱在非酒精性脂肪肝的发生发展中具有重要作用。最近的一项临床研究显示78%的NAFLD患者存在小肠