双酶切体系

DoubleDigestion(双酶切反应)时UniversalBuffer(通用缓冲液)的使用表■说明使用二种酶同时进行DNA切断反应(DoubleDigestion)时，为了节省反应时间，通常希望在同一反应体系内进行。TaKaRa采用UniversalBuffer表示系统，并对每种酶表示了在各UniversalBuffer中的相对活性。尽管如此，在进行DoubleDigestion时，有时还会难以找到合适的UniversalBuffer。本表以在pUC系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心，显示了在DoubleDigestion可使用的最佳UniversalBuffer条件。在本表中，各UniversalBuffer之前表示的[数字×]是指各UniversalBuffer的反应体系中的最终浓度。TaKaRa销售产品中添附的UniversalBuffer全为10倍浓度的缓冲液。终浓度为0.5×时反应体系中的缓冲液则稀释至20倍，1×时稀释至10倍，2×时稀释至5倍进行使用。■注意◇1μgDNA中添加10U的限制酶，在50μl的反应体系中，37℃下反应1小时可以完全降解DNA。◇为防止Star活性的产生，请将反应体系中的甘油含量，尽量控制在10%以下。◇根据DNA的种类，各DNA的立体结构的差别，或当限制酶识别位点邻接时，有时会发生DoubleDigestion不能顺利进行的可能。