医学遗传学资料整理

基因敲除1.从供体小鼠的胚胎中提取出胚胎干细胞；2.利用基因打靶技术，对外源DNA的特定基因进行修饰或抑制其活性，再将之引入胚胎干细胞，培养这种吸收了外来基因的胚胎干细胞；3.经过修饰的干细胞被注入胚泡中，再将胚泡置入代理母亲的子宫，这时出生的小鼠就是一种嵌合型小鼠，即拥有正常遗传的细胞，也拥有经修饰的细胞；4.将嵌合型小鼠与正常小鼠交配，所出生的基因打靶小鼠，每个基因都含有正常基因和经修饰的基因。相似序列的含义1.功能重要：功能上较主要的序列倾向于保守，序列相似性就高，而不编码或无功能的序列可以有非常大的差异，序列相似性低。2.进化时间较短或基因突变速度较慢：慢变基因是建立进化树的基础，遗传距离与时间成正比。分离时间短的序列相似性就高。3.最大遗传距离：快变基因可在短时间内达到遗传距离最大上限，是判断物种复杂性的基础。复杂物种的序列相似性就高。miRNA和siRNA的差异1.miRNA来自长的单链RNA，而siRNA来自长的双链RNA；2.miRNA与靶mRNA不完全互补，但是siRNA完全互补；3.miRNA与靶mRNA结合，抑制其翻译；siRNA与靶mRNA结合造成其降解；4.miRNA往往可以抑制许多序列相似的mRNA的翻译，但是siRNA只造成特定基因的降解。基础研究：降低基因表达(Geneknockdown)临床应用：抗肿瘤、抗病毒…..SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳1.聚丙烯酰胺凝胶电泳可以根据电荷和分子质量的差异来分离蛋白质。2.当阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)与蛋白质结合后，蛋白质分子即带有大量的负电荷，并远远超过了其原来的电荷，从而使天然蛋白质分子间的电荷差别降低乃至消除。3.同时，蛋白质在SDS作用下结构变得松散，形状趋向一致，所以各种SDS-蛋白质复合物电泳时的泳动率差异，就反映了分子质量的不同。二维(Twodimensional)凝胶电泳1.等电聚焦电泳，利用等电点不同分离蛋白质。(水平，X-轴）2.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳：利用分子量大小不同分离蛋白质。（垂直，Y-轴）亲和层析将目标蛋白固定在亲和层析介质上(如Sepharose4B)，让细胞蛋白通过层析柱，与目标蛋白结合的蛋白质被留在层析柱上，然后洗脱下来，用质谱分析等方法进行鉴定。免疫共沉淀(co-immunoprecipitation，co-IP)利用抗原和抗体间的反应特异性，用抗体将目标蛋白以及与目标蛋白相互作用的蛋白质共同沉淀下来的方法。酵母双杂交技术将相互作用的两个蛋白质分别与转录因子的DNA结合域(DNA-bindingdomain)和转录激活域(Activationdomain)融合，在酵母细胞中通过报告基因的表达情况反映两个蛋白质之间的相互作用基因定位方法1.染色体多态法：核型内一条或数条染色体表现比较恒定的微小形态变异，并按孟德尔定律的方式遗传，因此可以根据这些变异与疾病的关系，定位基因的位置。2.染色体畸变法：根据染色体畸变的位置和疾病发生的关系，则可将致病基因定位于染色体的某一特定位置上。3.体细胞杂种法：体细胞杂种通常由人和鼠的体细胞融合而成。这些融合细胞在最初几代培养过程中具有选择性丢失人类染色体趋势，而保留所有的鼠染色体。保留在融合细胞中的染色体可以是多条，也可能只有一条甚至某条染色体的一部分。根据研究的需要可将含有不同人类染色体的人鼠杂种细胞组合成人鼠杂种细胞板(hybridpanel)，结合杂种细胞板和PCR的方法或基因剂量分析，或蛋白质表达分析，可将相应的基因定位到特定的染色体或染色体片段上，该杂种细胞板在人类基因定位以及人类基因组计划中发挥过重要的作用4.原位杂交法（FISH）：如果一个基因或基因的某一部分已经被克隆，则可将该基因用同位素或荧光标记和染色体原位的分子杂交，在染色体上恒定出现信号的区域即该基因在染色体上的位置。5.候选克隆：根据基因的功能、结构及已有的研究发现，预测可能与目的新基因有关的疾病，然后在相应患者中检测该基因的突变情况。6.位置克隆：目前最常用的方法，将某一疾病的致病基因用连锁分析的方法定位在某一染色体的特定位置上或区域内，然后在该位置上或区域内鉴定其致病基因。基因分型除性染色体外，每个人体内的染色体都有两份。一个人所拥有的一对等位位点的类型被称作基因型genotype。对SNP位点而言，一个人有三种可能性，分别是AA，AG或GG。这种基因型的差异叫做单核苷酸多态性(SNP)。通过实验确定某个个体在某个多态性位点的基因型，被称作基因分型。方式:1.RFLP（restrictionfragmentlengthpolymorphism）。限制性片段长度多态性2.STRP(shorttandemrepeatpolymorphism)短串联重复多态性3.SNPs单核苷酸多态性1.动态突变（DynamicMutation）：指DNA中的碱基重复序列拷贝数发生扩增而导致的突变，重复单位片段的大小3-33个碱基长不等，也称为基因组不稳定性(genomicinstability)。2.剪接位点突变：导致剪接位点改变和潜在剪接位点激活的突变。3.内含子序列突变：以往认为内含子中的随机突变对生物不会产生严重的影响。但近些年来,随着人们对内含子和基因序列功能研究的不断深入,发现在mRNA剪切过程中,如内含子中分支点或内含子与外显子拼接处发生碱基的改变,往往会造成剪切点改变,从而导致编码的改变。4.启动子序列突变：启动子序列发生变异后导致启动子转录活性的改变，分2类：上升突变(upmutation)：基因由弱启动子突变成强启动子；下降突变(downmutation)，调控蛋白不能与其结合，使发生顺式调控突变的基因不表达。产前诊断的方法1.无创性检查：母体血清三项筛查，超声影像检查，母体血中胎儿细胞检测。2.有创性检查：羊膜腔穿刺，绒毛取样，脐静脉穿刺，胎儿镜检查。植入前遗传学诊断(PreimplantationGeneticDiagnosisPGD)指通过体外受精获得的胚胎在送入母体宫腔前取一个或几个胚胎细胞进行遗传学分析。多基因病的特点（总结）1、为常见病和常见畸形2、有家族聚集倾向3、不同种族间同一多基因病发病率不同4、随着亲属级别降低，患者亲属发病风险迅速下降一卵双生→一级亲属→二级亲属→三级亲属→一般人群(每级下降＞＞1/2)5、近亲婚配,子女发病风险增高复发风险之总结1.染色体病:一般新发、散发、无家族史,再发风险根据人群发病率,结合亲代年龄估计。少数情况如平衡易位携带者的后代发病风险较高。2.基因组病：一般新发、散发、无家族史，根据人群发病率进行估计。3.单基因病4.多基因病:根据人群发病率及遗传度,结合家系资料进行估计。