双甲脒含量气相分析方法验证方案

常州华夏农药有限公司双甲脒含量气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-Assay-14-001Page:1/15第1页共15页双甲脒含量气相分析方法验证方案方案批准起草人：日期：审核人：日期：部门负责人：日期：QC经理：日期：QA经理：日期：常州华夏农药有限公司双甲脒含量气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-Assay-14-001Page:2/15第2页共15页目录1.概述..................................................................31.1验证目的..........................................................31.2验证项目..........................................................32.参考资料..............................................................33.色谱条件和分析过程....................................................43.1色谱条件..........................................................43.2分析过程..........................................................44.器材和试剂............................................................54.1器材..............................................................54.2试剂..............................................................55.验证内容..............................................................55.1系统适用性........................................................65.2专属性............................................................65.3检测限、定量限....................................................75.4线性和范围........................................................85.5准确度............................................................95.6精密度...........................................................105.7方法耐用性.......................................................135.8溶液稳定性.......................................................146.结论.................................................................157.审核和批准...........................................................158.文件变更历史.........................................................15常州华夏农药有限公司双甲脒含量气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-Assay-14-001Page:3/15第3页共15页1.概述1.1验证目的通过验证确定该方法适用于双甲脒含量的检测。1.2验证项目本方法属于主成分定量检测方法，所以需要验证的项目有：系统适用性，专属性，系统精密度，检测限和定量限，线性及范围，准确度（回收率），方法耐用性，溶液稳定性。具体参数以及标准参考下表：验证项目接受标准验证结果系统适用性连续6针对照峰面积的RSD值不大于2.0%；对照图谱中双甲脒峰与角鲨烷内标峰的分离度至少达到3.0。专属性空白溶剂图谱中目标物出峰位置没有明显干扰；对照图谱中双甲脒峰与角鲨烷内标峰的分离度至少达到3.0；样品溶液中可能降解的溶剂对目标物检测没有影响，用RRT进行表示。检测限、定量限信噪比S/N在3-5范围内对应的样品浓度为检测限；信噪比S/N在10-15范围内对应的样品浓度为定量限。线性及范围含量对照浓度的60%，80%，100%，120%，140%范围内线性相关系数不小于0.999。准确度在含量对照浓度80%，100%，120%三个浓度点下，平均回收率在98.0%-102%范围内；各回收率的RSD不大于2.0%。精密度重复性连续检测6次对照溶液，6针对照图谱中内标峰面积与被分析物峰面积比值的RSD值不大于2.0%中间精密度由两个人在不同时间不同的仪器上对同一批产品分别检测6次，12次检测结果的RSD不大于2.0%。方法耐用性色谱条件发生微小变动时，方法仍适用于样品检测，对照图谱中双甲脒峰与角鲨烷内标峰的分离度至少达到3.0；连续6针对照峰面积不大于2.0%。溶液稳定性样品溶液放置一段时间后，样品含量变化的绝对值不大于2.0%，则认定该时间内样品溶液是稳定的。2.参考资料常州华夏农药有限公司双甲脒含量气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-Assay-14-001Page:4/15第4页共15页ICHQ2(R1);EP467;USP20424.3.色谱条件和分析过程3.1色谱条件仪器：气相色谱仪，型号：检测器：UV，波长：nm色谱柱：层析室温度：220°C进样口温度：230°C检测温度：300°C载气：N2流速：12mL/min进样量：1μL3.2分析过程溶液配制内标溶液的配制(溶液C)：精密量取角鲨烷2mL于100mL容量瓶中，加乙酸甲酯溶解并加至刻度摇匀，密闭在阴凉处避光保存；角鲨烷溶液浓度为2%(V/V)。样品空白溶液的配制：精密称取0.15g双甲脒样品于一定量乙酸甲酯中，最后定容到30mL。供试品溶液的配制：精密称取0.15g双甲脒样品于10mL(精密量取)的溶液C(2%的角鲨烷溶液)和一定量的乙酸甲酯中，最后定容到30mL。对照溶液的配制：以溶液C制备1.5%(W/V)的符合英国兽药典的双甲脒标准品，然后用乙酸甲酯稀释上述溶液至原体积的三倍(实际称取0.15g双甲脒标样定容到30mL)。进样程序在色谱条件平衡的条件下，分别进1针空白溶液（乙酸甲酯）、1针样品空白溶液-供试品溶液（1），6针对照溶液-溶液（3），2针供试品（2-1）溶液，2针供试品（2-2）溶液，1针对照溶液-溶液（3），记录色谱图。计算公式含量（ｍ1）=''//ssiiCAmAf常州华夏农药有限公司双甲脒含量气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-Assay-14-001Page:5/15第5页共15页式中：Ai：供试品双甲脒的峰面积；Cs’：内标物的浓度，mg/mL；As’：内标物的峰面积；mi：供试品双甲脒的称重质量，mg；f：校正因子。校正因子：（f）=rrssmACA//×P式中：AS：内标物的峰面积；CS：加入内标物的浓度，mg/mL；Ar：对照品双甲脒的峰面积；mr：对照品双甲脒的质量，mg；P：对照品双甲脒的百分含量,%系统适用性要求对照图谱中双甲脒峰与角鲨烷内标峰的分离度至少达到3.0；连续6针对照双甲脒峰面积的RSD不大于2.0%。4.器材和试剂4.1器材仪器名称型号编号生产厂家校正有效期气相色谱仪分析天平物理天平移液管容量瓶4.2试剂名称批号级别厂家有效期/复验期双甲脒标样内标物（角鲨烷）乙酸甲酯（溶剂）5.验证内容常州华夏农药有限公司双甲脒含量气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-Assay-14-001Page:6/15第6页共15页5.1系统适用性5.1.1目的对由分析设备，试验操作，被分析产品组成的系统进行评估，确定该方法在该系统条件下是可适用的。5.1.2实际操作：内标溶液的配制(溶液C)：精密量取角鲨烷mL于mL容量瓶中，加乙酸甲酯溶解并加至刻度摇匀，密闭在阴凉处避光保存；角鲨烷溶液浓度为2%(V/V)。样品空白溶液的配制：精密称取mg双甲脒样品于30mL容量瓶中加适量乙酸甲酯溶解，最后定容到30mL。对照溶液的配制：精密称取mg双甲脒标准品于30mL容量瓶中,精密量取mL的溶液C(2%的角鲨烷溶液)加入其中，最后用乙酸甲酯定容到30mL。分别移取空白溶液（乙酸甲酯），供试品空白溶液和对照溶液注入色谱仪中，分别进针1次，1次和6次，记录色谱图，计算连续6针对照图谱中双甲脒峰面积的RSD值。5.1.3接受标准：对照图谱中双甲脒峰与角鲨烷内标峰的分离度至少达到3.0；连续6针对照图谱中双甲脒峰面积的RSD值不大于2.0%。5.1.4验证结果：表1：系统适用性验证结果序号双甲脒峰面积123456平均峰面积RSD（%）结论：5.2专属性5.2.1目的：对分析方法准确可靠测定被分析物的能力进行测试。5.2.2实际操作：常州华夏农药有限公司双甲脒含量气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-Assay-14-001Page:7/15第7页共15页取用系统适用性项下的溶液C。供试品溶液(2)的配制：精密称取mg双甲脒样品于30mL容量瓶中,精密量取10mL的溶液C(2%的角鲨烷溶液)加入其中，最后用乙酸甲酯定容到30mL。在系统适用性检测完成后，移取供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图。取用系统适用性项下供试品溶液（1）图谱的检测结果，溶液（3）第一针图谱的检测结果以及供试品溶液（2）图谱的检测结果。5.2.3接受标准：溶液乙酸甲酯对双甲脒的检测没有影响；对照图谱中双甲脒峰与角鲨烷内标峰的分离度至少达到3.0；样品溶液中可能存在的降解杂质对双甲脒的检测没有影响。5.2.4验证结果：表2：专属性验证结果溶液名称双甲脒与角鲨烷内标峰的分离度鱼鲨烷保留时间（min）双甲脒保留时间（min）最大未知杂质相对保留时间（min）供试品溶液（1）/溶液（3）供试品溶液（2）结论：5.3检测限、定量限5.3.1目的：确定该方法在一定的条件下最小能够检测到的被分析物的浓度为多少，以及最小能够定量的被分析物的浓度为多少。5.3.2实际操作：双甲脒储备液的配制：精密称取双甲脒对照品mg于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后，摇匀。双甲脒检测限溶夜：精密移取mL双甲脒储备液于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中，信噪比S/N在3-5之间。双甲脒定量限溶液：精密移取mL双甲脒储备液于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中，信噪比S/N在10-15之间，一般为检测限浓度的3倍。取空白溶液（甲酸乙酯）注入气相色谱仪连续检测3次，然后分别取检测限溶液和常州华夏农药有限公司双甲脒含量气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-Assay-14-001Page:8/15第8页共15页定量限溶液注入色谱仪，检测限溶液连续进样3次，定量限溶液连续进样5次。5.3.3验证结果：表3-1：基线信噪比序号123平均值基线噪声表3-2：检测限、定量限名称浓度(μg/mL)S/NS/N平均浓度（ppm）检测限定量限5.4线性和范围5.4.1目的：确定设计的范围内，测试结果与被测物浓度呈正比关系的程度。5.4.2实际操作：内标溶液的配制（溶液C）：精密量取角鲨烷mL于mL容量瓶中，加乙酸甲酯溶解并