双甲脒有关物质气相分析方法验证方案

常州华夏农药有限公司双甲脒有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:1/22第1页共22页双甲脒有关物质气相分析方法验证方案方案批准起草人：日期：审核人：日期：部门负责人：日期：QC经理：日期：QA经理：日期：常州华夏农药有限公司双甲脒有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:2/22第2页共22页目录1.概述..................................................................31.1验证目的..........................................................31.2验证项目..........................................................32.参考资料..............................................................43.色谱条件和分析过程....................................................43.1色谱条件..........................................................43.2分析过程..........................................................44.器材和试剂............................................................54.1器材..............................................................54.2试剂..............................................................65.验证内容..............................................................65.1系统适用性........................................................65.2专属性............................................................75.3检测限、定量限....................................................85.4线性和范围.......................................................105.5准确度...........................................................135.6精密度...........................................................165.7方法耐用性.......................................................195.8溶液稳定性.......................................................216.结论.................................................................217.审核和批准...........................................................228.文件变更历史.........................................................22常州华夏农药有限公司双甲脒有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:3/22第3页共22页1.概述1.1验证目的通过验证确定该方法适用于双甲脒有关物质的检测。1.2验证项目本方法属于杂质定量检测方法，所以需要验证的项目有：系统适用性，专属性，系统精密度，检测限和定量限，线性及范围，准确度（回收率），方法耐用性，溶液稳定性。具体参数以及标准参考下表：验证项目接受标准验证结果系统适用性连续6针对照溶液中各个杂质峰面积的RSD值不大于5.0%。杂质a:杂质b:杂质c:杂质d:专属性空白溶剂图谱中目标物出峰位置没有明显干扰；各个杂质之间分离度不小于1.5。检测限、定量限信噪比S/N在3-5范围内对应的杂质浓度为检测限；杂质a:杂质b:杂质c:杂质d:信噪比S/N在10-15范围内对应的杂质浓度为定量限。杂质a:杂质b:杂质c:杂质d:线性及范围杂质对照浓度的60%，80%，100%，120%，140%范围内线性相关系数不小于0.99。杂质a:杂质b:杂质c:杂质d:准确度在杂质对照浓度80%，100%，120%三个浓度点下，平均回收率在80%-120%范围内；各回收率的RSD不大于10.0%。杂质a:RSD=杂质b:RSD=杂质c:RSD=杂质d:RSD=精密度重复性连续检测6次对照溶液，6针对照图谱中各个杂质峰面积的RSD值不大于5.0%中间精密度由两个人在不同时间不同的仪器上对同一批产品分别检测6次，杂质含量12次检测结果的RSD不大于25.0%。方法耐用性色谱条件发生微小变动时，方法仍适用于样品检测，对照图谱中各个杂质之间的分离度不小于1.5；连续6针对照各个杂质峰面积不大于5.0%。常州华夏农药有限公司双甲脒有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:4/22第4页共22页溶液稳定性样品溶液放置一段时间后，杂质含量的绝对值在±0.1％以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质，则认定该时间内样品溶液是稳定的。2.参考资料ICHQ2(R1);EP467;USP20424.3.色谱条件和分析过程3.1色谱条件仪器：GC，型号：检测器：UV，波长：nm色谱柱：石英毛细管柱(规格10m×0.53mm)，柱壁涂布5μm的聚硅氧烷[95%甲基，5%苯基]固定相（毛细管柱ChrompackCP-SiL8CB可用）柱温：起始柱温125℃，保持在125℃5分钟，然后开始以5℃每分钟的速度线性上升到270℃，然后保持270℃15分钟,进一步升温至230℃。进样口温度：230°C检测温度：300°C载气：N2流速：12mL/min进样量：1μL3.2分析过程溶液配制杂质a(2,4-二甲基苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺250mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，浓度为0.1%(W/V)。(注意闭光冷藏保存)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺200mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，浓度为2.0%(W/V)。(注意闭光冷藏保存)。杂质d[N,N’-双(2,4-二甲苯基)甲脒]贮备液：精密称取N,N’-双(2,4-二甲苯基)甲脒200mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为2.0%(W/V)。(注意闭光冷藏保存)。溶液A的制备：分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容常州华夏农药有限公司双甲脒有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:5/22第5页共22页量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.20%(W/V)的溶液。(注：如没有配制杂质b、杂质d贮备液，则溶液A的制备方法为：分别精密称取20mg的杂质b和20mg的杂质d于同一10ml容量瓶中，并将精密量取1ml杂质a贮备液加入其中，加乙酸甲酯定容即可)。溶液B的制备：精密称取30mg的杂质c[N-甲基-N’-(2,4-二甲苯基)甲脒]溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入32mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。对照溶液的制备：等体积的溶液A和溶液B的混合溶液。供试品溶液的制备：精密称取500mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)。进样程序在色谱条件平衡的条件下，分别进1针空白溶液（乙酸甲酯），6针对照溶液，2针供试品溶液，1针对照溶液记录色谱图。计算公式杂质a=标标样ACA100%=杂质b=标标样ACA100%=杂质c=标标样ACA100%=杂质d=标标样ACA100%=式中：A样：样品溶液中杂质的峰面积；C标：对照溶液中对应杂质的浓度，%；A标：对照溶液中对应杂质的峰面积。系统适用性要求连续6针对照各杂质的峰面积的RSD不大于5.0%。4.器材和试剂4.1器材仪器名称型号编号生产厂家校正有效期气相色谱仪分析天平常州华夏农药有限公司双甲脒有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:6/22第6页共22页物理天平移液管容量瓶4.2试剂名称批号级别厂家有效期/复验期乙酸甲酯三乙胺杂质a(2,4-二甲基苯胺)杂质b(2,4-二甲基代苯胺)杂质c[N-甲基-N’-(2,4-二甲苯基)甲脒]杂质d[N,N’-双(2,4-二甲苯基)甲脒]5.验证内容5.1系统适用性5.1.1目的对由分析设备，试验操作，被分析产品组成的系统进行评估，确定该方法在该系统条件下是可适用的。5.1.2实际操作：杂质a(2,4-二甲基苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，浓度为0.1%(W/V)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，浓度为2.0%(W/V)。杂质d[N,N’-双(2,4-二甲苯基)甲脒]贮备液：精密称取N,N’-双(2,4-二甲苯基)甲脒200mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为2.0%(W/V)。溶液A的制备：分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.20%(W/V)的溶液。溶液B的制备：精密称取mg的杂质c[N-甲基-N’-(2,4-二甲苯基)甲脒]溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。对照溶液的制备：等体积的溶液A和溶液B的混合溶液。常州华夏农药有限公司双甲脒有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:7/22第7页共22页分别移取空白溶液（乙酸甲酯），供试品空白溶液和对照溶液注入色谱仪中，分别进针1次，1次和6次，记录色谱图，计算连续6针对照图谱中双甲脒峰面积的RSD值。5.1.3接受标准：连续6针对照图谱中各杂质峰面积的RSD值不大于5.0%。5.1.4验证结果：表1：系统适用性验证结果序号杂质a峰面积杂质b峰面积杂质c峰面积杂质d峰面积123456平均峰面积RSD（%）结论：5.2专属性5.2.1目的：对分析方法准确可靠测定被分析物的能力进行测试。5.2.2实际操作：杂质a(2,4-二甲基苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基苯胺mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，浓度为0.1%(W/V)。(注意闭光冷藏保存)。杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液：精密称取2,4-二甲基代苯胺mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至1