动物实验技术.

动物实验基本技术一、实验动物标记编号的方法(一)染色法：1、单色涂染法：在每组动物不超过l0只的情况下适用。实验动物：大鼠、小鼠。常用染色剂：3-5％苦味酸溶液，可染成黄色。第一节小鼠方法步骤：(1)涂染顺序：从左到右、从上到下。(2)左前肢为l号、左侧腹部2号、左后肢3号。(3)头部4号、背部5号、尾根部6号。(4)右前肢7号、右侧腹部8号、右后肢9号。(5)不作染色标记为10号。2、双色涂染法：在每组动物不超过100只的情况下适用。实验动物：大鼠、小鼠。常用染色剂：(1)3-5％苦味酸溶液，可染成黄色。——作为“个”位数。(2)0.5%中性红或品红溶液，可染成红色。——作为“十”位数。方法步骤：(1)用两种颜色同时进行染色标记。(2)用苦味酸(黄色)染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法。(3)用品红(红色)染色标记作为十位数，（4）左前肢为10号、左侧腹部20号、左后肢30号，头部40号、背部50号、尾根部60号，右前肢70号、右侧腹部80号、右后肢90号第100号不作染色标记。二、小鼠的抓取保定：器材：小鼠饲养盒+面罩1套。方法步骤：1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部将小鼠提起，放在饲养合的面罩上。2、用左手拇指和食指迅速、准确地捏住小鼠的两耳后、颈背部的皮肤，将小鼠提起。3、翻转左手掌，以左手掌心和中指夹小鼠背部的皮肤，使小鼠整个呈一条直线。4、用左手无名指压住小鼠背部的皮肤，小指压住小鼠的尾巴根部。5、松开捏住小鼠尾巴的右手拇指和食指。三、小鼠的给药方法：(一)灌胃给药原理：将药液直接注入小鼠的胃内。器材：小鼠灌胃针1支、注射器1支、小鼠饲养盒+面罩1套、生理盐水、烧杯。方法步骤：1、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液。2、左手捉持小鼠，使小鼠头部向上。3、右手将灌胃针头尖端从小鼠口角处进针放进小鼠口咽部，顺咽后壁轻轻往下推，灌胃针会顺着食管滑入小鼠的胃内。灌胃针插入约3cm.4、用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入小鼠的胃中。剂量：约0.5ml／10g体重。注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。（二）注射给药1、皮下注射给药：原理：将药液注入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环。器材：1m1注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：(1)注射部位：选小鼠项背部的皮下。(2)常规消毒注射部位的皮肤，用注射针头取一锐角角度刺入皮下，(3)将针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。注射量：0.01ml—0.03ml／g体重。2、肌肉注射给药原理：将药液注入动物的肌肉组织，经毛细血管吸收进入血液循环。器材：1ml注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：(1)操作时1人先将小鼠捉持保定好。(2)另1人用左手抓住小鼠的1条后肢，右手拿注射器，常规消毒注射部位的皮肤。(3)将注射器针头在动物后肢大腿外侧肌肉丰富处呈60度角迅速刺入后注入药液。注射量：0.01m1／g体重。3、静脉注射给药原理：将药液注入小鼠的尾静脉。器材：1m1注射器1支、生理盐水、烧杯、金属笼或小鼠固定器、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：(1)将小鼠放在金属笼或小鼠固定器中，通过金属笼或小鼠固定器的孔拉出小鼠尾巴。(2)用左手捏住小鼠尾巴中部，用75％酒精棉球反复擦拭尾部。(3)注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的末梢。(4)右手持4号针头的注射器，使针头与静脉平行（小于30度角）。(5)从小鼠尾巴下1／4处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，即可注入药物。(6)拔出针头后，用干棉球压住注射部位约l、2min，防止出血。注射量：0.005m1—0.01m1／g体重。4、腹腔注射给药原理：将药液注入小鼠的腹腔。器材：注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：(1)用左手将小鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部。(2)右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺。(3)针头刺入皮下后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。(4)固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。注射量：0.01m1—0.02m1／g体重。三、小鼠的采血——摘除眼球采血法：原理：将小鼠的眼球摘除后取血液的方法。器材：眼科弯镊、试管。方法步骤：(1)左手抓住小鼠颈部皮肤，轻压在实验台上，取侧卧位;(2)左手食指尽量将小鼠眼周皮肤往颈后压，使眼球突出。(3)用眼科弯镊夹去眼球，将鼠倒立，用试管接住流出的血液。(4)采血完毕立即用纱布压迫止血。采血量：每次0.6-1.0ml/次。一、大鼠的抓取保定：器材：大鼠饲养盒+面罩1套。方法步骤：1、首先戴好防护手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。3、左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。第二节大鼠二、大鼠的给药方法：(一)灌胃给药原理：将药液直接注入大鼠的胃内。器材：大鼠灌胃针1支、注射器1支、大鼠饲养盒+面罩l套、生理盐水、烧杯。方法步骤：1、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液。2、左手捉持保定大鼠，右手将灌胃针头尖端放进大鼠口咽部，顺咽后壁轻轻往下推，灌胃针会顺着食管滑入大鼠的胃内。灌胃针插入约5cm.3、用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的生理盐水灌入大鼠的胃中。剂量：0.01—0.02ml／g体重。注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。(二)注射给药1、皮下注射给药原理：将药液注入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环。器材：5ml注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：(1)注射部位：选大鼠的项背部的皮下。(2)常规消毒注射部位的皮肤，用注射针头取一锐角角度刺入皮下。(3)将针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。注射量：0.01ml／g体重。2、肌肉注射给药原理：将药液注入动物的肌肉组织，经毛细血管吸收进入血液循环。器材：1m1注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：(1)操作时1人先将大鼠捉持保定好。(2)另1人用左手抓住大鼠的1条后肢，右手拿注射器，常规消毒注射部位的皮肤。(3)将注射器针头在动物后肢大腿内侧肌肉丰富处呈90度角，迅速刺入后注入药液。注射量：0.01m1／g。3、静脉注射给药原理：将药液注入大鼠的尾静脉。器材：1ml注射器1支、生理盐水、烧杯、金属笼或大鼠固定器、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：(1)将大鼠放在金属笼或大鼠固定器中，通过金属笼或鼠夹的孔拉出大鼠尾巴。(2)用左手捏住大鼠尾巴中部，用75％酒精棉球反复擦拭尾部。(3)注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴。(4)右手持4号针头的注射器，使针头与静脉平行(小于30度角)。（5)从大鼠尾巴下1／4或1／3处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，即可注入药物。注射量：0.005—0.01ml／g体重。4、腹腔注射给药原理：将药液注入大鼠的腹腔。器材：注射器1支、生理盐水、烧杯。方法步骤：(1)用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部。(2)右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺。(3)针头刺入皮下后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。(4)固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。注射量：0.01—0.02m1／g体重。三、大鼠的麻醉原理：是使用非挥发性麻醉药对动物进行全麻术的方法。器材：3％戊巴比妥钠、注射器。方法步骤：(1)用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部。(2)右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺。(3)针头刺入皮下后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。(4)固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。四、大鼠的采血眼眶后静脉丛(窦)取血：器材：毛细管(玻璃或塑料均可)、1％肝素溶液、干燥皿、乙醚、试管、干棉球。方法步骤：1、先将毛细管浸泡在1％肝素溶液中数分钟，然后取出干燥备用。2、将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位。3、左手拇指、食指抓住两鼠耳之间的颈部头皮，并轻轻向下压迫颈部两侧，致大鼠静脉血回流障碍，眼球外突，眶后静脉丛充血。4、右手持毛细管由大鼠的内毗部插入结膜，使毛细管与眶壁平行地向喉头方向推进，深度约3—5mm。5、轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出。采血量：0.4—0.6ml／次。一、豚鼠的抓取保定：器材：大鼠饲养盒+带面罩l套。第三节豚鼠方法步骤：1、先用左手轻轻扣、按住豚鼠背部。2、顺势抓紧其肩胛上方皮肤，拇指和食指环箍其颈部。3、用右手轻轻托住其臀部，即可将豚鼠抓取保定。二、豚鼠的给药方法：(一)灌胃给药原理：将药液直接注入豚鼠的胃内。器材：大鼠灌胃针1支、注射器1支、生理盐水、烧杯。方法步骤：1、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的生理盐水。2、左手捉持保定豚鼠，右手将灌胃针头尖端放进豚鼠口咽部，顺咽后壁轻轻往下推，灌胃针会顺着食管滑入大鼠的胃内。灌胃针插入约5cm。3、用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的生理盐水注入豚鼠的胃中。剂量：1—5ml。注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。(二)注射给药1、皮下注射给药原理：将药液注入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环。器材：1m1注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：(1)注射部位：选豚鼠的项背部的皮下。(2)常规消毒注射部位的皮肤，注射针头取一锐角角度刺入皮下。(3)将针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。注射量：0.01ml／g。2、肌肉注射给药原理：将药液注入动物的肌肉组织，经毛细血管吸收进入血液循环。器材：1m1注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：(1)操作时1人先将豚鼠捉持保定好。(2)另1人用左手抓住豚鼠的1条后肢，右手拿注射器，常规消毒注射部位。(3)将注射器针头在动物后肢大腿外侧肌肉丰富处呈60度角，迅速刺入后注入药液。注射量：0.01ml／g。一、兔的抓取保定：(一)方法1：步骤：1、用右手把兔的两耳拿在手心并抓住颈后部皮肤，把兔提起。2、然后用左手托住兔的臀部。第四节兔(二)方法2：器材：兔保定架1个。步骤：1、打开保定架的上盖，抓取并将兔放进架内，迅速关上保定架的上盖。2、右手抓住兔耳朵将头部拉过保定架的卡栓，将兔的脖子保定。3、如果兔挣扎，可用手在它的背上轻轻抚摸，使其安静。二、兔的给药方法(一)灌胃给药原理：将药液直接注入兔的胃内。器材：兔开口器、14号胃管、注射器1支、生理盐水、烧杯、石蜡油。步骤：1、将兔放进保定架内，助手用手轻轻压住兔的背部，避免兔的挣扎。2、灌胃者用在手拇指和中指挤压兔两颊，将下颌挤开使兔被动张口。3、右手将开口器从一侧口角插入口腔并固定。4、用泡在石蜡油中的胃管，经开口器的孔插入，向前推进约15cm，可达胃内。5、在插管时应将胃管另一端泡在水中确认没有冒气泡，即可用注射器经胃管注入药液。灌胃量：80-150ml／只／次。注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。三、兔耳缘静脉或兔耳中央动脉穿刺（用于兔的给药、抽血）：原理：穿刺兔的耳缘静脉或耳中央动脉。器材：兔保定架、注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：(1)将兔放在保定架内保定。(2)酒精消毒并揉搓血管，使兔的耳缘静脉或耳中央动脉充盈。(3)用左手食指和中指夹住兔的耳缘静脉或耳中央动脉近心端