分子生物学复习题及答案

一.病毒癌基因与细胞癌基因的比较？①C-onc是真核结构基因含有内含子，V-onc不含内含子。②V-onc出现碱基取代或缺失较C-onc常见，因此表达产物功能有差异。③V-onc外显子与同源的C-onc也有微小差别，V-onc表达的蛋白质有较强的细胞转化活性，C-onc的产物正调节细胞增殖。二．细胞癌基因的特点？①广泛存在于生物界，从酵母到人的细胞普遍存在。②基因序列在进化上高度保守。③C-onc是生命活动的基础，与细胞增殖分化密切相关，其表达与个体发育有关，受到严格程序调控，但并不具有致癌性。④某些物理、化学及感染性因素能能使原癌基因激活。三.肾素血管紧张素对高血压的影响？肾素-血管紧张素系统（RAS）由肾素、血管紧张素原、血管紧张素转化酶、血管紧张素及其相应的受体构成。肾素激活从肝脏产生的血管紧张素原，生成血管紧张素Ⅰ，然后经肺循环的转化酶（ACE）生成血管紧张素Ⅱ。作用于血管紧张素Ⅱ受体，使小动脉平滑肌收缩，刺激肾上腺皮质球状带分泌醛固酮，通过交感神经未梢突触前膜的正反馈使去甲肾上腺素分泌增加，从而导致血压升高。六.细胞型和搔痒型的区别？细胞型（正常型prpc）和搔痒型（致病型prpsc）。两者蛋白质在一级结构完全相同，其共价键也无变化，差异在三级结构。主要表现螺旋和折叠的含量不同。Prpc的α-螺旋占42%，β-折叠为3%，而prpsc的α-螺旋占30%，β-折叠增加为45%，为prpc分布于脑等组织细胞表面，而prpsc则存在于细胞内次极容酶体内。九.PBR322与PUC18/19的结构特点？①含有两个抗生素抗性基因：氨苄青霉素基因，四环素基因；具有较小分子量，容易纯化；具有较高的拷贝数；复制起始点，保证高拷贝自我复制。②来源PBR322质料复制起始点；虽含有AMPr基因，但它的核苷酸序列发生变化，不含有酶切位点；含有半乳糖苷酶基因的启动子及其编码的α-肽链DNA序列，同称为LacZ基因。LacZ基因中，靠近5′端有一段多克隆位点（Mcs区段），影响其功能。十．限制性内切酶的发明者、定义、命名、切割产物及其修饰酶？①威尔挪、史密斯、内森斯。②限制性核酸内切酶（RE）是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶，简称为限制性内切酶。③第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写；第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写；第四个字母代表株；最后用罗马数字表示发现的先后次序。④切割产物：粘性未端、钝性未端。⑤修饰酶：未端脱氧核苷酸转移酶（TdT），碱性磷酸酶，多聚核苷酸激酶（PNP），核糖核酸酶（RNase），脱氧核糖核酸酶（DNase）。十二.转化：重组载体导入原核细胞的过程。转染：重组载体导入真核细胞的过程。感染：病毒载体导入细胞的过程。十三.蓝白斑筛选法？载体PUC18/19含：β－半乳糖苷酶基因（Lacz）的调控序列及其N端的146个AA的α-肽编码区；外源DNA克隆位点MCS位于其中、并保留了α-肽的功能；转化在β－半糖苷酶基因缺失突变株、由于质粒表达的α-肽可以补充菌株缺失的α-肽、所以编码具有活性的β-半乳糖苷酶、催化半乳糖的分解。在加入β-半乳糖苷酶基因表达诱导剂－IPTG（异丙基硫代β－半乳糖苷）和底物X-gal（5溴4氯3吲哚β－半乳糖苷）时、分解的产物产生蓝色菌落。称为α-互补效应。MCS插入外源DNA片断时，β－半乳糖苷酶基因失活、不能产生α－肽、即不能转录活性的β－半乳糖苷酶、在加入诱导剂和底物的平板上不再出现蓝色菌落、而是白色菌落。称为插入失活。十八.DNA印迹、RNA印迹、Pro印迹的异同？DNA印迹与RNA印迹的区别：①变性：RNA电泳前加热变性，电泳时加变性剂保持RNA处于变性状态；DNA电泳后变性②转膜：RNA转膜前不需要变性和中和处理；DNA转膜前需要碱变性和中和处理。③限制性内切酶：RNA不需要内切酶切割。④靶核酸：RNA；DNA蛋白质印迹技术与DNA和RNA不同的是，蛋白质的转移只有靠电转移方可完成。另外，蛋白质的检测是以抗体做探针的，然后再与用碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶标记或同位素标记的第二抗体反应，最后用放射自显影，底物显色或底物发光来显示目的蛋白的有无和所在位置。十九.基因组文库和CDNA文库的比较？基因组文库：某种生物DNA顺序的不同的DNA片段所构建的群体，即克隆足够多基因或某种基因的总和，包括外显子和无表达功能内含子序列。步骤：①纯化真核细胞DNA，并用适当的限制酶部分消化②分离适当大小的基因组片段③载体DNA，用适当的限制酶消化并分离得到载体④载体与基因组DNA片断连接⑤体外包装及感染⑥基因组文库的扩增。构成了该生物的基因组文库。CDNA文库：生物体全部mRNA经逆转录合成的CDNA序列的克隆群体。CDNA文库中的每一个克隆只含一种mRNA信息。步骤：①从生物体或细胞中提取mRNA，mRNA具有尾巴结构，应用寡聚dT互补配对，纯化mRNA②利用逆转录酶以寡聚（dT）或随机寡聚核苷酸为引物合成CDNA的第一条链。③利用DNA聚合酶Ⅰ，以CDNA第一条链为模板，用适当引物，即可合成第二条链。④CDNA与载体的体外连接，CDNA不含基因的启动子和内含子，因而序列比基因短，其克隆载体可选用质粒或病毒载体⑤重组体进入宿主细胞扩增二十.转基因与核转移技术的比较？“克隆”和“转基因”之间最大的不同是前者纹丝不动地保留了原来的遗传性状，而后者则改变了原来的遗传性状。克隆是无性繁殖，克隆动物是不经过生殖细胞而直接由体细胞获得的新个体；而转基因动物和普通动物的区别只在于受精卵或胚胎干细胞中转入另外的基因。二十一.基因敲除技术基本步骤？①构建与靶基因同源的载体②用电穿孔，显微注射等方法把重组DNA转入受体细胞核内③筛选中的细胞插入到受精卵或胚胎中④杂交育种二十三.简述基因工程的基本步骤？①目的基因的获取②载体的构建③目的基因与载体的连接成重组体④重组体导入宿主细胞进行扩增⑤克隆基因的筛选和鉴定二十四.cAMP-蛋白激酶A通路组成要素及其传递过程？组成要素：胞外信息分子（第一信使）、膜受体、G蛋白、腺苷酸环化酶、第二信使—cAMP蛋白激酶A传递过程：激素作为胞外信息分子（第一信使）与其相应的靶细胞上膜受体催化Gs的GDP与GTP交换，导致Gs的a亚基与Br解离。释放出as—GTP;as—GTP激活腺苷酸环化酶，催化ATP转化为cAMP,使细胞内的cAMP增高；cAMP通过变构激活cAMP依赖性蛋白激酶（PKA），使目标蛋白磷酸化，实现其调节作用。二十五.cAMP—PKA的作用？cAMP—PKA的作用主要表现在对代谢的调节作用和对基本表达的调节作用。对代谢的调节作用主要表现在糖代谢方面：①使糖原合酶磷酸化，抵制糖原合成②使糖原磷酸化酶b转化为有活性的糖原磷酸化酶a，促进糖原分解。对基因表达的调节：当PKA的催化亚基进入细胞核后，可催化反式作用因子—CREBR（cAMP应答元件结合蛋白）中特定的丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化，磷酸化的CREB形成同源二聚体，与DNA上CRE(cAMP应答元件)结合，从而激活基因转录。二十八.JAK—STAT途径基本要素及传递过程？基本要素：胞外信息分子，非催化性受体，JAKs，信号转导子和转录激动子基本过程：细胞因子或生长因子+R→受体二聚化→JAK→STAT→基因转录活性改变→细胞生理功能改变三十.噬菌体的结构及其特点？噬菌体是一种可在体外包装的细胞病毒，能高效感染细菌细胞并在其中克隆中等长度的DNA片段的载体。λ噬菌体DNA长约50kb，为线性双链DNA分子，每条链各带有12bp长的单链互补末端，称为cos序列，进入宿主细胞后，通过粘性末端的配对而环化。特点：①本身有复制体系;②中间(J-N间)是λ生长非必需区,可被其它外源DNA取代;③λDNA在体外可包装成病毒颗粒,感染效率高;④载体容量大,可装入大片段外源DNA(20kb);①可人工加入多克隆位点;②筛选容易——噬菌斑筛选;三十一.霍乱对信号传导的关系？霍乱毒素进入小肠上皮细胞以后直接作用于Gs的a亚基，使其发生ADP核糖化修饰。A亚基受到修饰后，其固有的GTP酶活性丧失，不能恢复到GDP结合形式，因而Gs处于持续活化状态，细胞中的cAMP含量持续升高。Camp的效应之一是通过PKA作用于小肠上皮细胞膜上的蛋白质磷酸化而改变细胞膜的通透性，Na+通道和氯离子通道持续开放，造成水与电解质的大量丢失，引起腹泻和水电解质紊乱等症状。