分子生物学重点

分子生物学重点一、名词解释1、冈崎片段：是在DNA半不连续复制中产生的长度为1000—2000个碱基的短的DNA片段，能被连接形成一条完整的DNA链。3、重组DNA技术：又称基因工程，将不同的DNA片段（如某个基因或基因的一部分）按照预先的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状的技术。4、穿梭质粒：一个质粒含有两种宿主细胞的复制起点，可在两种细胞中复制和存在，谓之穿梭质粒。5、锌指结构：锌指结构家族蛋白大体可分为锌指、锌钮和锌簇结构，大约由30个氨基酸残基构成的蛋白质超二级结构，其中两个Cys（半胱氨酸）和两个His与锌离子结合形成四面体锌指结构参与DNA的合成6、螺旋—转折—螺旋结构：这一类蛋白质分子中有至少两个a螺旋，中间由短侧连氨基酸残基形成“转折”，近羧基端的a螺旋中氨基酸残基的替换会影响该蛋白质在DNA双螺旋大沟中的结合。7、SD序列：存在于原核生物起始密码子AUG上游7—12个核苷酸处的一种4—7个核苷酸的保守片段，它与16SrRNA3’端反向互补，所以可将mRNA的AUG起始密码子置于核糖体的适当位置以便起始翻译作用。8、RNA干扰（RNAi）：是利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA，从而阻断体内靶基因表达，使细胞出现靶基因确实表型的方法。9、PCR：聚合酶链反应，一种在体外（试管、切片…）扩增核酸的技术10、基因芯片：在一微小基片的表面集成大量DNA分子探针，能够在同一时间内平行分析大量的基因，进行大信息量的筛选与检测分析。（指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后对杂交信号的监测分析，即可获得样品的遗传信息。）11、复制子：单独复制的一个DNA单元被称为一个复制子，它是一个可移动的单位，一个复制子在任何一个细胞周期只复制一次。12、启动子上升突变：TATGTT→TATATT,转录效率上升,为上升突变启动子下降突变：TATAAT→AATAAT,转录效率下降,称为下降突变13、编码链（有意义链）：与mRNA序列相同的DNA链。14、反义链（模板链）：为模板指导mRNA合成的DNA链。15、C值反常现象：也称为C值谬误。指C值往往与种系的进化复杂性不一致的现象，即基因组大小与遗传复杂性之间没有必然的联系，某些较低等的生物C值却很大，如一些两栖动物的C值甚至比哺乳动物还大。16、分子接头：在DNA的末端加上一段限制性内切酶的识别序列，随后用限制酶切出所需要的粘性末端，使DNA的平端连接得以转变成为较易进行的粘性末端连接。这种含限制酶识别序列的DNA片段称为接头。17、限制性内切酶：是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的脱氧核糖核酸内切酶。18、剪接体：在剪接过程形成的剪接复合物称为剪接体，剪接体的主要组成是蛋白质和核内小分子RNA（snRNP）。19、感受态细胞：能够高效吸收外界DNA的细胞，是一种生理状态，可以人工诱获。20、RNA编辑：使mRNA的序列发生不同于模板DNA的变化，导致了遗传信息的改变。（指mRNA在转录后因插入、缺失或核苷酸的替换，改变了DNA模板来源的遗传信息，从而翻译出氨基酸序列不同的多种蛋白质。）21、原位杂交技术（ISH）：用标记的核酸探针（放射自显影或非放射性技术），在组织、细胞、间期核及染色体对核酸进行定位和相对定量分析。22、5’帽子结构：转录起始以A为主，G为次，所形成的转录物的5’端并非5’PPPAPNPNP----，而是5’-5’三磷酸联接起来的二核苷酸，加上去的是“G”，是由鸟苷酸转移酶完成。以倒扣方式，一般是5’-3’连接。特定位置甲基化后就成为“帽子”。23、尾巴结构：大多数真核mRNA具有polyA尾巴（polyA+），但亦有少部分没有（polyA-）。长度40～200，由RNA末端腺苷酸转移酶合成，非模板合成。在有AAUAAA的保守序列下游10～25核苷酸处切断，并加polyA。24、重叠基因:具有部分共用核苷酸序列的基因，即同一段DNA携带了两种或两种以上不同蛋白质的编码信息。25、碱性-亮氨酸拉链：蛋白羧基端35个氨基酸残基形成α螺旋，每隔6个有一个亮氨酸残基，形成亮氨酸位于一边的α螺旋（相当于拉链的一半），与另一相同的蛋白的α螺旋结合，由两个α螺旋的亮氨酸一侧形成疏水区（形成拉链）；蛋白的氨基端20～30富含碱性氨基酸。26．cDNA：在体外以mRNA为模板，利用反转录酶和DNA聚合酶合成的一段双链DNA27、DNA半保留复制：DNA在复制过程中，每条链分别作为模板合成新链，产生互补的两条链。这样形成的两个DNA分子与原来DNA分子的碱基顺序完全一样。因此，每个子代分子的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的，这种复制方式被称为DNA的半保留复制。28、DNA的半不连续复制：DNA复制的过程中前导链的复制时连续的，而另一条链，即后随链的复制是中断的，不连续的。29、RACE：是利用PCR技术在已知部分cDNA序列的基础上特异性克隆其5‘端或3‘端缺失序列的方法。30、T-DNA：根癌农杆菌Ti或Ri质粒中的一段DNA序列，可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组中，是植物分子生物学中广泛应用的遗传转化载体。31、安慰性诱导物：指的是与转录调控中实际诱导物相似的一类高效诱导物，但不是该诱导酶的底物。32摆动假说：crick为了解释反密码子中某些稀有成分（如I)的配对以及许多氨基酸有2个以上密码子的问题而提出的假说33操纵子:是指原核生物中由一个或多个相关基因以及转录翻译调控元件组成的基因表达单元。34单顺反子mRNA：只编码一个蛋白质的mRNA称为单顺反子mRNA。35蛋白质磷酸化：指由蛋白质激酶催化的把ATP或GTP上γ位的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基上的过程，是生物体内一种普遍的调节方式，在细胞信号转导的过程中起着重要作用。36多聚A位点（polyA位点）:在多聚A聚合酶的催化下，在mRNA前体3‘端接上一个约200~250个腺嘌呤核苷酸（A）的尾巴，起到稳定mRNA的作用。37多顺反子mRNA：一种能作为两种或多种多肽链翻译模板信使RNA，由DNA链上的邻近顺反子所界定。38反式作用因子：是指能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。39复制叉：复制时，双链DNA要解开成两股链分别进行DNA合成，所以，复制起点呈叉子形状，被称为复制叉子。40核小体：是染色质的基本结构单位，由大约200bp的DNA和组蛋白八聚体及外围H1蛋白所组成。41后随链：在DNA复制过程中，与复制叉运动方向相反的方向不连续延伸的DNA链被称为后随链或滞后链。42基因定点突变：向靶DNA片段中引入所需的变化，包括碱基的添加。删除或改变，是分子生物学研究中一种非常有用的手段。43基因克隆：在分子生物学上，人们把将外源DNA插入具有复制能力的载体DNA中，转入宿主细胞使之得以永久保存和复制的过程称为基因克隆。44顺反子：功能基因，意为通过顺式（基因序列）及反式（所编码的蛋白质）实验所确定的一个遗传学单位。45顺式作用元件：存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列，包括启动子，增强子，调控序列和可诱导元件等，本身不编码任何蛋白质，仅仅提供一个作用位点，与反式作用因子相互作用参与基因表达调控。46引发酶：是依赖于DNA的RNA聚合酶，其功能是在DNA复制过程中合成RNA引物。47引发体：DNA复制过程中引发合成每个冈崎片段时所需的多蛋白复合物，包括预引发蛋白、具有ATP酶活性的蛋白质以及引物酶。48引物：是指一段较短的单链RNA或DNA，它能与DNA的一条链配对提供游离的3‘-OH末端以作为DNA聚合酶合成脱氧核苷酸链的起始点。1.将外源基因导入的方法常用的基因工程真核细胞包括酵母细胞、动物细胞和植物细胞。（1）外源基因导入酵母细胞：在对酵母细胞进行外源DNA转化时，一般先需要用酶将其细胞壁消化水解，变成原生质体。蜗牛消化酶具有纤维素酶、甘露聚糖酶、葡萄糖酸酶以及几丁质酶等，对酵母菌细胞壁有良好水解作用。原生质体在氯化钙和聚乙二醇存在下，重组DNA能容易地被宿主细胞吸收，转化的原生质体悬浮在营养瓶中，即可再生出新的细胞壁。（2）外源基因导入动物细胞常用的方法有：1.磷酸钙共沉淀法。2.DEAE-葡聚糖或聚阳离子，它们能结合DNA并促使细胞吸收；3.脂质体法4.脂质转染法5.电穿孔法6.显微注射法（3）外源基因导入植物细胞常用的方法有：1.转化法2.电穿孔和脂质体法3.显微注射法5.基因枪法4.农杆菌感染法：根瘤农杆菌的Ti质粒上有一段T-DNA，又称转移DNA，能携带外源基因转移到植物细胞内，并整合到染色体DNA中，因此Ti质粒是目前植物基因工程中最常用的理想的基因载体。2.核糖体活性中心（核糖体的活性位点）（1）mRNA结合位点（2）P位点（3）A位点（4）肽基转移酶活性位点（转肽酶中心）（5）5SrRNA位点（50S上）（6）E位点（50S上）与氨酰基－tRNA释放有关。大小亚基在合成中的分工小亚基：对mRNA特殊序列的识别（SD序列）密码子与反密码子的相互作用。大亚基：AA-tRNA，肽基－tRNA的结合，肽键的形成等。3.凝胶电泳（操作的主要因素）技术原理流程图目的：分离不同的DNA分子电泳迁移率：电泳分子在电场作用下的迁移速度。影响迁移率的因素：（1）与电场强度、电泳分子净电荷成正比；（2）与电泳分子的摩擦系数成反比分子摩擦系数为分子大小、极性、介质粘度的函数。.DNA和RNA在电场中为多聚阴离子，电泳时向正极移动。速度在于分子大小和构型。.电泳介质：一般用琼脂糖和聚丙烯酰胺，浓度与所分离的DNA和RNA的大小有关。（表）.染色剂：溴乙锭4.噬菌体，cDNA文库建立的基本过程：cDNA：以mRNA为模板，利用逆转录酶（反转录酶）合成的DNAcDNA文库（过程）：由cDNA的一套随机片段构成，其中每个片断连在一个单独的载体分子上，储存在宿主（大肠杆菌、噬菌体等）中。建立cDNA文库的意义：含有生物大部分基因，不含内含子序列，方便基因的筛选、克隆；特别可以获得特殊器官、组织和特殊时期表达的基因等。主要技术步骤：（1）高质量mRNA的制备（2）反转录生成cDNA（3）与噬菌体载体分子连接（4）噬菌体的包装3．DNA和cDNA文库的建立A基因组DNA文库：将某生物的基因组DNA切成适当大小，分别与载体组合，导入微生物细胞形成克隆。汇集包含基因组中所有DNA序列的克隆的汇总，就谓之。用途：基因组测序，特定基因的分离等。步骤：1.制备大小合适的随机DNA片段；2.将这些片段与适当载体结合形成重组子；3.转化到微生物细胞中；4.筛选有目的片段的克隆。（图）要求：全部克隆所含的DNA片段必需覆盖整个基因组。随机切割和增加克隆数目可以提高代表性。载体与克隆能力：λ噬菌体15～20kb柯斯质粒45kb细菌人工染色体（BAC）酵母人工染色体（YAC）等70～1000kbRACE技术基因敲除技术：基因敲除又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点基因芯片：在一微小基片的表面集成大量DNA分子探针，能够在同一时间内平行分析大量的基因，进行大信息量的筛选与检测分析。（指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后对杂交信号的监测分析，即可获得样品的遗传信息。）RNAi技术原理乳糖操纵子。、、反式作用因子顺式作用元件13.DNA的大小沟的作用P34形成沟状结构是DNA与蛋白质相互作用所必需的，这样DNA结合蛋白与DNA修饰蛋白中特定的氨基酸才能与对应的碱基相互作用。前导链，后随链：RNA引物合成物质mRNA修饰填空题1.已知核糖体上有哪些活性部位？它们在多肽合成中各起什么作用？答：核糖体上具有一系列与蛋白质合成有关的结合位点