关于梅毒的实验室检测

关于梅毒的实验室检测成都商报在2007年5月9日第5版中有这样一篇文章—“是梅毒，是没‘毒’女大学生考警蹊跷被刷”。讲的是小梅在淮南市第一人民医院进行考警体检中被误诊（或是错诊）为梅毒的事。其报道中对梅毒的实验室检查部份的叙述存在一定程度的误导，因此我们针对梅毒的病原体、实验室检查及检验方法等相关内容进行了组稿。来进一步加深对梅毒实验室诊断的认识。一、螺旋体的分类、寄生部位螺旋体的分类及传播方式属致病性螺旋体种类传播方式或媒介所致疾病螺旋体脊螺旋体密螺旋体梅毒螺旋体性传播梅毒雅司螺旋体皮肤损伤雅司病品他螺旋体皮肤损伤品他病地方性螺旋体粘膜损伤地方性梅毒疏螺旋体伯氏疏螺旋体硬蜱莱姆病回归热螺旋体体虱流行性回归热赫姆疏螺旋体软蜱地方性回归热奋森疏螺旋体机会感染多种口腔感染钩端螺旋体问号钩端螺旋体皮肤粘膜钩端螺旋体病细丝体短螺旋体小蛇形螺旋体二、生物学特性梅毒螺旋体即苍白密螺旋体的苍白亚种，人是其唯一宿主。直径0.1—0.15μm，全长7--8μm。在电镜下可见有细胞壁和细胞膜。新鲜标本在暗视野显微镜下可观察其形态和活泼的运动方式。梅毒螺旋体主要有两种抗原：1、密螺旋体抗原即梅毒螺旋体表面的特异抗原，与雅司、地方性梅毒、品他病等3种密螺旋体有共同抗原，可交叉反应。2、非螺旋体抗原即磷脂类抗原，可刺激机体产生反应素，其与牛心肌的心脂质抗原发生反应，此法敏感性高，但有假阳性。梅毒螺旋体对外界的抵抗力极弱，离体后1—2小时即死亡，对热和干燥特别敏感，在体外干燥环境下1—2小时或加1.5℃经1小即死亡。血液中4℃放置3天可死亡，因此4℃血库存放3天以上的血液无传染梅毒的危险。对肥皂水和常用化学消毒剂亦敏感，1%--2%石炭酸内数分钟就死亡。梅毒的免疫属感染性免疫，有梅毒螺旋体感染时才有免疫力，一旦螺旋体被杀灭，其免疫力随之消失。机体对梅毒螺旋体感染可产生细胞免疫和体液免疫反应，体液免疫中有两种抗体：一种是梅毒特异性抗体，主要是IgG、IgM，对螺旋体有制动作用，当有补体存在时，可将其杀死和溶解，对机体的再感染有保护作用。另一种是抗脂质抗体的反应素，为IgG和IgM的混合物，对机体无保护作用。三、送检标本和检验方法Ⅰ期梅毒病人取硬下疳渗出液，Ⅱ期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴抽出液。对Ⅰ期梅毒末期以后（大约感染3—4周以后）的病人可分离血清检查有无梅毒螺旋体抗体和反应素。检验方法：1、显微镜镜检渗出液涂片后可直接用暗视野显微镜检。直接镜检适合ⅠⅡ期梅毒的检查。（现已经不常用）2、血清学试验包括非螺旋体抗体和密螺旋体抗体两类1）非螺旋体抗体试验（NtrAT）用正常牛心肌脂质作为抗原，测定病人血清中的反应素。均为初筛试验。2）密螺旋体抗体试验（TrAT）采用Nichols株梅毒螺旋体作为抗原，测定血清中梅毒螺旋体特异抗体，特异性强，可用作梅毒证实试验。试验方法分类类型试验名称NtrATVDRL（性病研究实验室试验）RPR（快速血浆反应素试验）四、方法学比较1.非螺旋体抗体试验（NtrAT）这类方法敏感性高，其抗体滴度与病（测抗类脂抗体）TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）USR（不加热血清反应素试验）TrAT（测抗T.pallidum抗体）TPHA（梅毒螺旋体血凝试验）TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集试验）TP-ELISA（酶联免疫法）FTA-ABS（荧光密螺旋体抗体吸收试验）WB（免疫印迹试验）金标记免疫层析法变活动性有关，病灶出现后1-2周就可测出反应素，Ⅰ期梅毒阳性率约为70%，Ⅱ期梅毒阳性率可达100%，Ⅲ期梅毒阳性率较低，先天性梅毒阳性率可达80%-100%，但此类试验特异性不高，常有假阳性反应。因此，在分析结果时应结合病史和临床症状，并做密螺旋体抗原试验加以确诊。2.密螺旋体抗体试验（TrAT）1）TPHA（梅毒螺旋体血凝试验）是一种间接血凝试验，以SRBC为载体，将梅毒螺旋体Nichols株，经纯化后超声击碎成密螺旋体抗原，致敏SRBC，加入待检病人血清作间接血凝试验，具有敏感性高，快速，简便，易于观察等特点。2）TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集试验）与TPHA基本相同。3）WB（免疫印迹试验）是分子水平的试验，本法综合了SDS-PAGE的高分辩力和ELISA的高特异性和敏感性，对梅毒的确诊，尤其对早期梅毒的确诊具有特殊的价值，对二期，三期梅毒的诊断率很高。4）FTA-ABS（荧光密螺旋体抗体吸收试验）为间接荧光抗体检测法。本法敏感性和特异性均高，是Ⅰ期，Ⅱ期梅毒首先出现阳性反应的血清学试验，且病人经药物治疗后，反应仍不转阴，可用于确诊但不能用作疗效评价。密螺旋体抗原试验的特异性虽强，但仍不能区分雅司、地方性梅毒、品他病，也可有1%生物学假阳性存在。因此，这些试验的结果的判定，仍需结合临床资料来分析。梅毒血清学试验假阳性的原因原因非密螺旋体抗体试验(NTrAT)密螺旋体抗体试验(TrAT)自身免疫病疟疾新近免疫接种皮肤病心血管病结核麻风静脉注射毒品病毒感染热性病妊娠HIV感染＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－＋＋－＋－－＋－－其他性传播病老年人多次输血莱娒病地方性密螺旋体病原因不明技术误差＋－＋－＋＋＋－＋－＋＋＋＋根据后附论文“梅毒实验室诊断及评价”的资料显示RPR阳性率为94.2%，TRUST阳性率为93.0%,4种非特异性检测方法敏感性均在95%左右。虽然从数据中看到用进口RPR试剂在对照血清组有10例的假阳性（占8.7%），看似较高。但其准确性也有91.22%，也是令人较满意的试剂。国产的RPR和TRUST在各项指标上的差异无统计学意义。因TRUST有操作简单，用时短，结果容易观察等特点被临床实验室广范的接受（卫生部门推存用RPR或VDRL）。RPR、TRUST试剂对不同血清标本的检测结果组别例数RPR（进口）RPR（国产）TRUST1TRUST2＋－＋－＋－＋－对照血清11410104211221122112TPPA法对梅毒患者诊断敏感性为83.72%,TP-ELlSA法敏感性为87.21%,WB法敏感性为100%。3种特异性抗体检测法特异性均为100%（即假阳性率为0%）。在三种方法的对比中可以看出WB法是最好的，但其操作复杂费时，对实验设备和实验条件要求较高等客观条件约束，因此在临床实验室中运用较少。3种特异性抗体检测方法对不同血清标本的检测结果标本份数TPPAELISAWB法＋－＋－＋－对照血清114011401140114Ⅰ期梅毒血清261971610260Ⅱ期梅毒血清32275320320Ⅲ期梅毒血清6606060不明期梅毒血清中存检22202211220Ⅰ期梅毒血清26224224224224Ⅱ期梅毒血清32320320320320Ⅲ期梅毒血清660606060不明期梅毒血清中存检22211202202202五、梅毒螺旋体实验指标的临床应用对这些实验指标的临床应用中常会出现以下情况：1）单独用筛查试验（如：RPR试验、TRUST试验等非密螺旋体抗体试验）进行梅毒的诊断。2）认为筛查试验不好，没有临床应用价值，就在临床实践中丢弃它。3）只做确诊试验（密螺旋体抗体试验：TPPA,TPHA，TP-ELISA等），阳性一定就是梅毒现症感染。目前，RPR试验和TRUST试验主要用于梅毒患者的筛查，虽然对梅毒的诊断缺乏特异性，但其在确诊后对治疗的疗效判定有重要意义。只要了解其造成假阳性的原因，结合病历资料分析，就能尽可能的减少假阳性造成的不良后果。常用的梅毒特异性抗体检测方法是传统经典的TPPA,TPHA,TP-ELISA，FTA-ABS方法，只做特异性抗体检测无法确定是否现症感染。对于梅毒的确诊需同时做NtrAT和TrAT两种检测，并结合临床表现综合判断。筛选试验和确诊试验实验结果解释如下：实验结果意义NTrAT＋TrAT－NtrAT假阳性NTrAT＋TrAT＋现症梅毒；治愈的晚期梅毒NtrAT－TrAT＋极早期梅毒；治愈后的梅毒NtrAT－TrAT－排除梅毒感染；极早期梅毒；AIDS合并梅毒现在在梅毒的实验室诊断方面已经比较成熟。我们实验室针对梅毒的实验室诊断运用了三种试验方法（TRUST、TPPA、RPR）。只有根据实验特点、临床需要来选择试验方法，才能充分发挥其优势。为临床诊断提供有力证据。