免疫学检验的质量控制.

人民卫生出版社第三十章免疫学检验的质量控制人民卫生出版社1.掌握免疫学检验质量控制的相关概念。2.掌握标准品的分类及基本条件。3.掌握定量、半定量和定性免疫检验的方法类型4.熟悉室间质量评价的方式、评分及意义。5.学会常用的免疫学质控图类型、结果判断及失控的处理程序。6.熟练实验室确定人群中Cutoff值的主要方法本章要点人民卫生出版社返回总目录目录免疫学检验质量控制的概念1免疫检验质量控制的特殊性2免疫学实验常用评价指标3室内质量控制4室间质量评价5实验室质量控制数据的管理和信息系统6人民卫生出版社•免疫学检验是临床检验中一大类重要的常规检查,对疾病的诊断、筛查、监测疾病的发展过程和观察患者对治疗的反应等方面发挥着重要的作用。•如何保证检验结果的质量，在日常检测中如何贯彻实施质量保证是免疫学检验的一个重要内容。前言人民卫生出版社第一节免疫学检验质量控制的概念•免疫检验要保证检验结果的准确、可靠、及时、有效，并尽可能使各实验室间检验结果有可比性，这是免疫学检验质量控制的基本目的。•只有明确免疫学检验质量控制的有关概念，才能真正理解免疫检验的质量控制，有助于准确、有效地完成质量控制工作。人民卫生出版社一、基本概念•准确度（accuracy）待测物的测定值与其真值的一致性程度。•精密度（precision）一定条件下所获得的独立的测定结果之间的一致性程度。准确度好的实验，其精密度不一定好，反之亦然人民卫生出版社准确度好的实验，其精密度不一定好；准确度差的实验，其精密度则不一定差；反之亦然。测定的精密度与准确度之间的关系人民卫生出版社•偏倚（bias）待测物的测定值与可接受参考值之间的差异。可分为批内偏倚和批间偏倚，计算公式如下：•均值（mean）一组测定值中所有值的平均值。计算公式如下：nxxi）均值（人民卫生出版社•标准差（standarddeviation，SD或S）又称标准偏差，用来表示一组测定数据的分布情况，即离散度。它是反映一组数据的精密度和离散程度的最主要指标。其计算公式如下：数据的分布情况。222)(1111)(iiixnxnSDnxxSD或人民卫生出版社•变异系数（coefficientofvariation，CV）标准差与平均值之比用百分比来表示，即为变异系数。CV是相对比，没有单位，更便于资料间的分析比较。%100xSDCV人民卫生出版社•误差（error）待测物的测定值与客观存在的真值之间的差异。误差包括系统误差和随机误差。系统误差是实验过程中产生的误差，它的值恒定不变或遵循一定的变化规律，通常是由仪器、方法以及操作人员等因素引起。随机误差则是一类不恒定的，随机变化的误差，主要是由实验人员的操作等随机因素所致，该误差的出现难以完全避免和控制。人民卫生出版社•重复性条件（repeatabilityconditions）在短的间隔时间内,在同一实验室对相同的测定项目使用同一仪器设备，由相同的操作者获得相互独立的测定结果的条件。•批（run）在相同条件下所获得的一组测定。人民卫生出版社•正态分布(gaussiandistribution)又称高斯分布，指当一质控物用同一方法在不同的时间重复多次测定，当测定数据足够多时，以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦即正态分布。•正态分布的基本统计学含义可用均数（）、标准差（s）和概率来说明，均数是位于曲线的正中线所对应的值。X人民卫生出版社正态分布是质量控制图的理论依据，也是许多统计方法的理论基础，正常情况下测量（或实验）误差服从正态分布。人民卫生出版社二、质量保证的有关概念•质量保证（qualityassurance，QA）致力于为某一产品或服务满足特定的质量要求，提供充分可信性所要求的有计划和系统的措施。人民卫生出版社•最佳变异条件(optimalconditionsvariance，OCV)是指在仪器、试剂和实验操作者等可能影响实验结果的因素均处于最佳时，连续测定同一浓度同一批号质控物20批次以上，即可得到一组质控数据，经计算可得到其均值()、标准差(s)和变异系数（CV），此CV即为OCV。X人民卫生出版社•常规条件变异(routineconditionsvariance，RCV)是指在仪器、试剂和实验操作者等可能影响实验结果的因素均处于通常的实验条件下时，连续测定同一浓度同一批号质控物20批次以上，即可得到一组质控数据，经计算可得到其均值()、标准差(s)和变异系数（CV），此批间CV即为RCV。X人民卫生出版社•质控品（qualitytestingmaterisls）又称质控物，是指含量已知并处于与实际标本相同的基质当中特性明确的物质，这种物质通常与其他杂质混在一起，故质控品必须按患者标本一样对待进行检测。1、室内质控品：用于临床实验室标本检测误差的控制2、室间质评样本：评价实验室常规测定的准确度3、质控血清盘：用于特定的定性免疫测定试剂盒的评价人民卫生出版社第二节免疫检验质量控制的特殊性•免疫学检验方法的种类较多，其测定方法的灵敏度和特异性要比生化方法高得多，因此进行质量控制的手段不能照搬生化模式。•免疫检验质量控制包括定量、半定量和定性免疫检验三种类型。人民卫生出版社•标准品（standard）指含量明确的处于一定基质中其特性明确的物质，通常用于比较检测未知的物质或成分。•标准品质量的优劣直接影响样品的测定结果。一、标准品（一）标准品的概念和分类人民卫生出版社•根据标准品性质的差异，可分为三级：一级标准品二级标准品三级标准品为冻干品，内含载体蛋白，数量有限，可使用10~20年。通常为国际标准品，由WHO指定的实验室制备即国家标准品，是由国家的有关权威机构制备，供国家内部使用，其效价单位与国际标准品一致由二级标准品的比对而来的，通常由实验室自己或试剂生产厂家制备。人民卫生出版社标准品IU/支建立的年份Mg/IU类风湿关节炎血清10019650.1710抗核抗体血清(均质型)10019700.1860人血清IgG、IgA、IgM10019700.1847人血清IgD10019710.8100人血清IgE1150019730.06562人AFP10000019750.001399人CEA10019750.0236FITC—绵羊抗人Ig10019760.0594FITC—绵羊抗人IgMμ链10019780.0447血清蛋白(白蛋白、α1-抗胰蛋白酶、C3铜蓝蛋白、转铁蛋白)10019781.1140人补体成分(C4、C5、Clq、B因子)10019801.1070FITC—绵羊抗人IgGγ链10019810.0923过氧化物酶标记绵羊抗人Ig10019820.0316抗RNP抗体-1983-平滑肌抗体-1983-线粒体抗体-1983-免疫学检验质控常用国际标准品人民卫生出版社（二）理想标准品的基本条件在规定保存条件下具有良好的稳定性通常为含蛋白质的缓冲液，对测定结果无明显影响。无已知传染危险性，对已知的血液传播病原体必须做灭活处理。标准品的基本条件标准品浓度在方法的测定范围即可。标准品浓度在方法的测定范围即可。人民卫生出版社•定量免疫检验通常需要使用全自动免疫分析仪，在测定时须用校准品对仪器进行校准。•室内质控则应选择特定试剂盒或方法的测定范围内的高、中和低三种浓度的质控品，以监测不同浓度标本测定结果的变化。二、定量、半定量和定性免疫检验（一）定量免疫检验人民卫生出版社•半定量实验在免疫检验中比较少用，此类实验主要有酶免疫试验、荧光免疫试验等，测定结果通常以抗体的滴度、效价等表示。•半定量免疫检验质控要点在于在有阴性质控的前提下，采用多个相应滴度或效价的抗体作为室内质控品，与临床标本同时测定。（二）半定量免疫检验人民卫生出版社•定性免疫检验是免疫学检验的重点，其测定方法有很多，常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果。•定性测定的室内质控要点是控制测定下限，设置临界cutoff值（CO值）的低值弱阳性质控物是定性室内质控的关键。•应选择靶抗原或抗体浓度接近试剂盒或方法的测定下限的质控品进行室内质量控制，并与临床标本的测定同时进行，这一点对于使用肉眼判定测定结果的方法尤为重要（三）定性实验人民卫生出版社三、检测试剂的批间差异不同厂家不同批号产品的质量、技术含量的区别原料来源、纯度不同以及生产条件变动•利用可靠的定值血清对购入的试剂盒进行性能检测和批间差异评价，只有质量符合实验质量要求的试剂盒方可用于临床实际检测工作。地区储存、运输条件不同同一批号人民卫生出版社•引起试剂盒批间变异原因是多方面的：1、试剂盒的原材料是依靠生物工程技术生产的，生产技术要求难度大，工艺提纯方法不好掌握，质量控制要求较高，产品质量不易稳定，使每批原材料的纯度和活性都有所差别；2、用不同的提纯方法及不同批号的抗原或抗体所制备的试剂质量不一样；3、同一批号的原料，不同组装工艺，其结果也不尽一样；4、组装工艺相同，质量标准控制稍有欠缺，其结果也会有所差异。人民卫生出版社生产技术难度大质量控制要求较高每批原材料的纯度和活性都有所差别引起试剂盒批间变异原因是多方面的提纯方法不好掌握产品质量不易稳定人民卫生出版社四、检测试剂的稳定性•稳定性是体外检测诊断试剂随时间推移保持特性一致性的能力，是试剂必须具有的基本属性，是确保体外检测诊断试剂使用过程中安全有效的重要指标。•检测试剂的稳定性研究的类型一般分为保存期稳定性研究、使用期稳定性研究及运输模拟研究。人民卫生出版社•保存期稳定性研究主要用于确定体外诊断试剂在规定的保存条件下最终包装内的有效期，一般至少使用3批产品建立保存期要求。•使用期稳定性研究是指产品投入使用后产品保持活性的时间段，可以使用单一产品批号建立此类保存期要求。人民卫生出版社•运输模拟研究是将样本暴露于预先设定的改变的环境条件下用于模拟产品在到达消费者前的过程中所能忍受的最坏的环境条件，此研究结果用于确定检测试剂最适宜的运输和保存条件，要求检测试剂至少有1个产品批号通过这种测试。•目前欧盟有关体外检测诊断试剂的法规规定：对于长期稳定性研究，应采用3个批次产品；对于模拟运输条件下的稳定性研究，可采用1个批次产品；对于延长保存期限的稳定性研究，应采用3个批次产品；对于可能影响稳定性的变更，可采用1个批次的产品。人民卫生出版社•由于所用的仪器种类繁多，试剂盒品牌不一，实验室工作人员业务能力的差异等，造成不同实验室间的测定结果差异较大。人民卫生出版社•临床免疫检验试剂盒保质期一般为6个月以上，有些检验机构为了节约成本，分数次使用试剂盒，势必会使酶标抗原处于溶解状态，影响试验结果。•试剂盒抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成•抗体浓度越高（浓度大于10mg/ml），越稳定，易保存；浓度低时，应加0.1%~1.5%的牛血清白蛋白作保护剂。•酶标记抗体在应用防腐剂时要注意不能用NaN3。•抗体浓缩液应在-20℃保存，避免反复冻融。人民卫生出版社35第三节免疫学实验常用评价指标•临床上实验室免疫学检验的方法越来越多，如何对各种免疫学实验的进行对比，以评价各种检测方法的优劣，这需要通过一些有效的评价指标来鉴定。人民卫生出版社•诊断敏感性（sensitivityofdiagnosis）是指将实际患病者正确判断为真阳性的百分率，该指标值越大，则漏检的可能性愈小。一、诊断敏感性、特异性和正确诊断指数%100FNTPTP诊断敏感性•本指标可用于评价测定方法的临床应用价值，理想测定方法的诊断敏感性为100%。人民卫生出版社•诊断特异性（specificityofdiagnosis）是指将实际无病者正确判断为真阴性的百分率，该指标值越大，则误诊的可能性越小。%100FPTNTN诊断特异性•本指标是用于评价测定方法的临床应用价值，理想测定方法的诊断特异性应为100%。人民卫生出版社•正确诊断指数（Youdenindex）又称约登指数，是指比较两个试